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pErk1/2在干扰素-γ对干扰素调节因子-1沉默后表达Akt的32D细胞生长中的作用

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交通医学 2015年第1期29卷 7-11,15页

作者：林莺刘红林赠华姜胜华陆伟周鹭南通大学附属医院血液科江苏226001 福建医科大学附属宁德市医院

目的 :运用siRNA沉默干扰素调节因子-1(IRF-1)基因,观察干扰素-γ(IFN-γ)对IRF-1沉默后表达Akt的32D细胞生长增殖的作用,探讨IFN-γ由抑制造血逆转为促进造血的机制。方法 :培养表达野生型Akt与无活性型Akt的32D细胞并分别转染,针对IRF... 详细信息

目的 :运用siRNA沉默干扰素调节因子-1(IRF-1)基因,观察干扰素-γ(IFN-γ)对IRF-1沉默后表达Akt的32D细胞生长增殖的作用,探讨IFN-γ由抑制造血逆转为促进造血的机制。方法 :培养表达野生型Akt与无活性型Akt的32D细胞并分别转染,针对IRF-1-siRNA质粒以沉默IRF-1基因,用实时定量聚合酶链反应检测沉默效果,Western-blotting检测IRF-1蛋白表达以验证沉默效果。将处于对数生长期的两株细胞分成3大组:siRNA干扰组、空质粒阴性对照组及空白对照组,前两组分别加入不同浓度的IFN-γ共孵育,用MTS法检测两株细胞增殖情况。用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;用Western-blotting检测p-Erk1/2表达。结果:(1)加IFN-γ24h后,IRF-1沉默组在IFN-γ低浓度时促进增殖,抑制凋亡。高浓度的IFN-γ仍抑制增殖,促进凋亡。在48h以后IRF-1沉默组各浓度的IFN-γ都促进增殖,抑制凋亡(P0.05)。表达野生型Akt的32D细胞,在IRF-1沉默后各浓度IFN-γ均下调pErk1/2的表达(P<0.05)。结论:(1)IRF-1在IFN-γ的促凋亡作用中起重要作用。(2)有活性Akt的表达可抑制Erk信号通路,其活性状态决定了IRF-1封闭后IFN-γ对pErk1/2表达的作用,pErk1/2的表达影响细胞增殖与凋亡,但并不决定IFN-γ作用的逆转。(3)Akt信号通路在IFN-γ逆转机制中起作用。

关键词：再生障碍性贫血干扰素调节因子-1 基因沉默干扰素-γ pErk1/2 实时定量聚合酶链反应 Western blot检测流式细胞仪检测小鼠

信号转导子和转录激活子-1、干扰素调节因子-1及干扰素-γ在支气管哮喘儿童中的表达及其临床意义

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中国小儿急救医学 2018年第11期25卷 834-838页

作者：陈凯鹏林惠玲张超芦爱萍深圳市罗湖区人民医院儿科 518001 深圳市罗湖医院集团社管中心 518001 深圳远东妇儿科医院 518001

目的在支气管哮喘儿童外周血单个核细胞中,检测信号转导子和转录激活子-1 (STAT1)、干扰素调节因子-1(IRF1)及干扰素-γ(IFN-γ)的表达,以进一步探讨其在哮喘病理生理机制中的作用.方法选取2017年9月至2018 年5 月,我院儿科门诊就诊... 详细信息

