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敲减免疫调节蛋白B7-H3基因对膀胱癌细胞恶性增殖、侵袭和干细胞样特性的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2021年第11期41卷 1454-1460页

作者：王晓寒叶云林肖康华赵志鑫吴静雅河南护理职业学院外科教研室安阳455000 中山大学附属肿瘤医院泌尿肿瘤科广州510030 河南护理职业学院药学教研室安阳455000 河南省安阳地区医院中医科安阳455000

目的·探讨干扰免疫调节蛋白B7-H3基因对膀胱癌J82细胞的恶性增殖和干细胞样特性的影响。方法·shRNA干扰效率的检测采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)。J82细胞增殖采用克隆形成实验... 详细信息

目的·探讨干扰免疫调节蛋白B7-H3基因对膀胱癌J82细胞的恶性增殖和干细胞样特性的影响。方法·shRNA干扰效率的检测采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)。J82细胞增殖采用克隆形成实验检测。细胞凋亡采用流式细胞术检测。细胞侵袭采用Transwell检测。肿瘤克隆能力采用肿瘤成球实验观察。细胞凋亡、侵袭和干细胞样相关蛋白表达采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测。结果·B7-H3在膀胱癌组织及膀胱癌细胞系中高表达(P=0.000)。确定shRNA2为设计的3组shRNAs中干扰B7-H3基因效率最高(P=0.000)。B7-H3干扰抑制了J82细胞的增殖、侵袭、肿瘤克隆能力及干细胞样特性(P=0.000)。并且,B7-H3干扰促进了J82细胞的凋亡(P=0.000)。结论·免疫调节蛋白B7-H3基因干扰可对膀胱癌J82细胞的恶性增殖、侵袭及干细胞样特性产生抑制作用。

关键词： B7-H3 膀胱癌 J82细胞干细胞样特性

上皮-间质转化胶质瘤细胞的干细胞样特性及白藜芦醇对其干细胞样特性的抑制作用

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吉林大学学报（医学版） 2018年第6期44卷 1185-1189页

作者：赵丽艳宋扬吕晓艳贾茗博朱洪权吉林大学第二医院检验科吉林长春130041 吉林大学第一医院神经外科吉林长春130021

目的:探讨发生上皮-间质转化(EMT)的胶质瘤细胞的干细胞样特性,阐明白藜芦醇(Res)对其干细胞样特性的抑制作用。方法:采用TGF-β1诱导胶质瘤U87细胞发生EMT,倒置显微镜观察细胞的形态表现,Western blotting法检测细胞间质标志物N-钙黏蛋... 详细信息

目的:探讨发生上皮-间质转化(EMT)的胶质瘤细胞的干细胞样特性,阐明白藜芦醇(Res)对其干细胞样特性的抑制作用。方法:采用TGF-β1诱导胶质瘤U87细胞发生EMT,倒置显微镜观察细胞的形态表现,Western blotting法检测细胞间质标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和诱导EMT的转录因子(Snail、Slug、Zeb1和Twist1)表达水平。确定胶质瘤细胞发生EMT后,实验分为对照组(U87细胞不做处理)、EMT组(TGF-β1诱导胶质瘤细胞发生EMT)和Res处理组(Res处理发生EMT的U87细胞),检测各组胶质瘤U87细胞二代胶质球形成数和细胞中干细胞标志物(Bmi1和Sox2)表达水平。结果:经TGF-β1处理48h的胶质瘤U87细胞表现出分散、拉长和类似成纤维细胞的外观。与对照组比较,不同浓度TGF-β1组胶质瘤细胞中N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、Zeb1和Twist1表达水平明显升高(P细胞发生EMT改变。与对照组比较,EMT组胶质瘤U87细胞二代胶质球形成数明显增多(P细胞中干细胞标志物Bmi1和Sox2表达水平升高(P细胞二代胶质球形成数明显减少(P细胞中干细胞标志物Bmi1和Sox2表达水平明显降低(P细胞呈现干细胞样特性,Res能抑制其干细胞样特性。

关键词：胶质瘤细胞上皮-间质转化干细胞样特性白藜芦醇

LncCCAT1竞争性结合miR-583p通过调节MAPK13的表达调控乳腺癌细胞干细胞样特性

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安徽医科大学学报 2021年第5期56卷 762-768页

作者：庄欢朱晓磊吴晓琴张庆方靖吴池华四川省医学科学院·四川省人民医院乳腺科成都610031

目的探究LncCCAT1竞争性结合miR-583p,通过调节MAPK13的表达对MCF-7细胞干细胞样特性的影响。方法从MCF-7细胞中分离乳腺癌肿瘤干细胞,q-PCR检测贴壁细胞、悬浮球细胞和再贴壁细胞中CCAT1和miR-583p表达;单独或联合转染shRNA-CCAT1-2和m... 详细信息

