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Ph^+/bcr-abl^+急性淋巴细胞白血病微小残留病变的细胞遗传学分析、巢式rt-pcr及流式细胞术检测

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中国实验血液学杂志 2003年第4期11卷 372-375页

作者：薛芳董作仁张冰高丽霞河北医科大学第二医院血液科石家庄050000 河北医科大学第三医院外科石家庄050000

为了探索检测Ph+ /bcr abl+ 急性淋巴细胞白血病 (ALL)患者的微小残留病变 (MRD)的简便而灵敏的方法 ,对 84例初治ALL患者和其中的缓解期患者的骨髓分别用细胞遗传学、流式细胞术和巢式rt pcr检测。结果表明 ,缓解期患者骨髓中不存在Ph... 详细信息

为了探索检测Ph+ /bcr abl+ 急性淋巴细胞白血病 (ALL)患者的微小残留病变 (MRD)的简便而灵敏的方法 ,对 84例初治ALL患者和其中的缓解期患者的骨髓分别用细胞遗传学、流式细胞术和巢式rt pcr检测。结果表明 ,缓解期患者骨髓中不存在Ph′染色体 ,巢式rt pcr方法检测到 11/ 14例缓解期患者存在MRD(bcr abl融合基因 ) (阳性率 78 5 7% ) ,而流式细胞术检测到 5 / 14的缓解期患者阳性 (阳性率 35 71% )。巢式pcr的灵敏度达到 10 -6- 10 -7水平 ,流式细胞检测的灵敏度达到 10 -4- 10 -5水平。结论 :Ph染色体核型分析技术检测MRD不够灵敏 ,而巢式rt pcr检测MRD较流式细胞技术检测灵敏度更高 ,且更易于开展应用。

关键词：急性淋巴细胞白血病 Ph^+/bcr-abl^+急性淋巴细胞白血病细胞遗传学分析巢式rt—pcr 流式细胞术微小残留病变

巢式rt-pcr检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞的临床价值

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南京医科大学学报（自然科学版） 2010年第6期30卷 818-821,858页

作者：傅卫王水杜青肇毅查小明刘晓安南京医科大学第一附属医院乳腺外科江苏南京210029 南京医科大学第一附属医院普外科实验室江苏南京210029

目的:联合采用细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)及乳腺上皮黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)指标,探讨通过巢式rt-pcr(nested rt-pcr)方法检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)的临床价值。方法:采用MCF-7RNA与健康志愿者外周血单核细胞(peripheral mononuclear cell,PMNC)RNA进行梯度混合后的反转录产物,检测优化后巢式rt-pcr体系的敏感性,再选择10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血检测其特异性后,对56例乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA及SBEM mRNA表达情况进行检测。结果:优化后的检测体系能够在3ml外周血PMNCs中检测到1个MCF-7细胞,10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血中未检测到CK19 mRNA与SBEM mRNA的表达;两者的表达与原发肿瘤大小,腋窝淋巴结状况及TNM分期相关(P0.05)。结论:经过优化的巢式rt-pcr体系联合检测乳腺癌患者外周血CK19 mRNA及SBEM mRNA的表达敏感性和特异性较高,能用于检测外周血CTC,对进一步精确评估预后及指导治疗可能有较高的临床价值。

关键词：乳腺癌循环肿瘤细胞巢式rt—pcr 细胞角蛋白19 乳腺上皮黏蛋白

应用巢式rt-pcr联合检测原发性肝癌病人外周血AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达

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中华肝胆外科杂志 2004年第9期10卷 602-605页

作者：宋天强张毓清李强王殿昌郝希山天津市肿瘤医院肝胆外科天津市300060

目的　寻找一种敏感的方法以早期发现原发性肝癌的复发与转移。方法　应用逆转录聚合酶链反应分别在术前、术后 1周和术后 2个月检测 37例行根治性切除的原发性肝癌病人外周血中MAGE 1mRNA和AFPmRNA的表达 ,并随访所有病人 1年。结果　... 详细信息

目的　寻找一种敏感的方法以早期发现原发性肝癌的复发与转移。方法　应用逆转录聚合酶链反应分别在术前、术后 1周和术后 2个月检测 37例行根治性切除的原发性肝癌病人外周血中MAGE 1mRNA和AFPmRNA的表达 ,并随访所有病人 1年。结果　外周血中MAGE 1mRNA和AF PmRNA的阳性率和肿瘤的病理分期相关 ;肿瘤病期越晚 ,外周血中微转移灶的检出率越高。 1年的随访中 ,有 9例病人出现复发 ,MAGE 1和 (或 )AFPmRNA的阳性率为 77 8% (7/9) ,其中 6例外周血中MAGE 1mRNA和 (或 )AFPmRNA持续阳性 ,2例由阴性转为阳性。另有 10例病人MAGE 1mRNA和(或 )AFPmRNA由术前阳性术后转为阴性 ,随访 1年中无复发。结论　联合检测外周血MAGE 1和AFPmRNA的表达是早期发现肝癌术后复发、评估预后一项敏感可信的指标。

