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食品研究与开发 2012年第3期33卷 175-177页

作者：张平赵琳琳黑龙江八一农垦大学食品学院黑龙江大庆163319

以麦麸为原料经机械粉碎、稀酸预处理后,用纤维素酶和干酪乳酸菌进行同时糖化发酵生产乳酸。结果表明:酶添加量0.25%,接种量10%,温度50℃,pH4.5,反应48 h,得到发酵液乳酸含量为40.5 g/L。

关键词：麦麸纤维素酶干酪乳酸菌同时糖化发酵乳酸

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干酪乳杆菌冻干保护剂研究

中国食品学报 2013年第1期13卷 44-50页

作者：曾小群潘道东包红燕刘天祎徐慧娜宁波大学食品科学与工程系浙江宁波315211 南京师范大学国家乳品加工技术研发分中心南京210097

干酪乳杆菌为生产酸奶和奶酪的重要菌种,在真空冷冻干燥过程中会受到损伤,加保护剂可提高其存活率。通过计算干酪乳杆菌的存活率,利用单因素比较和响应面实验设计,确定冻干保护剂的最适配方。在单一保护剂作用筛选试验中,乳酸菌存活率... 详细信息

干酪乳杆菌为生产酸奶和奶酪的重要菌种,在真空冷冻干燥过程中会受到损伤,加保护剂可提高其存活率。通过计算干酪乳杆菌的存活率,利用单因素比较和响应面实验设计,确定冻干保护剂的最适配方。在单一保护剂作用筛选试验中,乳酸菌存活率较高的依次是:海藻糖、L-半胱氨酸、山梨醇、乙酸钠。复合保护剂作用中,干酪乳杆菌存活率最高的保护剂溶液配方为:海藻糖118.2g/L,L-半胱氨酸17.1g/L,山梨醇10.3g/L,乙酸钠1.7g/L,脱脂奶粉120g/L,干酪乳杆菌的存活率达98.74%。本试验结果对保存乳酸菌菌种和制备高活性发酵剂具有应用价值。

关键词：干酪乳酸菌冻干保护剂存活率

氮离子注入选育高自溶干酪乳杆菌及其肽聚糖水解酶的RT-qPCR分析

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食品与发酵工业 2020年第1期46卷 43-49页

作者：崔文明吕加平王小鹏赵莉君祝超智张秋会李苗云赵改名河南农业大学食品科学技术学院河南郑州450002 农业部农产品加工与质量控制重点开放实验室中国农业科学院农产品加工研究所北京100193

通过采用低能N^+注入对干酪乳杆菌116-a进行诱变,以筛选得到高自溶的干酪乳酸菌突变体,并采用实时荧光定量PCR检测N-乙酰胞壁质酶和N-乙酰氨基葡糖胺糖苷酶在野生菌体和突变体中的表达差异。结果显示:经过离子能量30 keV N^+注入诱变,... 详细信息

通过采用低能N^+注入对干酪乳杆菌116-a进行诱变,以筛选得到高自溶的干酪乳酸菌突变体,并采用实时荧光定量PCR检测N-乙酰胞壁质酶和N-乙酰氨基葡糖胺糖苷酶在野生菌体和突变体中的表达差异。结果显示:经过离子能量30 keV N^+注入诱变,在注入剂量0.5×10^15 ions/cm^2时,筛选得到遗传稳定性良好的最大正突变菌株,其自溶度为56.3%,最大正突变菌株自溶度比野生型菌株的自溶度提高了25.7%。实时荧光定量PCR检测发现,N-乙酰氨基葡糖苷酶和N-乙酰胞壁质酶在突变体中的表达量比野生菌体中的表达量均有所上调,其中N-乙酰氨基葡糖苷酶表达量上调了约55倍,而N-乙酰胞壁质酶的表达量仅上调2.8倍。因此,N-乙酰氨基葡糖苷酶在干酪乳杆菌116-a自溶中起着重要作用,该酶表达量的上调可以有效提高菌体的自溶。

关键词：干酪乳酸菌自溶离子注入肽聚糖水解酶

表达产肠毒素性大肠杆菌F41重组干酪乳杆菌免疫小鼠的保护性分析

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中国农业科学 2009年第11期42卷 4085-4092页

