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去骨瓣减压术对CD1小鼠行为学及正常脑组织随时间的影响

去骨瓣减压术对CD1小鼠行为学及正常脑组织随时间的影响

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作者：张舜尧河北医科大学

学位级别：硕士

目的:研究去骨瓣减压术对小鼠行为学及正常脑组织产生的影响,及随时间推移的变化。该实验对颅骨缺损病人的预后及行颅骨修补术的时间有一定的指导意义。方法:采用清洁级CD1小鼠45只,成年雄性,体重40g±5g,随机分为正常对照组和DC组;其... 详细信息

目的:研究去骨瓣减压术对小鼠行为学及正常脑组织产生的影响,及随时间推移的变化。该实验对颅骨缺损病人的预后及行颅骨修补术的时间有一定的指导意义。方法:采用清洁级CD1小鼠45只,成年雄性,体重40g±5g,随机分为正常对照组和DC组;其中正常对照组15只,不作任何干预,正常饲养;DC组30只,只行去骨瓣减压术。每组各取固定5只于处理完成后1小时、24小时、7天、14天、21天、28天行神经行为学人工评分(Neurological Severity Scores,NNS);DC组干预前3天及干预后7天、14天、21天、28天行旷场实验;28天时行高架十字迷宫实验;28天时行巴恩斯迷宫实验。用干湿重法测定脑组织水分含量,DC组每个时间点另取3只,分别于每组处理完成后12小时、1天、3天、5天、7天用干湿重法测定脑组织水分含量处死取脑称湿重,放入65℃烤箱48小时后称干重。用免疫组化方法观察神经胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体和神经元核抗原(neuronal nuclear antigen,Neu N)抗体在各组小鼠大脑皮层中的表达情况,两组每个时间点各取5只,于干预完成后7天、14天、28天处死灌注取脑,进行免疫组化试验。用病理图文分析系统图像处理软件image Image-Pro plus 6.0分析图像,所得数据用SPSS 21.0软件进行统计学分析,观察脑组织的变化。结果:1各组小鼠一般情况正常对照组:小鼠进食水及精神状况良好,动作灵活,随饲养时间延长体重逐渐增加。DC组:小鼠麻醉清醒后基本正常,个别表现嗜睡。术后2周动作灵活度较前稍差,食欲及精神较正常对照组稍差。2行为学试验2.1神经行为学评分DC组与正常对照组整体比较,存在统计学差异(F=35.799,P迷宫进臂总次数:两组之间无统计学差异,均值比较DC组>对照组。开臂进入次数:两组之间无统计学差异。闭臂进入次数:两组之间无统计学差异,均值比较DC组>对照组。2.4巴恩斯迷宫试验两组比较错误总数,无统计学差异;两组比较找到目标盒所需时间,无统计学差异;均值比较为DC组>对照组。3干湿称重法分析时间因素:DC组均值曲线左右两侧均呈单峰状,1d时水分含量最高。左右对比:将DC组同只小鼠的左右两侧脑组织水含量对比,存在统计学差异(F=26.701,P14d>28d,低于对照组。结论:1去骨瓣减压术对小鼠的认知能力和运动能力产生损伤,21d有所减轻,但28d又出现损伤加重。2去骨瓣减压术不会导致小鼠呈明显焦虑状态或空间记忆力受损。3去骨瓣减压术导致小鼠脑水肿,1d水肿程度达到峰值。4手术应激对小鼠脑造成一定的炎症反应,但14d已基本消除,随着时间延长,炎症反应再次出现并加重,DC组GFAP阳性细胞表达数:28d>7d>14d。5 DC组神经元死亡数随时间延长逐渐增加。

关键词：去骨瓣减压术 NeuN GFAP 神经行为学评分旷场实验高架十字迷宫巴恩斯迷宫

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当归多糖对铜诱导肝损伤和行为学变化的保护作用

当归多糖对铜诱导肝损伤和行为学变化的保护作用

引用

作者：朱清俊南京农业大学

学位级别：硕士

铜作为动物体内必需的营养矿物质之一,在机体内发挥着至关重要的生理学作用。在现代畜牧生产养殖中,铜作为动物日粮中的重要金属元素,被用于促进动物生长发育,提高动物生产性能,提高饲料吸收转化率,并取得良好经济效益,同时铜被过量使... 详细信息

