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小鼠肌源性干细胞高表达CD34、Sca-1、Bcl-2和desmin

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中国病理生理杂志 2011年第2期27卷 332-337页

作者：韦喆张金明安庚冀晨阳潘淑娟中山大学孙逸仙纪念医院整形外科广东广州510120

目的:探讨小鼠肌源性干细胞(MDSCs)的生物学特性和表型。方法:取小鼠骨骼肌,用酶分步消化,应用差速贴壁法进行纯化获取MDSCs,观察细胞的形态,对MDSCs分别进行增殖能力、克隆形成率和融合情况等鉴定;通过流式细胞术、免疫荧光法及免疫印... 详细信息

目的:探讨小鼠肌源性干细胞(MDSCs)的生物学特性和表型。方法:取小鼠骨骼肌,用酶分步消化,应用差速贴壁法进行纯化获取MDSCs,观察细胞的形态,对MDSCs分别进行增殖能力、克隆形成率和融合情况等鉴定;通过流式细胞术、免疫荧光法及免疫印迹法(Western blotting)等检测初步确定细胞表型。结果:经差速贴壁法获取的MDSCs为圆形或短梭形细胞,聚集成簇,呈对数生长;细胞倍增时间(9.69±2.08)h,克隆形成率(13.35±2.54)%;细胞在高汇合度(>50%)或低血清(2%FBS)培养时,极易融合成肌管或肌细胞链;流式细胞术和免疫荧光技术鉴定:CD34、Sca-1、Bcl-2和desmin在原代MDSCs中的表达均>90%;Western blotting检测显示随着细胞的纯化,desmin表达越来越强,α-SMA表达越来越弱。结论:MDSCs通过差速贴壁法获取时纯度较高,它具有高水平表达CD34、Sca-1、Bcl-2和desmin的生物学特性,这4种蛋白可作为鉴定MDSCs的标志物。MDSCs增殖旺盛,可在体外大量扩增,是组织工程研究的一种新型种子细胞。

关键词：肌源性干细胞 Preplate技术细胞表型 CD34 干细胞抗原1 蛋白质Bcl-2 结蛋白

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大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞的分离及鉴定

中国组织工程研究与临床康复 2011年第14期15卷 2592-2596页

作者：许立军钟隆飞单玉喜薛波新陈岽苏州大学附属第二医院泌尿外科江苏省苏州市215004

背景：前期研究在大鼠阴茎海绵体组织中检测到了具有干细胞标志物及肌源性标志物的干细胞。目的：在前期研究基础上,对大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞进行分离及表型鉴定。方法：取2月龄SD大鼠阴茎海绵体组织,采用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶消... 详细信息

背景：前期研究在大鼠阴茎海绵体组织中检测到了具有干细胞标志物及肌源性标志物的干细胞。目的：在前期研究基础上,对大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞进行分离及表型鉴定。方法：取2月龄SD大鼠阴茎海绵体组织,采用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶消化分离组织,采用Preplate差速贴壁技术对细胞进行初步纯化,获得PP1~PP6贴壁细胞,并进行流式细胞仪检测、免疫荧光细胞化学鉴定及Western blotting检测。结果与结论：连续6步差速贴壁分离后,PP1~PP6细胞贴附能力逐渐减弱,PP6细胞两三天后开始贴壁形成圆形或梭形。流式细胞仪检测PP6细胞中干细胞抗原1（＋）5.7%、胚胎抗原（＋）2.6%、结蛋白（＋）41.2%。免疫荧光细胞化学显示仅有少量细胞分别表达干细胞抗原1和胚胎抗原,均散在分布,干细胞抗原1主要表达于胞浆,胚胎抗原主要表达于胞核,表达结蛋白的细胞聚集,数量较多,主要表达于胞浆;亦发现有极少量双阳性表达细胞,即干细胞抗原1/胚胎抗原、干细胞抗原1/结蛋白和胚胎抗原/结蛋白。PP1~PP5细胞中未检测到干细胞抗原1及胚胎抗原蛋白明显表达,但在PP6细胞中则检测到干细胞抗原1及胚胎抗原蛋白的表达。结蛋白在PP1~PP6细胞中的表达逐渐增强。提示在大鼠阴茎海绵体中发现具有干细胞及肌源性干细胞表型的细胞。