目的探究LncCCAT1竞争性结合miR-583p,通过调节MAPK13的表达对MCF-7细胞干细胞样特性的影响。方法从MCF-7细胞中分离乳腺癌肿瘤干细胞,q-PCR检测贴壁细胞、悬浮球细胞和再贴壁细胞中CCAT1和miR-583p表达;单独或联合转染shRNA-CCAT1-2和miR-583p inhibitor至MCF-7细胞,测miR-583p表达;荧光素酶报告实验验证miR-583p与CCAT1靶向关系;将细胞分为4组:对照组、shRNA-CCAT1-2组、miR-583p inhibitor组、shRNA-CCAT1-2+miR-583p inhibitor组。ALDEFLUOR分析法检测乙醛脱氢酶(ALDH)活性;Western blot检测Y框蛋白2(SOX2)、NANOG、乙醛脱氢酶1(ALDH1)蛋白表达水平;成球实验检测细胞成球直径;构建慢病毒LV-MAPK13并感染MCF-7细胞过表达MAPK13,q-PCR检测MAPK13水平,将细胞分为4组:对照、shRNA-CCAT1-2、LV-MAPK13和shRNA-CCAT1-2+LV-MAPK13组,Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)、SOX2、NANOG、ALDH1蛋白表达水平。结果与贴壁细胞相比较,悬浮球细胞CCAT1表达水平升高(P细胞相比较,悬浮球细胞MAPK13水平升高(P细胞干细胞样特性。

关键词：乳腺癌 CCAT1 miR-583p MAPK13 干细胞样特性

HOXC10通过靶向调控CST1的表达对肺癌细胞干细胞样特性的作用研究

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河北医学 2022年第7期28卷 1071-1076页

作者：康建军高乐席俊峰陕西省榆林市第一医院呼吸内科陕西绥德718000

目的:探究HOXC10通过靶向调控CST1的表达对肺癌细胞干细胞样特性的作用。方法:肺癌细胞系A549在无血清培养条件下形成肿瘤球,WB分别检测HOXC10及干性标志蛋白CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4的表达。构建ShNC、ShHOXC10 A549细胞,检测... 详细信息

目的:探究HOXC10通过靶向调控CST1的表达对肺癌细胞干细胞样特性的作用。方法:肺癌细胞系A549在无血清培养条件下形成肿瘤球,WB分别检测HOXC10及干性标志蛋白CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4的表达。构建ShNC、ShHOXC10 A549细胞,检测干性标志蛋白CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4的表达,肿瘤成球实验检测细胞自我更新能力,CCK8法检测细胞增殖能力。构建ShNC、ShHOXC10肺癌小鼠皮下瘤模型,测定肿瘤体积和重量,免疫组织化学法检测HOXC10、CST1和干性蛋白标志蛋白CD44、CD133在肿瘤组织中的表达。qPCR和WB法检测ShNC、ShHOXC10组A549细胞中CST1 mRNA和蛋白表达,ChIP-PCR和ChIP-qPCR检测HOXC10和CST1启动子序列结合,双荧光素酶报告基因验证HOXC10对CST1启动子活性的调控。在ShHOXC10细胞中回补pcDNA3.1-CST1,检测CST1过表达对干性标志蛋白CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4表达及肿瘤成球和细胞增殖的影响。结果:HOXC10在A549细胞肿瘤球中高表达,敲低HOXC10显著抑制干性蛋白标志CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4的表达,抑制A549细胞的增殖和肿瘤成球能力,皮下瘤实验显示,敲低HOXC10抑制A549细胞的成瘤能力(P细胞中过表达CST1显著上调干性蛋白标志CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4的表达,增强A549细胞的增殖和肿瘤成球能力。结论:在肺癌细胞中HOXC10通过CST1调控肺癌细胞干细胞样特性。

关键词：肺癌 HOXC10 CST1 干细胞样特性

NSE通过NBL1激活BMP2/Smad/ID1途径增强小细胞肺癌干细胞样特性

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NSE通过NBL1激活BMP2/Smad/ID1途径增强小细胞肺癌干细胞样特性

作者：查志强华南理工大学

学位级别：硕士

肺癌是极为常见的癌症,也是死亡率最高的恶性肿瘤。小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)是肺癌中恶性程度最高的肿瘤类型,约占肺癌的15%,具有进展快、转移早、易复发等高度恶性肿瘤的特点。目前SCLC的治疗主要是化疗和放疗,但治疗... 详细信息