目的在支气管哮喘儿童外周血单个核细胞中,检测信号转导子和转录激活子-1 (STAT1)、干扰素调节因子-1(IRF1)及干扰素-γ(IFN-γ)的表达,以进一步探讨其在哮喘病理生理机制中的作用.方法选取2017年9月至2018 年5 月,我院儿科门诊就诊以及住院的急性发作期支气管哮喘患儿38例作为哮喘组,该38 例患儿经规范治疗后,哮喘良好控制患儿作为哮喘治疗有效组(n=23),哮喘部分控制及未控制患儿作为哮喘治疗无效组(n=15).选取同期健康儿童25例作为对照组.应用 RT-PCR 和 Western blot 方法检测各组外周血单个核细胞中 STAT1、 IRF1 及 IFN-γ 的mRNA和蛋白表达,分析支气管哮喘儿童 STAT1、IRF1 及 IFN-γ 的 mRNA 和蛋白表达水平相关性.结果哮喘组、哮喘治疗有效组、哮喘治疗无效组STAT1、IRF1 mRNA及蛋白表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0. 05);哮喘治疗有效组IRF1 mRNA及蛋白表达均低于哮喘治疗无效组,差异均有统计学意义(P<0. 05);哮喘组、哮喘治疗有效组、哮喘治疗无效组INF-γ mRNA及蛋白表达均低于对照组,差异有统计学意义(P<0. 05).结论 STAT1在支气管哮喘患儿中高表达,IFN-γ在支气管哮喘患儿中低表达. IRF1在支气管哮喘患儿中高表达,且其表达与治疗有效与否密切相关.

关键词：支气管哮喘信号转导子和转录激活子-1 干扰素调节因子-1 干扰素-γ 儿童

干扰素调节因子1对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

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中华肝胆外科杂志 2017年第4期23卷 255-258页

作者：崔子林刘子荣张海明李世鹏张雅敏天津市第一中心医院器官移植中心肝胆外科 300192

目的研究干扰素调节因子1（IRF-1）对小鼠肝脏缺血再灌注（IR）损伤的影响及机制，寻求减轻肝脏缺血再灌注损伤的有效方法。方法将小鼠分为对照组（假手术组）、小鼠肝脏热IR损伤模型组（IR组）和重组IRF-1干预组（IRF-1组），构建小鼠... 详细信息

目的研究干扰素调节因子1（IRF-1）对小鼠肝脏缺血再灌注（IR）损伤的影响及机制，寻求减轻肝脏缺血再灌注损伤的有效方法。方法将小鼠分为对照组（假手术组）、小鼠肝脏热IR损伤模型组（IR组）和重组IRF-1干预组（IRF-1组），构建小鼠肝脏缺再灌注损伤模型。检测假手术组和IR组小鼠IRF-1的mRNA和蛋白水平、肝功能和肝组织病理变化；检测IR组和IRF-1组IR损伤6h后肝细胞IRF-1、p-Statl、p-P38、PARP1与Caspase-3蛋白水平的变化以及增殖细胞核抗原（PCNA）表达情况。结果小鼠肝脏缺血再灌注后，肝组织IRF-1 mRNA和蛋白表达水平均显著升高，再灌注6h时达到峰值，与假手术组相比，差异有统计学意义（t再灌注2h=-3．512、t再灌注6h=-4．247、t再灌注12h=-4．088、t再灌注24h=-3．851；P〈0．05）；IR组小鼠血清ALT、AST水平（tALT=4．931、4．592、4．277、4．809；tAST=4．980、4．617、4．336、4．915；P〈0．05）在各个时间点均高于假手术组，肝脏病理学改变亦比假手术组明显加重。使用重组IRF-1干预后，肝细胞中IRF-1、p-Stat1、p-P38、PARP1与Caspase-3蛋白水平均升高，PCNA表达减少。结论IRF—1表达与肝脏缺血再灌注损伤密切相关，其机制可能与廊激活化蛋白激酶（JNKMAPK）的激活及抑制PCNA表达有关。

关键词：肝脏缺血缺血再灌注再灌注损伤干扰素调节因子-1

干扰素调节因子1调控线粒体自噬参与小鼠肝缺血再灌注损伤

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中华器官移植杂志 2016年第10期37卷 614-619页

