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HO-1诱导静脉内皮细胞VEGF、SDF-1表达促进DVT机化再通的研究

HO-1诱导静脉内皮细胞VEGF、SDF-1表达促进DVT机化再通的研究

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作者：董忠礼昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]1.利用异氟烷麻醉方法和下腔静脉狭窄法构建DVT机化再通模型;使用血红素加氧酶-1的激动剂(CoPPIX)及抑制剂(SnPPIX)干预C57小鼠DVT的溶解再通过程,并观察各组小鼠DVT模型的死亡率、成栓率,下腔静脉血栓的长度、湿重和病理切片的... 详细信息

[目的]1.利用异氟烷麻醉方法和下腔静脉狭窄法构建DVT机化再通模型;使用血红素加氧酶-1的激动剂(CoPPIX)及抑制剂(SnPPIX)干预C57小鼠DVT的溶解再通过程,并观察各组小鼠DVT模型的死亡率、成栓率,下腔静脉血栓的长度、湿重和病理切片的变化差异。2.检测C57小鼠下腔静脉壁和血栓的HO-1、VEGF和SDF-1的表达情况,探讨HO-1、 VEGF和SDF-1在DVT溶解中后期的作用及相互关系。[材料与方法]实验一：下腔静脉狭窄法构建C57小鼠DVT模型及观察HO-1激动剂及抑制剂对DVT机化再通过程的影响1.实验分组及DVT模型的构建：C57小鼠200只,体重25-30g,雌性。按随机分组原则分A组(空白对照组,n=20)、B组(正常DVT组,n=60)、C组(CoPPIX干预组,n=60)组和D组(SnPPIX干预组,n=60)。C组和D组在造模前24h分别腹腔注射CoPPIX和SnPPXI,5mg/kg;B组腹腔注射等量的生理盐水。给药24小时后B、C、D采用异氟烷麻醉配合下腔静脉狭窄法构建DVT模型。2.取材：在造模后4、7、10、13天,采取颈椎脱臼法处死小鼠,采用游标卡尺测量血栓长度,取下结扎点至髂总静脉汇合处之间下腔静脉及其内容物,每个时间点每组中随机取3只小鼠DVT标本,使用4%多聚甲醛浸泡固定,保存行病理检查;其余标本分离血栓与静脉壁,称取血管内的血栓湿重,静脉壁和内容物分装后-80°保存备用。3.指标测定和统计学分析：统计每组死亡率、成栓率、血栓长度和湿重变化情况。统计学软件采用SPSS19.0,计量资料采用均数±标准差(x±s);同一时间点,组间两两比较采用单因素方差分析、用LSD法(最小二乘法),*p1、VEGF和SDF-1的mRNA达变化***法提取每组小鼠不同时间点下腔静脉中总RNA, RT-PCR将各组小鼠静脉组织RNA逆转录为cDNA;以GAPDH为内参照,用Real-time PCR法检测不同时间点HO-1、VEGF和SDF-1 mRNA的表达变化;2.统计学分析：统计学软件采用SPSS19.0o计量资料采用均数±标准差(x±s);同一时间点,组间两两比较采用单因素方差分析,用LSD法(最小二乘法),*p1激动剂及抑制剂对DVT机化再通过程的影响1.麻醉效果：实验开始使用3%-5%异氟烷对C57小鼠进行快速诱导,术中使用0.5%-1.0%浓度的异氟烷能维持满意的麻醉效果。诱导达到麻醉满意时间和术后清醒时间均很快,约1-2min,麻醉过程中小鼠出现的最大不良反应为呼吸抑制,但停止麻醉药或加大空气流量后,小鼠呼吸抑制的情况可迅速缓解.2.小鼠存活情况和死亡率：A、D两组死亡率为0%,B、C两组总死亡率分别为1.67%3.各组模型的总成栓率：A组小鼠成栓率为0%,B、C、D组总成栓率分别为69.4%、62.7%、83.3%4.不同时间点各组模型中的DVT长度变化情况：各组的DVT长度经单因素方差分析比较后显示：第4天时,C组、D组的DVT长度和B组相比无明显统计学差异,但C组与D组之间比较时P=0.018,P10天时,C、D组的DVT长度和正常组相比无明显统计学差异, C组与D组之间比较时P=0.003,P13天时,B、C、D各组间两两比较均存存明显的统计学差异,尤其是C组和D组之间,P1。最后,该实验比较了各组第4天到第13天的DVT长度的平均值减少比例,结果显示,B、C、D组DVT长度平均减少量分别为2.19mm、2.74mm、2.16mm,各组的减少比例分别为37.6%、49.5%和31.9%。5.不同时间点各组模型中的DVT湿重变化情况：各组的DVT湿重经单因素方差分析比较后显示：第4天时,B、C组之间无明显统计学差异,P=0.719,但B、C组与D组之间存在明显统计学差异,P值分别为0.013和0.01,均小于0.05;第7天时,B组与C、D组之间比较无统计学差异,而C组和D组之间比较,P=0.019,两组之间DVT湿重存在明显统计学差异;第10天时,B组和C组之间无明显统计学差异,P=0.365,B、C组与D组之间存在明显统计学差异,P值分别为0.008和0.001,第13天时,第13天时B、C、D组之间两两比较均存在明显的统计学差异,P值均1。最后,该实验比较了了各组第4天到第13天的DVT湿重的平均值减少比例,结果显示,B、C、D组DVT湿重平均减少量分

关键词：深静脉血栓机化再通血红素加氧酶-1 血管内皮生长因子干细胞源性生长因子-1

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