作者：刘建奎魏春华侯喜林余丽芸王桂华黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江八一农垦大学生命科技学院

【目的】利用干酪乳酸菌作为抗原传递系统来刺激机体产生黏膜免疫反应,从而研制有效的黏膜疫苗预防ETECF41的感染。【方法】重组菌在MRS培养基中进行表达,经SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白的表达,间接免疫荧光分析及流式细胞术检... 详细信息

【目的】利用干酪乳酸菌作为抗原传递系统来刺激机体产生黏膜免疫反应,从而研制有效的黏膜疫苗预防ETECF41的感染。【方法】重组菌在MRS培养基中进行表达,经SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白的表达,间接免疫荧光分析及流式细胞术检测外源蛋白展示到菌体表面。将重组菌及空质粒菌株分别滴鼻接种SPF级Balb/c小鼠,采集血液样品测定小鼠产生抗F41的特异性IgG,收集小鼠肺部冲洗液、肠道冲洗液、阴道冲洗液及粪便样品测定小鼠产生抗F41的特异性sIgA,并对小鼠进行攻毒保护性试验。【结果】重组干酪乳杆菌pLA-F41/L.casei免疫小鼠能够产生明显的抗F41的sIgA和IgG抗体水平,主动免疫组保护率在85%以上,对照组则全部死亡,被动免疫组新生幼鼠的保护率达80%,对照组保护率仅为5%。【结论】细胞表面锚定ETECF41菌毛蛋白的重组干酪乳杆菌pLA-F41/L.casei通过滴鼻途径免疫能够有效预防F41型ETEC的感染。

关键词： ETECF41 干酪乳酸菌滴鼻免疫保护率

J亚群禽白血病病毒gp85重组干酪乳杆菌表达及其免疫效果的研究

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J亚群禽白血病病毒gp85重组干酪乳杆菌表达及其免疫效果的研究

作者：才冬杰山东农业大学

学位级别：硕士

J亚群禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus subgroup J, ALV-J）是1988年首次在肉用型鸡中分离得到，主要引发鸡的髓细胞组织增生和肾瘤。该病已经迅速蔓延到许多国家，给世界养禽业造成巨大的损失。目前还没有商品化的疫苗用于防治ALV-... 详细信息

J亚群禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus subgroup J, ALV-J）是1988年首次在肉用型鸡中分离得到，主要引发鸡的髓细胞组织增生和肾瘤。该病已经迅速蔓延到许多国家，给世界养禽业造成巨大的损失。目前还没有商品化的疫苗用于防治ALV-J感染，国外主要通过净化种鸡群的办法来防控ALV-J。但是由于养殖的大环境已经污染，所以只依靠净化来完全控制ALV-J感染是不可能的。最近几年，许多专家学者也都尝试研制ALV-J灭活苗和弱毒苗，但是由于灭活病毒的同时也破坏了其诱导产生抗体的能力，而且该病毒的抗原结构复杂，要想得到理想的弱毒苗十分困难。因此，研制新型有效的ALV-J疫苗势在必行。由于大多数病毒和细菌都是通过黏膜侵入动物机体，所以利用活载体呈递抗原到黏膜组织，从而诱导黏膜免疫应答来抵抗大量的细菌病毒的入侵的这种途径是十分有效的。近年来乳酸菌口服疫苗已成为研制的热点，利用乳酸菌作为表达外源保护性抗原基因的活载体菌株，能将乳酸菌的生物学功能和外源抗原基因的免疫原性相结合，同时乳酸菌作为正常生理性细菌，又符合新型疫苗的安全、方便、廉价等特点。本研究的目的是探究原核表达J亚群禽白血病病毒gp85囊膜蛋白诱导雏鸡产生保护性抗体及抗ALV-J感染的作用。本研究利用PCR技术从J亚群禽白血病病毒env基因中扩增出gp85囊膜糖蛋白基因;将其克隆至大肠-乳酸杆菌穿梭表达载体pMG36e中，转入干酪乳酸杆菌，并使其表达。利用Western-blot、流式细胞技术和间接免疫荧光检测蛋白的表达含量和活性，并将含重组质粒的干酪乳酸菌口服或滴鼻免疫SPF鸡，免疫接种后检测不同时间段抗体水平;同时在免疫7周后，对试验鸡进行攻毒保护性试验。结果表明，重组干酪乳杆菌pMG36e-gp85/L.casei免疫雏鸡后能够产生明显的抗体水平;对照组病毒血症平均检出率为86%，而口服组和滴鼻组病毒血症平均检出率为40%和55.2%;由此可见，构建的重组干酪乳杆菌pMG36e-gp85/L.casei对禽白血病病毒具有一定的抵抗力。本研究的完成，首次利用干酪乳酸杆菌表达载体对禽白血病病毒囊膜蛋白gp85基因进行表达，为J亚群禽白血病重组乳酸菌口服疫苗的研制提供可靠的科学依据，同时也为其他囊膜病毒禽病的防治提供新的方法和思路。