作者：王振李世朋于瑶何金丹杜晨阳宋虎张海明张建军天津医科大学一中心临床学院 300192 天津市第一中心医院东方器官移植中心

【摘要】目的探讨干扰素调节因子-1（IRF-1）调控线粒体自噬对小鼠肝缺血再灌注损伤的影响。方法选择健康雄性C57BL／6小鼠建立活体小鼠肝缺血再灌注损伤模型，用随机数字表法分为假手术组（sham）和缺血再灌注组（IR），每组6只。血生... 详细信息

【摘要】目的探讨干扰素调节因子-1（IRF-1）调控线粒体自噬对小鼠肝缺血再灌注损伤的影响。方法选择健康雄性C57BL／6小鼠建立活体小鼠肝缺血再灌注损伤模型，用随机数字表法分为假手术组（sham）和缺血再灌注组（IR），每组6只。血生化检测两组小鼠血清ALT、AST变化，罗丹明123染色（Rhodamine123）法检测肝细胞线粒体损伤情况，HE染色观察肝组织病理学改变，TUNEL法检测肝细胞凋亡情况。Westernblot检测IRF-1、Nix、LC3和Caspase-3蛋白表达。AML12细胞系建立离体肝细胞缺血再灌注损伤模型，分为siRNA-NC组和siIRF-1组。PI染色法检测AMLl2细胞凋亡情况，免疫荧光观察AML12细胞内自噬体形成情况，Westernblot检测IRF-1、Nix、LC3和Bax蛋白表达。结果与假手术组比较，缺血再灌注组小鼠血清ALT、AST明显升高（P〈0．0001）；罗丹明123染色法见缺血再灌注组线粒体膜电位明显下降，线粒体损伤严重；病理学检查见缺血再灌注组肝细胞肿胀、脂肪变性，肝窦狭窄，中性粒细胞浸润和片状坏死，肝组织结构破坏严重；TUNEL法检测见IR组肝细胞凋亡率明显增高（P〈0．0001）；Westernblot检测显示，缺血再灌注组IRF-1、Caspase-3蛋白表达水平明显高于假手术组，Nix、LC3Ⅱ表达水平明显低于假手术组。PI染色法示，SiRNA-NC组细胞凋亡率明显高于siIRF-1组（P〈0．0001）。免疫荧光示SiRNA-NC组细胞内自噬体个数明显低于siIRF-1组（P〈0．0001）；Westernblot检测显示SiRNA-NC组IRF-1、Bax蛋白表达水平明显高于siIRF-1组，Nix、LC3Ⅱ表达水平明显低于siIRF-1组。结论IRF-1加重小鼠肝缺血再灌注损伤，其机制可能与IRF-1抑制线粒体自噬，促进肝细胞凋亡有关。抑制IRF-1表达能够提高线粒体自噬，对肝缺血再灌注起到保护作用。

关键词：干扰素调节因子-1 线粒体自噬缺血再灌注损伤

干扰素调节因子1通过调控细胞焦亡参与小鼠肝脏缺血再灌注损伤

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干扰素调节因子1通过调控细胞焦亡参与小鼠肝脏缺血再灌注损伤

作者：刘钰天津医科大学

学位级别：硕士

目的:肝脏缺血再灌注损伤(IRI)在一系列肝脏手术中几乎是难以避免的,并且通常与术后的发病率与死亡率密切相关。肝脏缺血再灌注(IR)对肝脏疾病的发展,手术后的效果以及患者的生存预后都十分重要,因此探究如何保护肝脏IRI对临床减轻肝损... 详细信息