关键词：巢式rt—pcr 联合检测原发性肝癌外周血 AFPmRNA MAGE—1mRNA 表达

检测MUC-1 mRNA对诊断非小细胞肺癌患者外周血微转移的意义

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癌症 2008年第12期27卷 1267-1270页

作者：刘小青任宏轩伍治平昆明医学院第三附属医院(云南省肿瘤医院)肿瘤内科云南昆明650118 昆明医学院第三附属医院(云南省肿瘤医院)肿瘤研究所云南昆明650118

背景与目的:粘蛋白家族,包括MUC-1,通常被认为是上皮组织及其来源的肿瘤的产物,理论上如果在间叶组织来源的血液中找到MUC-1 mRNA即意味着癌转移。本研究探讨MUC-1 mRNA作为分子指标检测非小细胞肺癌患者外周血微转移的可行性。方法:应... 详细信息

背景与目的:粘蛋白家族,包括MUC-1,通常被认为是上皮组织及其来源的肿瘤的产物,理论上如果在间叶组织来源的血液中找到MUC-1 mRNA即意味着癌转移。本研究探讨MUC-1 mRNA作为分子指标检测非小细胞肺癌患者外周血微转移的可行性。方法:应用巢式rt-pcr技术检测60例非小细胞肺癌患者外周血中MUC-1基因的表达,并以15例肺良性疾病患者及20名健康人外周血作为对照,同时使用相同的方法,扩增非上皮细胞来源的细胞株K562,HL-60及上皮细胞来源的细胞株A549、MCF-7,以观察靶基因的表达情况。结果:病患组MUC-1 mRNA表达阳性率达80.0%(48/60),15例肺良性疾病患者及20例健康人外周血中MUC-1 mRNA表达阳性率分别为60.0%(9/15),65.0%(13/20),K562、HL-60及A549、MCF-7细胞株经巢式rt-pcr也可以扩增出靶基因的条带。结论:MUC-1 mRNA不是检测非小细胞肺癌外周血微转移的可靠指标。

关键词：非小细胞肺癌微转移外周血粘蛋白-1 巢式rt—pcr 诊断

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齿兰环斑病毒与建兰花叶病毒分子检测研究

植物保护 2008年第6期34卷 65-69页

作者：闻伟刚谭钟崔俊霞陈先锋宁波出入境检验检疫局宁波315012

齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,Cy MV)是严重危害兰科植物的两种主要病毒。本研究根据病毒外壳蛋白基因设计特异性引物,应用ELISA、普通rt-pcr、巢式rt-pcr和免疫捕获rt-pcr4... 详细信息

齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,Cy MV)是严重危害兰科植物的两种主要病毒。本研究根据病毒外壳蛋白基因设计特异性引物,应用ELISA、普通rt-pcr、巢式rt-pcr和免疫捕获rt-pcr4种方法进行了检测研究与比较。结果表明:普通rt-pcr与ELISA方法检测灵敏度相当;巢式rt-pcr检测灵敏度要比普通rt-pcr与ELISA方法高出104倍以上;免疫捕获rt-pcr检测灵敏度介于普通rt-pcr和巢式rt-pcr之间。采用巢式rt-pcr方法对我国台湾进境的蝴蝶兰植株样本检测,1号样本出现与阳性对照一致的特异条带。双向测序分析,扩增产物序列与ORSV外壳蛋白基因具有100%的同源性,表明1号蝴蝶兰样本携带ORSV。

关键词：齿兰环斑病毒建兰花叶病毒巢式rt—pcr 免疫捕获rt-pcr 检测灵敏度

上皮钙黏着蛋白mRNA表达与肺癌的相关性研究

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临床检验杂志 2008年第5期26卷 339-341页

作者：段勇袁育林张林刘华李娅王玉明昆明医学院第一附属医院检验科昆明650032 昆明医学院第一附属医院病理科昆明650032

目的探讨E-cadherin(上皮钙黏着蛋白,E-cad)mRNA与肺癌及其病理类型之间的相关性。方法用巢式rt-pcr检测50例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性对照标本中的E-cad mRNA的相对表达量。结果癌组织1.33±0.53、癌旁组织1.65±0.6... 详细信息