关键词： J亚群禽白血病 GP85 干酪乳酸菌 pMG36e 口服免疫

干酪乳杆菌刺激肠细胞产生抗菌肽的筛选及其对肠上皮细胞增殖作用研究

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干酪乳杆菌刺激肠细胞产生抗菌肽的筛选及其对肠上皮细胞增殖作用...

作者：白永飞黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

抗菌肽（Antimicrobial peptides,AMPs）是具有抗菌,抗病毒活性的小分子肽,一般包含20-50个氨基酸残基,带正电荷且为双亲性分子结构。AMP的多样性和抵抗病原微生物功能使其成为抗微生物药物和防腐剂研究的热点。某些乳酸杆菌会刺激肠道... 详细信息

抗菌肽（Antimicrobial peptides,AMPs）是具有抗菌,抗病毒活性的小分子肽,一般包含20-50个氨基酸残基,带正电荷且为双亲性分子结构。AMP的多样性和抵抗病原微生物功能使其成为抗微生物药物和防腐剂研究的热点。某些乳酸杆菌会刺激肠道细胞分泌抗菌肽,清除肠道病原体,保护机体肠道屏障。筛选干酪乳杆菌刺激肠道上皮细胞分泌的抗菌肽,用于动物饲料添加剂,有效抵抗某些肠道病原微生物,保护动物肠道上皮细胞的完整性,对促进绿色健康的养殖业具有理论意义和应用价值。因此,本研究通过高通量测序技术对饲喂乳酸菌的小鼠肠道组织进行分析,筛选表达量高的抗菌肽;并探究体外表达抗菌肽抗菌活性、抗病毒活性、促细胞增殖迁移能力,为研发广谱型肠道抗菌修复制剂提供理论基础。本研究采用高通量转录组测序技术,对饲喂干酪乳酸菌的小鼠肠道组织进行数据分析,筛选了表达量高的抗菌肽基因,并使用q RT-PCR进行了验证;利用大肠杆菌原核表达系统对筛选出的抗菌肽进行了原核表达,并采用蛋白免疫印迹技术（Western Blot）验证了表达正确的抗菌肽;利用蛋白纯化系统对表达蛋白进行了纯化,随后纯化蛋白与肠毒素性大肠杆菌（ETEC）参考毒株ETEC-K88、ETEC-K99和ETEC-987p共孵育,验证抗菌肽抑制细菌增殖能力;应用CCK-8、细胞划痕实验了解抗菌肽促进肠上皮细胞增殖与迁移作用;Western Blot技术研究了抗菌肽刺激肠上皮细胞后紧密连接相关蛋白的表达情况,同时检测抗菌肽刺激肠上皮细胞后能否激活m TOR和Wnt/β-Catenin细胞信号通路。经转录组分析筛选出5个抗菌肽基因,分别是Defa39、Defa35、Defa38、Reg3a、Reg1。经表达载体构建、原核表达后发现Defa39、Defa35、Defa38无法进行表达;经Western Blot实验验证显示重组抗菌肽蛋白Reg3a与Reg1条带大小与预期结果一致;原核表达获得的重组抗菌肽蛋白具有在体外显著抑制ETEC-K88、ETEC-K99和ETEC-987p增殖能力;体外表达的重组抗菌肽激活了m TOR信号通路和Wnt/β-catenin上游信号通路;CCK-8细胞增殖实验揭示了抗菌肽Reg3a与Reg1促进了IPEC-J2与IEC-6细胞的增殖;两种肠道上皮细胞划痕实验与Western Blot实验表明抗菌肽Reg3a与Reg1促进了肠上皮细胞迁移,并且增强了紧密连接相关蛋白的表达。综上所述,体外表达重组抗菌肽蛋白Reg3a和Reg1对肠道致病菌有良好的抑制增殖作用;可能通过m TOR信号通路和Wnt/β-catenin信号通路促进肠道上皮细胞的增殖与迁移,并促进细胞间紧密连接的形成。

