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氟化物对家蚕肠道微生物菌群的影响

微生物学报 2015年第7期55卷 926-934页

作者：李冠楠夏雪娟 Parfait Sendegeya 赵欢欢隆耀航朱勇西南大学生物技术学院重庆400716 西南大学食品科学学院重庆400716

【目的】探讨氟化物对家蚕肠道微生物菌群的影响,开发具有潜在应用价值的益生菌以提高家蚕对氟化物的抗性。【方法】pcr扩增家蚕肠道内细菌16S rRNA基因并构建克隆文库;用核糖体DNA限制性分析(Amplified ribosomal DNA restriction anal... 详细信息

【目的】探讨氟化物对家蚕肠道微生物菌群的影响,开发具有潜在应用价值的益生菌以提高家蚕对氟化物的抗性。【方法】pcr扩增家蚕肠道内细菌16S rRNA基因并构建克隆文库;用核糖体DNA限制性分析(Amplified ribosomal DNA restriction analysis,ARDRA)方法对克隆子进行分型。从家蚕T6和734肠道样品中共获得14种分类操作单元(Operational taxonomic unit,OTUs),以16S rRNA基因为基础构建系统发育树进行分析。再经巢式pcr-dgge技术检测家蚕肠道内优势菌群的变化。【结果】结果表明:家蚕氟中毒后肠道内肠球菌属Enterococcus和芽孢杆菌属Bacillus细菌菌群减少,而葡萄球菌属Staphylococcus的细菌增多。【结论】氟化物能通过改变家蚕肠道内细菌的多样性和比例,从而破坏家蚕肠道微生物菌群平衡,且对家蚕734的影响作用大于T6。

关键词：家蚕氟化物肠道菌群克隆文库巢式pcr-dgge

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蚕用益生芽孢杆菌SWL-19的筛选鉴定及其对肠道菌群多样性的影响

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中国农业科学 2015年第9期48卷 1845-1853页

作者：李冠楠夏雪娟 SENDEGEYA Parfait 何石宝郭东东朱勇西南大学生物技术学院西南大学食品科学学院

【目的】筛选对家蚕(Bombyx mori)具有益生作用的芽孢杆菌,改善家蚕肠道微环境,促进蚕业生产的发展。【方法】采用高温选育法对家蚕肠道内的芽孢杆菌进行初筛;以产胞外消化酶(蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶)及能在肠道定殖为基础,... 详细信息

【目的】筛选对家蚕(Bombyx mori)具有益生作用的芽孢杆菌,改善家蚕肠道微环境,促进蚕业生产的发展。【方法】采用高温选育法对家蚕肠道内的芽孢杆菌进行初筛;以产胞外消化酶(蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶)及能在肠道定殖为基础,结合溶血试验、抗生素药敏试验和产消化酶能力大小等对芽孢杆菌进行复筛。通过形态、生理生化特征和16S r DNA序列分析鉴定菌种,再利用变性梯度凝胶电泳(dgge)技术检测其在家蚕肠道内定殖情况及其对肠道内微生物菌群多样性的影响。【结果】共从57株细菌中筛选出两株能同时产蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶且不产生溶血现象的芽孢杆菌SWL-17和SWL-19。14种抗生素药敏纸片检测结果表明,二者对绝大多数抗生素敏感,且敏感程度基本相同。除SWL-19不能利用蔗糖发酵外,两个株菌的革兰氏染色、芽孢染色、产酸产气、柠檬酸利用、葡萄糖发酵、硝酸盐还原和V-P等生理生化特性均相同。二者生长速度相同,但菌落形态特征差异较大。SWL-17的菌落形态为淡黄色,圆形隆起,表面光滑湿润,边缘整齐,而SWL-19的菌落形态为乳白色不透明,表面扁平干燥,边缘不整齐。SWL-17产蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶的能力分别为(1.62±0.04)、(2.12±0.11)、(1.87±0.03)和(1.43±0.03),SWL-19的产酶能力分别为(2.91±0.05)、(2.43±0.04)、(3.24±0.12)和(3.48±0.10)。因此SWL-19具有较高的产消化酶能力,且除脂肪酶外,其产蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶的能力均显著性高于SWL-17(Pdgge试验结果表明,自然条件下家蚕肠道内的优势菌群为肠球菌属(Enterococcus)细菌,而外源性添加菌株SWL-19后能使家蚕肠道内的芽孢杆菌属和肠杆菌属细菌成为优势菌群,说明芽孢杆菌SWL-19能在家蚕肠道内定殖,并且能改变家蚕肠道内微生物菌群的结构和多样性。【结论】家蚕益生芽孢杆菌的筛选为研发蚕用复合微生态制剂提供菌株资源,在蚕业生产上具有重要的应用价值。

关键词：益生菌筛选家蚕肠道菌群芽孢杆菌巢式pcr-dgge

水库贫营养好氧反硝化细菌分离及其对水体微生物群落影响

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西安建筑科技大学学报（自然科学版） 2012年第6期44卷 876-882页

作者：黄廷林刘婷婷张海涵杨霄郭琳西安建筑科技大学环境与市政工程学院陕西西安710055

经过贫营养好氧反硝化选择性培养基的初步筛选,从水源水库沉积物中分离得到234株贫营养好氧反硝化细菌,并对其脱氮特性和高效菌株对水体功能微生物种群的调控机制进行探索.结果表明,8株贫营养好氧反硝化细菌在48h内脱氮率达80%以上.经过... 详细信息