铜作为动物体内必需的营养矿物质之一,在机体内发挥着至关重要的生理学作用。在现代畜牧生产养殖中,铜作为动物日粮中的重要金属元素,被用于促进动物生长发育,提高动物生产性能,提高饲料吸收转化率,并取得良好经济效益,同时铜被过量使用导致畜禽铜中毒情况时有发生,铜中毒不仅影响动物生理精神状态,而且污染畜牧养殖环境。日常需严格控制铜在不同畜禽日粮中的使用量,观察畜禽的行为,结合肝功能和血清学指标进行判断是否为铜中毒并及时采用药物进行治疗。当归多糖作为被广泛应用的中药,具有改善贫血、抗肿瘤、改善免疫功能、保护肝脏、抗氧化等作用。铜主要分布在肝脏中,过量铜会对肝脏等组织脏器产生毒性并引起生物体氧化应激反应。给予铜中毒动物服用当归多糖,不仅可以保肝护肝,还能缓解因铜过量带来的氧化应激,减少动物焦虑程度,改善精神状态,降低因铜中毒给现代畜牧业生产养殖带来的损失。因此,本研究通过给大鼠和兔进行铜负荷饮食,建立铜诱导肝损伤大鼠和兔模型,并给大鼠和兔灌胃不同剂量当归多糖溶液,然后对大鼠进行两种行为学实验---巴恩斯迷宫和高架十字迷宫实验,用以检测铜中毒大鼠空间分辨认知能力、学习记忆力和焦虑程度,并检测大鼠和兔血液生化指标、肝组织过氧化物酶活性、大鼠肝组织结构,探讨兔日粮中铜的合理摄入量,铜过量时行为学的改变、血液生化指标和肝组织过氧化物酶活性的改变,当归多糖对铜诱导致肝损伤大鼠和兔的保护作用,行为学的干预作用,为铜过量时使用当归多糖来缓解铜诱导致肝损伤和行为认知改变提供科学依据。试验共分为以下三个部分:试验Ⅰ当归多糖对铜诱导大鼠行为学变化影响为了研究当归多糖对铜诱导大鼠行为学变化影响,本试验将40只1月龄SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、当归多糖1组(ASP1)、当归多糖2组(ASP2)、当归多糖3组(ASP3)。采用铜负荷饮食法造模,SD大鼠模型对照组和ASP1、2、3组分别喂饲含硫酸铜1g/kg的粉状饲料和0.185%硫酸铜的去离子水,正常对照组喂饲等剂量浓度的普通饲料和去离子水12周,从第7周开始,ASP1、2、3组在每次喂饲含硫酸铜的粉状饲料和去离子水后,灌胃不同剂量的ASP溶液(100mg/kg/d、200mg/kg/d、400mg/kg/d),正常对照组和模型对照组灌胃等体积生理盐水,在铜负荷饮食和当归多糖灌胃完成后,对各组大鼠进行高架十字迷宫和巴恩斯迷宫实验,巴恩斯实验开始前进行6天适应性训练,记录行为学指标;在持续12周的铜负荷饮食和当归多糖灌胃完成后,继续高架十字迷宫和巴恩斯迷宫实验,记录行为学指标。结果显示,模型对照组大鼠开放臂停留时间百分比、开放臂进入次数百分比较正常对照组相比明显下降。进目标洞错误次数、目标洞潜伏期、目标洞路程比正常对照组明显升高,ASP3组治疗效果最好。表明当归多糖可以改善因铜中毒所致行为学改变,提高铜中毒大鼠空间认知能力和记忆力,减轻铜中毒大鼠焦虑程度。试验Ⅱ当归多糖对铜诱导大鼠血生化及肝组织的影响为了研究当归多糖对铜诱导大鼠血生化及肝组织的影响,本试验首先取腹主动脉血,分离血清,全自动生化分析仪测ALT、AST活性,分光光度计测MDA、SOD和GSH-PX值。剪取小块肝组织,放入PBS缓冲液中(p H7.3)冲洗备用。使用石蜡包埋,苏木精-伊红染色法制备肝组织病理切片;利用分光光度计检测肝组织抗氧化酶(MDA、SOD、GSH-PX)的活性;利用原子吸收分光光度计检测各组大鼠血清铜含量和肝组织铜含量。结果显示,模型对照组血清和肝组织铜含量明显升高,说明造模成功。模型对照组血清ALT和AST活性明显升高,当归多糖治疗组ALT、AST活性逐渐降低降低,越来越接近正常对照组。模型组SOD、GSH-PX值较正常对照组明显减少,MDA含量值明显升高,治疗组ASP1、2、3组SOD、GSH-PX值较模型对照组显著升高,MDA含量值明显下降。正常对照组大鼠肝组织结构完整,肝小叶组织结构清晰,模型对照组肝组织受到损伤,肝小叶结构模糊,出现炎性细胞浸润,ASP1、2、3组肝细胞结构完整度较模型对照组有所改善。表明铜中毒抑制抗氧化酶的活性并导致脂质过氧化,当归多糖能够抑制铜中毒所致的脂质过氧化,提高血清和肝脏抗氧化酶活性,保护铜中毒所致的肝脏损伤。试验Ⅲ当归多糖对铜诱导新西兰兔血生化及肝功能影响为了研究当归多糖对铜诱导兔血生化及肝功能的影响,本文将20只6月龄新西兰兔分别随机分为正常对照组、模型对照组、当归多糖1组(ASP1)、当归多糖2组(ASP2)、当归多糖3组(ASP3),适应性饲养1周后,新西兰兔模型对照组和ASP1、2、3组分别喂饲含硫酸铜350mg/kg的粉状饲料和0.185%硫酸铜的去离子水,正常对照组喂饲普通饲料和去离子水12周;第7周开始,ASP1、2、3组在每次喂饲含硫酸铜的粉状饲料和去离子水后,给兔服

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