肺癌是极为常见的癌症,也是死亡率最高的恶性肿瘤。小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)是肺癌中恶性程度最高的肿瘤类型,约占肺癌的15%,具有进展快、转移早、易复发等高度恶性肿瘤的特点。目前SCLC的治疗主要是化疗和放疗,但治疗后容易复发。此外,免疫治疗、靶向治疗等未能使多数患者受益。因此,SCLC患者的生存预后极差,5年生存率约7%,迫切需要探索新的有效的治疗策略。神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)常被用于SCLC的辅助诊断、疗效判断和预后监测等方面,但NSE在SCLC中的功能及作用机制尚不明确。本研究旨在明确NSE在SCLC中的功能及作用机制,为SCLC患者的治疗提供新的有效的思路和方向。首先,我们通过流式细胞分析术发现NSE能够增加SCLC细胞中ALDH的癌症干细胞比例;无血清球状克隆、细胞增殖和耐药等功能实验的结果表明NSE能够促进SCLC细胞的球状克隆形成、细胞增殖和耐药性;q RT-PCR和Western blot实验结果表明NSE能够促进SCLC细胞表达干性相关基因SOX2、Nanog、OCT4等;裸鼠皮下移植瘤实验发现NSE能够促进体内SCLC肿瘤生长。进一步通过RNA-seq及细胞功能等实验发现,NSE是通过NBL1激活BMP2/Smad/ID1途径,从而增强SCLC细胞的干细胞样特性;接着,通过Co-IP、Western blot等实验发现NSE能够通过糖酵解途径下调NBL1的表达并与NBL1相互作用,从而增强BMP2与其受体BMPR1A相互作用,激活BMP2/Smad/ID1途径。最后,在临床SCLC肿瘤组织中通过免疫组化实验及临床资料的分析发现NSE和ALDH1A1的表达水平成正相关,与NBL1表达水平负相关;NSE和ALDH1A1高表达、NBL1低表达与SCLC患者较短的生存期相关。本研究阐明了NSE增强SCLC干细胞样特性的作用及分子机制。NSE可能通过糖酵解途径抑制NBL1的表达并与NBL1相互作用,从而减弱NBL1对BMP2的竞争性抑制,增强BMP2与其受体BMPR1A的相互作用,进而激活BMP2/Smad/ID1途径,增强SCLC细胞的干细胞样特性,促进肿瘤细胞球状克隆形成、增殖、耐药和体内肿瘤生长。总之,本研究为SCLC患者的治疗提供了新的理论基础和潜在的生物靶点,具有重要的临床意义。

关键词：小细胞肺癌神经元特异性烯醇化酶神经母细胞瘤形成抑制因子1 干细胞样特性

基因干扰miR-105抑制非小细胞肺癌细胞的干细胞样特性、恶性增殖和侵袭

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安徽医科大学学报 2021年第1期56卷 33-37页

作者：李纪远马新张灿斌王献郑帅玉尚自强河南科技大学第一附属医院胸外科洛阳471000 河南科技大学第一附属医院风湿科洛阳471000

目的探究基因干扰miR-105对非小细胞肺癌细胞的干细胞样特性、恶性增殖和侵袭的影响。方法 RT-PCR检测33例肺癌患者肺组织及癌旁组织中miR-105表达水平。转染miR-105 inhibitor至A549细胞,将细胞随机分为3组(Control、inhibitor-NC、miR... 详细信息

目的探究基因干扰miR-105对非小细胞肺癌细胞的干细胞样特性、恶性增殖和侵袭的影响。方法 RT-PCR检测33例肺癌患者肺组织及癌旁组织中miR-105表达水平。转染miR-105 inhibitor至A549细胞,将细胞随机分为3组(Control、inhibitor-NC、miR-105 inhibitor组)进行后续实验。RT-PCR检测miR-105表达水平;成球实验检测细胞成球率、成球直径;Weslern blot检测SOX2、OCT4蛋白表达水平;流式分选检测CD133+细胞数;克隆形成实验检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;Weslern blot检测VEGF蛋白表达水平。结果癌旁组织中miR-105表达水平低于癌组织。与Control组相比较,miR-105 inhibitor组miR-105表达水平降低(P细胞成球率、成球直径降低(P细胞数降低(P细胞数降低(P细胞肺癌细胞的干细胞样特性、恶性增殖和侵袭。

关键词：非小细胞肺癌 miR-105 干细胞样特性侵袭

TGFβ通过非经典AKT-FOXO3a轴诱导口腔鳞状细胞癌干细胞样特性

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TGFβ通过非经典AKT-FOXO3a轴诱导口腔鳞状细胞癌干细胞样特性

TGFβ通过非经典AKT-FOXO3a轴诱导口腔鳞状细胞癌干细胞样特性

2020年中华口腔医学会口腔生物医学专业委员会第十次全...

