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齐墩果酸抗HSV-1活性及其机制研究

齐墩果酸抗HSV-1活性及其机制研究

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作者：贾娇艳暨南大学

学位级别：硕士

目的:安息香中分离提纯的齐墩果酸(Oleanolic acid)化合物体内外抗HSV-1活性,以及抗病毒机制的探究,为开发新型抗HSV-1药物奠定理论基础。方法:通过CCK8实验法在不同细胞上检测了Oleanolic acid毒性,利用空斑减数实验、病毒基因组DNA拷... 详细信息

目的:安息香中分离提纯的齐墩果酸(Oleanolic acid)化合物体内外抗HSV-1活性,以及抗病毒机制的探究,为开发新型抗HSV-1药物奠定理论基础。方法:通过CCK8实验法在不同细胞上检测了Oleanolic acid毒性,利用空斑减数实验、病毒基因组DNA拷贝数、病毒滴度等方法检测了Oleanolic acid抗HSV-1活性,通过不同时间点加药探究了Oleanolic acid作用阶段,在确定Oleanolic acid能够影响解旋酶-引发酶复合物的基础上构建了质粒,并通过si RNA干扰以及过表达确定了Oleanolic acid的潜在靶点,最后通过小鼠皮肤带状疱疹模型探究了Oleanolic acid的体内抗HSV-1活性。结果:Oleanolic acid对Vero细胞和Ha Ca T细胞的毒性不大,IC值分别为39.05μM和37.06μM,空斑减数实验以及病毒滴度和WB结果表明Oleanolic acid在不同的细胞上均有抗HSV-1活性,并且Oleanolic acid对ACV耐药株也有很好的抗病毒活性,另外机制研究发现Oleanolic acid在立即早期阶段发挥更好的抗HSV-1活性,进一步的研究发现Oleanolic acid能够显著性的下调解旋酶-引发酶复合物m RNA的表达水平,并且发现UL8是Oleanolic acid的潜在靶点,最后体内抗HSV-1实验表明Oleanolic acid能够显著性改善小鼠感染HSV-1引起的带状皮肤疱疹,说明Oleanolic acid在体内和体外均有抗HSV-1活性。结论:Oleanolic acid对于HSV-1正常株和ACV耐药株都有抗病毒活性,并且Oleanolic acid在体内也有良好的抗HSV-1活性,机制研究表明Oleanolic acid通过UL8发挥抗病毒活性,UL8是Oleanolic acid的潜在靶点。

关键词： HSV-1 Oleanolic acid UL8 带状皮肤疱疹体内体外抗病毒活性

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