关键词：肌源性干细胞阴茎海绵体干细胞抗原1 胚胎抗原结蛋白干细胞

新生小鼠Sca-1+心脏干细胞分离、培养、鉴定及生理特性的研究

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新生小鼠Sca-1+心脏干细胞分离、培养、鉴定及生理特性的研究

作者：韦静广西医科大学

学位级别：硕士

研究背景:目前临床上治疗缺血性心脏病的常规方法包括:药物改善临床症状、内科介入或外科冠脉搭桥手术改善心肌的血液供应。近几年,人们开始探索干细胞移植修复受损心肌的可能性和治疗方法,尤其是心脏原位干细胞。已有研究证实,Sca-1心... 详细信息

研究背景:目前临床上治疗缺血性心脏病的常规方法包括:药物改善临床症状、内科介入或外科冠脉搭桥手术改善心肌的血液供应。近几年,人们开始探索干细胞移植修复受损心肌的可能性和治疗方法,尤其是心脏原位干细胞。已有研究证实,Sca-1心脏干细胞是心脏中数量最多的干细胞类型。无论是在体外还是动物体内,它都能够被诱导分化成为自主跳动的心肌细胞,而其他类型的心脏干细胞(例如c-kit心脏干细胞)经诱导后则更较偏向于分化成为血管内皮细胞。由此可见,Sca-1心脏干细胞在心脏干细胞类型中最接近于心肌源性。虽然目前已经能够从动物或人类的心脏组织中成功分离获取Sca-1心脏干细胞,通过细胞移植的动物实验可以观察到Sca-1心脏干细胞对心肌修复的促进作用和对心脏功能的改善作用。但是,Sca-1心脏干细胞的获取和培养方法目前尚未成熟,人们对于Sca-1心脏干细胞生理特性的了解也还远远不足以将其应用到临床治疗上。研究目的:1.分离获取新生小鼠Sca-1心脏干细胞,对细胞进行鉴定、体外培养和扩增。2.对小鼠Sca-1心脏干细胞表面标志物及心肌特异性标记物进行研究。研究方法:1.将出生7天以内的新生昆明小鼠的心脏剪碎成组织块,用0.25%胰蛋白酶+0.1%Ⅱ型胶原酶反复消化。经组织块法培养10-14天后,结合细胞免疫磁珠法对Sca-1心脏干细胞进行阳性分选。分选后的细胞使用CGM条件培养液进行培养。分选前及经分选纯化后通过流式细胞术的方法分别测定细胞中Sca-1心脏干细胞的含量。2.对分选后的细胞通过流式细胞术的方法测定CD31、CD34及c-kit等干细胞相关的表面抗原的表达情况。3.对分选后的细胞通过细胞免疫荧光染色的方法进行表面抗原Sca-1和心肌特异性标记物Nkx-2.5和GATA-4表达的测定。研究结果:1.分选前Sca-1心脏干细胞的含量较低,仅占全部细胞比例的5.44%,经细胞磁珠分选后传至第三代的细胞其Sca-1心脏干细胞的含量占全部细胞比例的86.73%。显微镜下可见分选后的第一代Sca-1心脏干细胞生长缓慢,大约10天左右融合可达80%,细胞形态不一,细胞形态以梭形及三角形为主,聚集生长。传代后的细胞可在CGM条件培养液中快速增殖,大约6-7天后可再次进行细胞传代。2.通过流式细胞术对细胞表面标志物CD31、CD34及c-kit进行检测,结果显示:细胞不表达CD31和CD34,低表达c-kit(表达率为4.78%)。3.通过细胞免疫荧光染色的方法对传代后的细胞进行检测,结果显示:免疫荧光显微镜下可见几乎所有细胞都表达FITC-Sca-1的绿色荧光,几乎所有细胞都同时表达PE-Nkx-2.5的红色荧光和FITC-GATA-4的绿色荧光。研究结论:1.采用组织块培养结合细胞免疫磁珠分选的方法,能够从新生昆明小鼠的心脏中获取数量可观的、高纯度的Sca-1心脏干细胞。使用CGM条件培养液对分选后的Sca-1心脏干细胞进行培养,细胞可稳定传代并保持干细胞特性。第一代细胞生长速度较慢,传代后的细胞可快速增殖。2.小鼠Sca-1心脏干细胞不表达干细胞表面抗原CD31和CD34,能够排除血管内皮干细胞和造血干/祖细胞来源的可能性。细胞低表达干细胞表面抗原c-kit,其与c-kit心脏干细胞可以通过不同的细胞表面标志物从同一个体的心脏组织中分别分选获取。3.Sca-1心脏干细胞同时表达心肌特异性标记物Nkx-2.5和GATA-4,为心肌源性的心脏干细胞,具有向心肌细胞分化的潜能。