关键词：干酪乳酸菌抗菌肽肠道上皮细胞增殖

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解磷、解钾根际促生菌的筛选与鉴定

山东林业科技 2013年第6期43卷 1-4页

作者：马海林杜秉海邢尚军丁延芹刘方春姚良同马丙尧杜振宇山东省林业科学研究院山东省森林植被生态修复工程技术研究中心山东济南250014 山东农业大学生命科学学院

试验从樱桃根围采集根际土壤样品,采用MRS培养基和改良麦氏培养基,分别在28℃、37℃条件下培养2~3d,进行分离,利用系列稀释涂布平板筛选出分离物DY-3和DY-4。根据菌体形态、菌落形态观察和生理生化试验结果,结合18S或16SrDNA序列的测定,... 详细信息

试验从樱桃根围采集根际土壤样品,采用MRS培养基和改良麦氏培养基,分别在28℃、37℃条件下培养2~3d,进行分离,利用系列稀释涂布平板筛选出分离物DY-3和DY-4。根据菌体形态、菌落形态观察和生理生化试验结果,结合18S或16SrDNA序列的测定,将DY-3鉴定为酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae),DY-4鉴定为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)。测其解磷解钾能力,酿酒酵母菌DY-3有较好的解钾能力,干酪乳杆菌DY-4有较好的解磷能力。因此,该研究筛选的2菌株可望进一步研究开发成为微生物肥料的生产菌种。

关键词：干酪乳酸菌酿酒酵母菌解磷解钾

干酪乳杆菌N1115对人结肠癌细胞增殖活性影响

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预防医学论坛 2016年第2期22卷 81-84页

作者：寻晓爽翟辛谊王晗吴迪李敏何方四川大学华西公共卫生学院四川成都610041

目的通过体外实验探讨干酪乳酸菌N1115对人结肠癌细胞的增殖活性的影响。方法于2014年4月至2015年4月进行相关研究,通过人结肠癌上皮细胞的培养,确定最佳细胞铺板密度和培养时间;干酪乳酸菌N1115的培养,配置不同浓度的灭活菌悬液及细菌... 详细信息

目的通过体外实验探讨干酪乳酸菌N1115对人结肠癌细胞的增殖活性的影响。方法于2014年4月至2015年4月进行相关研究,通过人结肠癌上皮细胞的培养,确定最佳细胞铺板密度和培养时间;干酪乳酸菌N1115的培养,配置不同浓度的灭活菌悬液及细菌培养上清液;用MTT法研究不同浓度灭活菌液、细菌发酵液及细菌与巨噬细胞J774.1共同培养液作用12、24、48h对人结肠癌上皮细胞增殖的抑制作用。结果发酵液除12与28h的5%配比时与对照组无差异,其余各组与对照组的差异均有统计学意义(P菌增殖抑制率均大于0.86,各实验组间差异无统计学意义(P>0.05);共培液5%和10%配比培养24h时与对照组差异有统计学意义(P菌增殖抑制率约为0.2,其余各组均与对照组差异无统计学意义(P>0.05),各实验组间差异无统计学意义(P菌液与对照组差异均无统计学意义(P>0.05),组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论干酪乳酸菌N1115发酵液对人结肠癌细胞的增殖有显著抑制作用,灭活菌悬液及J细胞共培液对人结肠癌细胞增殖抑制作用不明显。

关键词：干酪乳酸菌结肠癌抗肿瘤