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中华整形外科杂志 2004年第2期20卷 132-135页

作者：赵宇胡平陆应麟高峰乔群戚可名中国医学科学院中国协和医科大学整形外科医院北京100041 清华大学军事医学科学院基础医学研究所

目的　研究带血管肌筋膜包裹方法促进植入体种子细胞的成活作用。方法　经解剖分离裸鼠带背阔肌血管蒂的深筋膜 ,包裹人骨髓间充质干细胞 (MSCs)与载体 3 羟基丁酸、3 羟基己酸无规嵌段共聚物复合物 ,另将同样复合物植入裸鼠臀部肌袋中 ... 详细信息

目的　研究带血管肌筋膜包裹方法促进植入体种子细胞的成活作用。方法　经解剖分离裸鼠带背阔肌血管蒂的深筋膜 ,包裹人骨髓间充质干细胞 (MSCs)与载体 3 羟基丁酸、3 羟基己酸无规嵌段共聚物复合物 ,另将同样复合物植入裸鼠臀部肌袋中 (无血管蒂 )作为对照。经HE染色、骨桥素的原位杂交、Vonkossa钙染色与图像软件分析评价带血管肌筋膜包裹方法对促进植入体血管化与细胞成活的影响。结果　实验组术后 2周的骨桥素表达与 4周的钙染色程度均高于对照组。结论　带血管肌筋膜的包裹能促进组织工程植入物血管化与种子细胞的成活 ,从而能促进成骨。

关键词：带血管肌筋膜细胞载体复合体成骨效应骨肌皮瓣骨髓间充质干细胞组织工程

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富血小板血浆和带血管肌筋膜在组织工程骨血管化中的作用

富血小板血浆和带血管肌筋膜在组织工程骨血管化中的作用

引用

作者：陈立强青岛大学

学位级别：硕士

【目的】 1、分离培养犬骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs),体外扩增并向成骨细胞诱导分化,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可能性。 2、制备犬同种异体脱钙骨基质(demineralized bone matrix, DBM),研究DBM作为骨组织工... 详细信息

【目的】 1、分离培养犬骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs),体外扩增并向成骨细胞诱导分化,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可能性。 2、制备犬同种异体脱钙骨基质(demineralized bone matrix, DBM),研究DBM作为骨组织工程支架材料的可能性。 3、研究应用富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)、带血管肌筋膜对组织工程骨血管化的影响。【方法】 1、从犬骨髓分离MSCs,体外培养扩增,并用含地塞米松(10mol/L),β—甘油磷酸钠(10mmol/L)和维生素C(50mg/L)的成骨诱导培养基成骨诱导培养,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞生长曲线。成骨诱导细胞行改良钙钴法碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色,并应用Von Kossa法、茜素红法进行钙结节染色。 2、杂种犬的股骨行脱脂、脱钙、脱非胶原蛋白、冷冻干燥、灭菌制成DBM,与MSCs复合,分别在不同时间应用倒置显微镜、扫描电镜观察脱钙骨基质的结构及细胞在材料表面的生长情况。 3、将DBM/MSCs复合体植入12只犬背部,根据是否加入PRP和被带血管肌筋膜包裹分为4组。分别在术后4周、8周12周各处死4只犬,行大体标本、X线、组织学检查。【结果】 1、用密度梯度法分离的MSCs,细胞纯度高,增殖能力活跃,诱导成骨分化的MSCs由梭形、三角形变为变为方形、多角形,其ALP及钙结节染色均为阳性。犬MSCs和成骨诱导细胞的生长曲线呈典型的S形。 2、同种异体脱钙骨基质具有三维立体网孔结构,平均孔隙自径约为254.39±88.71μm,孔隙率约70%。与MSCs复合培养后,细胞黏附其上,上架率高,生长状态良好,增殖迅速,分泌大量细胞外基质。

关键词：骨髓间充质干细胞脱钙骨基质富血小板血浆带血管肌筋膜血管化骨形成

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富血小板血浆及带血管筋膜在组织工程骨血管化中的作用组织影像学观察(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第46期12卷 9168-9173页

作者：陈涛李宁毅青岛大学医学院附属医院放射科山东省青岛市266003 青岛大学医学院附属医院口腔颌面外科山东省青岛市266003

背景:富血小板血浆中的多种生长因子及带血管筋膜是否具有促进骨再生及血管化作用尚在争论之中。目的:拟从组织影像学角度评价富血小板血浆及带血管筋膜对骨髓基质干细胞/脱钙骨基质复合的组织工程骨血管化作用效果。设计、时间及地点:... 详细信息

背景:富血小板血浆中的多种生长因子及带血管筋膜是否具有促进骨再生及血管化作用尚在争论之中。目的:拟从组织影像学角度评价富血小板血浆及带血管筋膜对骨髓基质干细胞/脱钙骨基质复合的组织工程骨血管化作用效果。设计、时间及地点:单一样本观察及动物同体对照实验,于2004-10/2007-11在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料:11～12月龄健康杂种犬12只,体质量20～25kg,雌雄各半。方法:①采用密度梯度离心法从犬骨髓中分离骨髓基质干细胞,体外贴壁培养扩增、成骨诱导培养。取杂种犬的股骨制备脱钙骨基质,并与骨髓基质干细胞复合。②将每只犬的背部分为4个区,A,B区,植入加富血小板血浆的骨髓基质干细胞/脱钙骨基质复合体,C,D区,仅植入骨髓基质干细胞/脱钙骨基质复合体。A,C区植入物用背阔肌带血管肌筋膜包裹;B,D区植入物用背部不带血管的浅筋膜包裹。分别在4,8,12周各取4只,雌雄各半,麻醉后处死取标本。主要观察指标:①采用倒置相差显微镜观察骨髓基质干细胞形态,四甲基偶氮唑盐法测定细胞生长曲线。②行改良钙钴法碱性磷酸酶染色,VonKossa法、茜素红法,钙结节染色观察诱导成骨细胞形态特征。③应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察复合体的结构。④行大体标本、X射线数字影像及组织学观察评价。结果:①诱导成骨分化的骨髓基质干细胞分泌的碱性磷酸酶及钙结节染色均呈阳性。②骨髓基质干细胞和成骨诱导细胞的生长曲线呈典型的S形。③同种异体脱钙骨基质与骨髓基质干细胞复合培养后,细胞上架率高,生长状态好,增殖迅速,能分泌大量细胞外基质。④各时间点A,B,C区在成骨的骨量、骨光学密度、血管化程度等方面均明显优于D组(P带血管肌筋膜均能促进组织工程骨的成骨和血管化,且两者具有协同作用。

关键词：间充质干细胞脱钙骨基质富血小板血浆带血管肌筋膜组织工程骨新生血管化

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