作者：李静远李侃杨乐梁玉洁廖贵清中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院口腔颌面外科广东省口腔医学重点实验室

目的:FOXO3a曾被认为在肿瘤中发挥抑癌功能,但新进研究表明,FOXO3a在调节肿瘤的干细胞样特性中发挥重要作用。干细胞样特性是包括口腔鳞状细胞癌的多种肿瘤发生、耐药和复发的重要因素。本研究旨在揭示FOXO3a和其所处的TGFβ非经典通路... 详细信息

目的:FOXO3a曾被认为在肿瘤中发挥抑癌功能,但新进研究表明,FOXO3a在调节肿瘤的干细胞样特性中发挥重要作用。干细胞样特性是包括口腔鳞状细胞癌的多种肿瘤发生、耐药和复发的重要因素。本研究旨在揭示FOXO3a和其所处的TGFβ非经典通路对调控口腔鳞状细胞癌的重要作用。方法:通过Westernbolt和免疫组化检测口腔鳞状细胞癌组织和细胞系中FOXO3a的表达情况。以慢病毒构建差异表达FOXO3a的稳转细胞系,并在体内与体外进一步检测FOXO3a对干细胞样特性的调控。此外,我们检测了TGFβ对FOXO3a表达量及功能的影响。结果:FOXO3a广泛表达于口腔鳞状细胞癌中,并负向调控其干细胞样特性。TGFβ通过磷酸化、浆转移、降解FOXO3a干扰这种负向调控的功能。我们发现非经典AKT-FOXO3a轴在TGFβ调控口腔鳞癌干细胞样特性中发挥重要作用。结论:TGFβ通过非经典AKT-FOXO3a轴诱导口腔鳞状细胞癌干细胞样特性。

关键词： FOXO3a 口腔鳞状细胞癌干细胞样特性 TGFβ

来源： cnki会议评论

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TGFβ通过非经典AKT-FOXO3a轴诱导口腔鳞状细胞癌干细胞样特性

木犀草素抑制ERK1/2与p38 MAPK的活化介导鼻咽癌CNE1细胞的生长、移动性和肿瘤干细胞样特性

2020年全国口腔颌面-头颈肿瘤学术大会暨中华口腔医学...

作者：李侃杨乐李静远王涛梁玉洁廖贵清中山大学附属口腔医院广东省口腔医学重点实验室

研究目的:FOXO3a曾被认为在肿瘤中发挥抑癌功能,但新进研究表明,FOXO3a在调节肿瘤的干细胞样特性中发挥重要作用。干细胞样特性是包括口腔鳞状细胞癌的多种肿瘤发生、耐药和复发的重要因素。本研究旨在揭示FOXO3a和其所处的TGFβ非经典... 详细信息

研究目的:FOXO3a曾被认为在肿瘤中发挥抑癌功能,但新进研究表明,FOXO3a在调节肿瘤的干细胞样特性中发挥重要作用。干细胞样特性是包括口腔鳞状细胞癌的多种肿瘤发生、耐药和复发的重要因素。本研究旨在揭示FOXO3a和其所处的TGFβ非经典通路对调控口腔鳞状细胞癌的重要作用。

关键词： FOXO3a 口腔鳞状细胞癌干细胞样特性 TGFβ

来源： cnki会议评论

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中医学报 2021年第6期36卷 1285-1291页

作者：陈进芬刘平陈静吴志勇华清泉王兰应城市人民医院湖北应城432400 武汉大学人民医院湖北武汉430000 武汉科技大学附属医院湖北武汉430000

目的:探索木犀草素对鼻咽癌CNE1细胞生长、移动性和肿瘤干细胞样特性的影响,及对相关蛋白表达的影响。方法:将CNE1细胞随机分为4组,对照组用含正常血清的DMEM培养基培养,其余3组细胞的血清DMEM培养基中分别加入5、10、20 mg·L^(-1)木... 详细信息

目的:探索木犀草素对鼻咽癌CNE1细胞生长、移动性和肿瘤干细胞样特性的影响,及对相关蛋白表达的影响。方法:将CNE1细胞随机分为4组,对照组用含正常血清的DMEM培养基培养,其余3组细胞的血清DMEM培养基中分别加入5、10、20 mg·L^(-1)木犀草素,EdU渗入检测细胞增殖状态;免疫印迹法检测Ki67、Bcl-2/Bax、Survivin、c-Myc、VEGF、Vimentin、Fibronectin的表达及ERK1/2和p38 MAPK的磷酸化水平;Transwell实验观察细胞侵袭情况;肿瘤细胞成球实验检测肿瘤干细胞样特性;RT-PCR检测干细胞标记物CD33、SOX-2、OCT4的mRNA表达水平。结果:木犀草素抑制鼻咽癌CNE1细胞的增殖(P细胞数明显减少,肿瘤干细胞成球直径和数目均显著减少(P细胞的生长和运动,降低鼻咽癌干细胞样特性。

关键词：木犀草素 ERK1/2 p38 MAPK 鼻咽癌生长运动干细胞样特性