目的:肝脏缺血再灌注损伤(IRI)在一系列肝脏手术中几乎是难以避免的,并且通常与术后的发病率与死亡率密切相关。肝脏缺血再灌注(IR)对肝脏疾病的发展,手术后的效果以及患者的生存预后都十分重要,因此探究如何保护肝脏IRI对临床减轻肝损害病人的并发症具有重要价值。本研究旨在观察小鼠肝脏IR过程干扰素调节因子1(IRF-1)与焦亡指标蛋白的表达情况,探讨IRF-1调节焦亡对IR诱导小鼠肝细胞损伤的影响。方法:(1)随机将C57BL/6正常雄性小鼠分组,命名为假手术组(Sham)与IR2h、6h和12h组,每组6只。Sham组不进行IR处理,其它3组采用血管夹夹闭肝左叶、中叶脉管60 min并再灌注2、6、12 h后建立肝脏IRI模型。酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)水平,使用生化仪检测血清肝酶丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平。HE染色法观察肝脏病理学改变。免疫组织化学法(IHC)检测蛋白IRF-1表达变化。原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测小鼠肝脏焦亡和凋亡变化。透射电镜(TEM)检测小鼠肝脏缺血侧组织细胞形态学变化。q RT-PCR检测各组小鼠肝组织IRF-1m RNA的表达变化。Western blot检测IRF-1、半胱天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)和gasdermin D(GSDMD)蛋白水平。(2)将小鼠正常肝脏AML12细胞分别进行过表达和敲低IRF-1表达后继续模拟IR处理,分为过表达IRF-1+IR组及空载体+IR组,IRF-1 si RNA+IR组及其对照组(NC+IR组)。透射电镜检测细胞形态变化。流式法检测小鼠肝细胞凋亡和焦亡改变。q RT-PCR检测细胞中IRF-1m RNA表达情况。Western blot检测各组AML12细胞IRF-1、Caspase-1、Cleaved-Caspase-1和GSDMD表达变化。酶标仪检测肝细胞释放入上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:与Sham组比较,小鼠体内IR各时间段(P因子IRF-1蛋白与m RNA的表达在IR后各时间点均比Sham组增高(P调节Caspase-1和GSDMD的表达以及IL-1β的释放调控焦亡进而导致对小鼠肝脏IRI。

关键词：肝脏缺血再灌注肝细胞干扰素调节因子-1 焦亡

干扰素调节因子IRF-1调节MAPK-JNK信号通路在小鼠肝缺血再灌注肺损伤中的作用

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干扰素调节因子IRF-1调节MAPK-JNK信号通路在小鼠肝缺血再灌注肺...

作者：丁艺洁天津医科大学

学位级别：硕士

目的:急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是肝脏缺血再灌注（ischemia reperfusion injury,IRI）过程中最常见的远隔脏器损伤,可导致急性呼吸窘迫综合征,是严重影响肝移植术,肝部分切除术等肝脏手术患者的预后及术后生存率的严重并发... 详细信息