目的探讨E-cadherin(上皮钙黏着蛋白,E-cad)mRNA与肺癌及其病理类型之间的相关性。方法用巢式rt-pcr检测50例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性对照标本中的E-cad mRNA的相对表达量。结果癌组织1.33±0.53、癌旁组织1.65±0.60、远癌组织2.01±0.46、非肺癌对照肺组织2.09±0.09,经方差分析癌、癌旁和远癌组织差异有统计学意义(F=18.810,P0.05)。肺鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织、癌旁组织和远癌组织中E-cad mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论E-cad mRNA表达减少或缺失与肺癌的发生和发展有相关性,与肺癌的组织类型无关。

关键词：肺癌上皮钙黏着蛋白mRNA 巢式rt—pcr

混合系白血病基因重排的检测方法及其临床意义

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中国实验血液学杂志 2007年第1期15卷 20-24页

作者：陈伟红陈成坚汪明春李长钢游伟文黄瑞宏李明陶小梅深圳市第二人民医院血液科深圳市血液病研究所深圳518035 广州市番禺区人民医院血液科广州511400 深圳市儿童医院血液科深圳518026

为了研究混合系白血病(MLL)基因重排在急性白血病(AL)中的发生率、融合基因类型及其临床意义,用荧光原位杂交技术检测60例急性白血病(AL)患者MLL基因重排,对于MLL基因重排阳性的患者,用巢式rt-pcr方法检测MLL基因重排形成的6种常见融合... 详细信息

为了研究混合系白血病(MLL)基因重排在急性白血病(AL)中的发生率、融合基因类型及其临床意义,用荧光原位杂交技术检测60例急性白血病(AL)患者MLL基因重排,对于MLL基因重排阳性的患者,用巢式rt-pcr方法检测MLL基因重排形成的6种常见融合基因类型。结果表明:7例AL患者有MLL基因重排,发生率为11.67%,其中2例为急性髓细胞白血病M5(AML-M5),融合基因均为MLL/AF9;另5例为B细胞系急性淋巴细胞白血病(B-ALL),其中2例融合基因为MLL/ENL,1例MLL/AF4,2例未扩增出融合基因产物。结论:荧光原位杂交技术是检测ALMLL基因易位重排的快速、特异、灵敏的方法,巢式rt-pcr是检测MLL基因重排产生的融合基因类型的简便可行的方法;MLL基因重排的检测对急性白血病预后判断和治疗方案的选择具有重要意义。

关键词：急性白血病混合系白血病基因基因重排荧光原位杂交巢式rt—pcr

膀胱移行上皮癌患者尿及癌组织中Survivin表达的临床意义

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临床泌尿外科杂志 2009年第11期24卷 839-842页

作者：袁龙王剑松徐本玲袁鹏韩广森吴惠泽河南省肿瘤医院普外科郑州450000 昆明医学院第二附属医院泌尿外科

目的:探讨Survivin对膀胱癌早期发现、常规筛选且无损伤的方法,研究其与肿瘤病理分级(期)的相关性。方法:留取53例膀胱移行上皮癌、20例泌尿系其他疾病、10例健康志愿者新鲜中段晨尿,同上53例术后癌组织。利用巢式rt-pcr、实时定量pcr... 详细信息

目的:探讨Survivin对膀胱癌早期发现、常规筛选且无损伤的方法,研究其与肿瘤病理分级(期)的相关性。方法:留取53例膀胱移行上皮癌、20例泌尿系其他疾病、10例健康志愿者新鲜中段晨尿,同上53例术后癌组织。利用巢式rt-pcr、实时定量pcr技术检测Survivin的表达,同时行尿脱落细胞学及膀胱镜病检。结果:53例膀胱癌患者尿及癌组织中Su rvivin均有表达,敏感性为100%,特异性为90%。与尿脱落细胞学敏感性比较两者差异有统计学意义(P0.05)。癌组织中Survivin的量与肿瘤病理分级(期)正相关(P<0.01)。结论:检测尿脱落细胞中Survivin的表达有望成为临床诊断、筛检膀胱癌的较可靠方法。Survivin在膀胱的演进过程中可能起重要作用,可望作为检测膀胱癌恶化进展的指标。

关键词：膀胱肿瘤移行上皮癌巢式rt—pcr 实时定量pcr 基因表达

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河北省丙型肝炎病毒基因分型研究

中国病毒学 2003年第6期18卷 611-613页

作者：牛建章许若丹白瑞婷田茶张立平孟宗达河北大学生命科学学院河北保定071002 河北省疾病预防控制中心河北石家庄050011

丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus, HCV)感染是输血后肝炎的主要原因[1],主要通过输血或使用污染的血制品传播[2],且与肝硬化和肝细胞癌的发生有密切关系.

关键词：丙型肝炎病毒基因分型巢式rt—pcr 基因序列