关键词：缺血性心脏病心脏干细胞干细胞抗原1 细胞磁珠分选流式细胞术细胞免疫荧光染色

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Sca-1^+心肌干细胞的研究进展

心血管病学进展 2009年第6期30卷 1047-1050页

作者：康振峻钟理宋治远第三军医大学附属西南医院心血管内科重庆400038

干细胞抗原1(Sca-1)是干细胞的一种重要表面标记物,体内许多干细胞都表达Sca-1。同样,心肌干细胞也表达Sca-1。目前研究发现,Sca-1+心肌干细胞能够分化为心肌细胞,对心肌梗死后心室重构与心肌再生具有明显作用,能够促进心脏的修复。因此... 详细信息

干细胞抗原1(Sca-1)是干细胞的一种重要表面标记物,体内许多干细胞都表达Sca-1。同样,心肌干细胞也表达Sca-1。目前研究发现,Sca-1+心肌干细胞能够分化为心肌细胞,对心肌梗死后心室重构与心肌再生具有明显作用,能够促进心脏的修复。因此,Sca-1+心肌干细胞有可能使心肌梗死的临床治疗取得实质性的进展。现综述了Sca-1+心肌干细胞的来源、分化、作用等方面。

关键词：干细胞抗原1 心肌干细胞分化心肌细胞

新生小鼠Sca-1^+心脏干细胞的分离与鉴定

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广西医科大学学报 2018年第5期35卷 648-651页

作者：韦静吴成强桂春广西医科大学第一附属医院心内科南宁530021

目的:分离、纯化新生小鼠干细胞抗原-1(Sca-1)阳性心脏干细胞,观察其特异性标记物。方法 :将新生小鼠的心脏剪碎后用Ⅱ型胶原酶及胰酶反复消化。组织法培养10~14d后结合免疫磁珠进行阳性分选出Sca-1^+心脏干细胞。分选纯化后的细胞通过... 详细信息

目的:分离、纯化新生小鼠干细胞抗原-1(Sca-1)阳性心脏干细胞,观察其特异性标记物。方法 :将新生小鼠的心脏剪碎后用Ⅱ型胶原酶及胰酶反复消化。组织法培养10~14d后结合免疫磁珠进行阳性分选出Sca-1^+心脏干细胞。分选纯化后的细胞通过流式细胞术和免疫荧光的方法进行Sca-1的鉴定,并通过免疫荧光的方法鉴定心源性转录因子GATA-4和Nkx-2.5的相关蛋白。结果:组织培养和磁珠分选法结合成功分离并纯化了小鼠Sca-1^+心脏干细胞。分选后流式结果显示Sca-1^+心脏干细胞可达(62.8±1.3)%。免疫荧光显示Sca-1、GATA-4及Nkx-2.5均为阳性表达。结论:组织培养结合磁珠分选能成功分离纯化新生小鼠Sca-1^+心脏干细胞,且能稳定培养。细胞表达心源性转录因子相关蛋白GATA-4及Nkx-2.5。

关键词：新生小鼠 Sca-1+心脏干细胞干细胞抗原1 磁珠分选流式细胞术鉴定