目的:急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是肝脏缺血再灌注（ischemia reperfusion injury,IRI）过程中最常见的远隔脏器损伤,可导致急性呼吸窘迫综合征,是严重影响肝移植术,肝部分切除术等肝脏手术患者的预后及术后生存率的严重并发症。本研究旨在探明小鼠肝脏经历缺血再灌注过程时,肺损伤的情况及主要表现,分析造成远隔脏器损伤的主要机制。并探讨MAPK-JNK信号通路调控自噬对急性肺损伤所产生的影响,阐明此过程中干扰素调节因子-1（IRF-1）的表达,及其对MAPK-JNK信号通路的调节作用,从而揭示肝脏缺氧/复氧所致致急性肺损伤的可能机制,为肝脏手术并发症的预防与治疗提供实验依据及新的思路。方法:运用随机数字表法将50只野生型健康雄性C57BL/6小鼠,分成5组,分别为Sham组、缺血再灌注2h组、6h组、12h组和24h组,各组的10只,分别建立小鼠的肝缺血再灌注模型。Sham组仅进行开关腹操作,另外4组用无创血管夹阻断肝门1.5h制备70%肝缺血模型,开放后再分别灌注2h、6h、12h和24h。各组于再灌注后处死小鼠并取血清及肺组织。采用ELISA法检测血清中细胞因子TNF-α,IL-6的水平,在光镜下观察各组免疫组织化学染色后的肺组织病理学改变及自噬相关蛋白LC3表达情况;透射电镜下观测小鼠肺组织中的自噬体数量变化;蛋白印迹法检测肺组织IRF-1,SAPK-JNK、beclin-1、以及LC3蛋白水平变化,用以分析肝缺血再灌注肺损伤的主要表现和诱发机制。进一步实验,采用基因敲除技术抑制小鼠体内IRF-1表达（KO组）,另采用尾静脉注射技术,向小鼠体内注射Ad IRF-1腺病毒使小鼠增高IRF-1表达（Ad IRF-1组）及空载腺病毒（Ad GFP组）,分别建立小鼠70%肝脏缺血再灌注6小时模型及相应对照组。蛋白印迹法检测肺组织内IRF-1,MAPK-JNK、及beclin-1水平变化,与野生型小鼠实验结果进行对比分析。探究IRF-1对MAPK-JNK信号通路的调控规律。结果:相较于Sham组,IR各组小鼠血清TNF-α,IL-6明显增高;肺组织结构破坏,出现空泡、水肿、大量炎性细胞聚集,以6h,12h炎症最为严重;透射电镜下自噬活动明显增强;IR处理各组小鼠肺组织中IRF-1,JNK、beclin-1、及LC3蛋白表达均随时间推移出现明显增加增加,在6h左右达最高峰,且持续24h后仍高于正常水平。与野生型（WT）小鼠组相比,IRF1基因敲除小鼠（KO）组经IR处理后,IRF-1水平无明显变化,JNK、Beclin-1蛋白水平升高幅度小,肺脏组织损伤程度相对减轻。与空载腺病毒组（Ad GFP）相比较,IRF-1高水平表达的Ad IRF-1组小鼠经IR处理后,JNK蛋白及beclin-1蛋白升高幅度明显增加,肺组织病理损伤程度加重。结论:小鼠肝缺血再灌注损伤促进细胞因子释放,肺组织IRF-1表达上调,增强了自噬通路的活化,加重急性肺损伤。抑制IRF-1表达可减轻肺损伤。其机制与IRF-1调控JNK信号通路,增加肺脏细胞的自噬水平有关。

关键词：干扰素调节因子-1 缺血再灌注急性肺损伤 JNK 自噬

神经生长因子通过诱导IRF-1核内转运增强PC-12细胞钠电流的表达

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中南大学学报（医学版） 2011年第8期36卷 776-781页

作者：朱叶牡潘频华谭洪毅胡成平中南大学湘雅医院呼吸科长沙410008 长沙市中心医院分院内二科长沙410008

目的：初步探讨神经生长因子（nerve growth factor,NGF）和干扰素调节因子-1（interferon regula-tory factor-1,IRF-1）对类感觉神经元细胞株大鼠嗜铬细胞（rat pheochromocytoma cell,PC-12）中的Na＋电流变化的影响。方法：用不同... 详细信息

目的：初步探讨神经生长因子（nerve growth factor,NGF）和干扰素调节因子-1（interferon regula-tory factor-1,IRF-1）对类感觉神经元细胞株大鼠嗜铬细胞（rat pheochromocytoma cell,PC-12）中的Na＋电流变化的影响。方法：用不同浓度的NGF（0~200ng/mL）刺激PC-12细胞,采用Real-time PCR检测IRF-1mRNA表达变化,Western印迹检测IRF-1的活化。然后用全细胞膜片钳技术观察IRF-1干扰PC-12细胞对钠电流的影响。结果：低剂量NGF短时间刺激,就可以增加钠电流密度,同时这种钠电流的增加具有NGF浓度依赖性。此外,高剂量NGF刺激PC-12细胞后,细胞内的IRF-1mRNA的表达明显增加,而较低剂量NGF刺激细胞后可以导致IRF-1蛋白向细胞核内转运,同时并不影响其基因水平表达。此外,当IRF-1被干扰后,NGF刺激则不会再出现钠电流升高。结论：NGF可以呈剂量依赖性地增加PC-12细胞的钠电流强度,同时这种增强受到了IRF-1的调控。

关键词：干扰素调节因子-1 神经生长因子 PC-12细胞钠电流密度

瘦素受体、IRF-1和糖皮质激素受体-β在肥胖哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第10期28卷 1037-1040页

作者：王莉君郝璐李慧婷卢立国卞宏刘敏宋琳琳朱述阳徐州医学院附属第三医院呼吸科江苏徐州221000 徐州医学院附属医院呼吸科江苏徐州221000 沭阳县人民医院呼吸科江苏宿迁223600

目的:观察体外培养肥胖哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)表达瘦素受体(OB-R)、干扰素调节因子-1(IRF-1)及糖皮质激素受体-β(GR-β)的情况,探讨肥胖与难治性哮喘的关系。方法:60只雄性SD大鼠随机分为四组,即正常体质量对照组(A组)、正常体... 详细信息

目的:观察体外培养肥胖哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)表达瘦素受体(OB-R)、干扰素调节因子-1(IRF-1)及糖皮质激素受体-β(GR-β)的情况,探讨肥胖与难治性哮喘的关系。方法:60只雄性SD大鼠随机分为四组,即正常体质量对照组(A组)、正常体质量哮喘组(B组)、肥胖对照组(C组)、肥胖哮喘组(D组),肥胖及哮喘模型建立后取各组大鼠气道,体外培养ASMC,反转录PCR(RT-PCR)测OB-R mRNA的表达,蛋白印迹法测定IRF-1及GR-β蛋白的表达。结果:OB-R mRNA的表达,B组、C组及D组较A组明显增加,D组较B组及C组明显增加;IRF-1和GR-β蛋白的表达,B组、C组及D组较A组明显增加,D组较B组及C组明显增加。结论:OB-R、IRF-1及GR-β在ASMC中表达的增加可能与肥胖哮喘发病及激素抵抗相关。

关键词：哮喘气道平滑肌细胞瘦素受体干扰素调节因子-1 糖皮质激素受体-β

肿瘤抑制基因XAF1启动子序列中活性IRF-1作用元件的鉴定

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解放军医学杂志 2008年第4期33卷 388-390页

作者：师雷锋高春芳徐迪辉王继德解放军第150中心医院肿瘤中心河南洛阳 471031 南方医科大学南方医院消化科

目的在XAF1的转录起始序列中鉴定一具有高度活性的IRF-1作用元件。方法通过生物信息学分析发现XAF1转录起始处(-30^-38nt)有一潜在的干扰素(IFN)调节因子1结合元件(IRF-E),与同义IRF-E序列同源性达76.2%,命名为IRFE-XAF1。应用凝胶电泳... 详细信息

目的在XAF1的转录起始序列中鉴定一具有高度活性的IRF-1作用元件。方法通过生物信息学分析发现XAF1转录起始处(-30^-38nt)有一潜在的干扰素(IFN)调节因子1结合元件(IRF-E),与同义IRF-E序列同源性达76.2%,命名为IRFE-XAF1。应用凝胶电泳迁移实验(EMSA)检测IRFE-XAF1的核蛋白结合活性,并分别定点突变其核心序列内-34nt和序列旁-28nt,检测突变后XAF1启动子活性变化及对IFN-α作用的影响。结果EMSA实验发现32P标记的含IRFE-XAF1的双链寡核苷酸DNA探针可与细胞核蛋白结合,且可被IRF-E同义探针阻断,定点突变后结合活性丧失,证实该IRFE-XAF1位点具有与转录因子结合的活性。含该IRFE-XAF1位点的XAF1启动子序列具有启动子活性且可被IFN-α诱导,IRFE-XAF1序列定点突变后启动子活性明显降低,其中-34nt突变后完全消除了IFN-α上调启动子活性的作用。结论XAF1的转录起始序列具有一高度活性的IRF-E,其序列为-38ntGAAACGAAA-30nt,这一发现提示XAF1是IFN-α诱导肿瘤细胞分化的作用基因。

关键词： XAF1 干扰素调节因子-1 点突变