经过贫营养好氧反硝化选择性培养基的初步筛选,从水源水库沉积物中分离得到234株贫营养好氧反硝化细菌,并对其脱氮特性和高效菌株对水体功能微生物种群的调控机制进行探索.结果表明,8株贫营养好氧反硝化细菌在48h内脱氮率达80%以上.经过16srDNA序列分析,确定分子遗传种属为不动杆菌属、链霉菌属、嗜甲基菌属、根瘤菌、假单胞菌、鞘氨醇单胞菌和溶杆菌属等.巢式pcr-dgge结果表明接种高效贫营养好氧反硝化细菌HF3对原水水体功能微生物(细菌、真菌、放线菌和硫酸盐还原菌)种群结构多样性影响不显著,对原水微生物生态种群影响微弱.

关键词：水库沉积物好氧反硝化细菌微生物群落巢式pcr-dgge

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典型微污染水体微生物种群结构及贫营养好氧反硝化细菌脱氮性能研究

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典型微污染水体微生物种群结构及贫营养好氧反硝化细菌脱氮性能研...

作者：邸诗雨西安建筑科技大学

学位级别：硕士

随着水库、湖泊和城市景观水体污染的日益加剧，城市供水水质标准的不断提高，景观水体微生物种群结构及微污染水体的生物处理越来越受到人们的关注。在课题组前期研究的基础上，本研究选取西安市区9个典型景观水体为研究对象，在分析... 详细信息

随着水库、湖泊和城市景观水体污染的日益加剧，城市供水水质标准的不断提高，景观水体微生物种群结构及微污染水体的生物处理越来越受到人们的关注。在课题组前期研究的基础上，本研究选取西安市区9个典型景观水体为研究对象，在分析水体水质指标基础上，运用巢式pcr-dgge和克隆测序技术诊断景观水体细菌和真菌群落结构多样性。进一步从某水库沉积物筛分出的好氧反硝化细菌，并应用于微污染水体净化水质这一新型技术进行相关实验研究。探讨了采用直接投加高效好氧反硝化细菌净化水体这一过程中，菌株适应原水条件及实验控制条件等，从而使菌株能够最大效率发挥其脱氮功能。本研究的主要结果为：（1）西安市区9个典型景观水体均为劣Ⅴ类水，在研究期间pH值范围在8.5—9.5之间，水温在20—30℃之间，溶解氧浓度在8.0—10.5mg/L之间。9个水体的总氮含量均大于2mg/L。巢式pcr-dgge图谱主成分分析（PCA）结果显示，莲湖公园、永阳公园和大明宫水体细菌种群相似度高，丰庆公园、新纪元公园、曲江池和革命公园水体细菌种群多样性相似，而兴庆湖水体细菌群落结构与其他水体差异显著。莲湖公园、永阳公园和大明宫水体细菌种群结构主要受水体硝氮、总氮和溶解氧含量的调控，其中硝氮含量影响显著。大明宫、莲湖公园、丰庆公园、新纪元公园和兴庆湖水体真菌种类高度相似，革命水体真菌群落结构与其他水体存在差异，种群受到总氮、硝氮和氨氮的综合调控。茎点霉属（Phomasp.）为革命公园水体中优势真菌。可见，西安市典型景观水体悬浮细菌和真菌群落结构特征受到不同水质指标的综合调控。（2）本实验2012年11月至2013年3月从山东省某水库沉积物中筛选驯化337株好氧反硝化细菌。选取脱氮效果较好且形态不同的8株菌作为实验菌株。在纯培养条件下这8株菌48h内硝氮去除率均大于70%，其中2株菌48h硝氮去除率可达到90%以上;48h内总氮去除率最高可达到62%。根据脱氮特性的不同对8株菌进行复配，并在纯培养条件下挑选了脱氮效率较高的F3及F6复配组合作为原水试验的菌种。（3）根据实验可行性、脱氮效果的好坏及用时的长短进行比较，结果认为适应方法四（灭菌原水五步替换适应法）及方法五（未灭菌原水五步适应法）都是原水适应中较好的方法。菌株通过两种适应方法在原水中可达到40%的硝氮去除率。（4）通过四次原水试验，得到以下结果：筛选出的菌株及复配组合在原水试验中效果较好的为F6复配组合和D7菌株，其次为F3复配组合、D3＆D7复配组合和D3菌株。投菌量的计算采用平板计数法确定细菌个数后确定投菌量。较好的的原水实验中的投菌量约为105CFU。相对于空白对照组，脱氮效果可达到总氮去除率40%，硝氮去除率可达到58%，且没有亚硝氮积累，去除效果稳定。（5）通过分析原水试验中的控制条件可得到：在原水试验中温度不控制，室温状态下可得到较好的脱氮效果;溶解氧3-5mg/L时脱氮效果较好，但与其他溶解氧浓度下脱氮效果的区别不大;搅拌混合作用是影响脱氮效果的重要因素。

关键词：微污染水体脱氮好氧反硝化微生物群落巢式pcr-dgge

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胀罐酱油污染微生物的分离鉴定与性质研究

胀罐酱油污染微生物的分离鉴定与性质研究

作者：李娜华南理工大学

学位级别：硕士

酱油是我国历史悠久的酿造型调味食品,深受广大人民欢迎。随着对酱油探究的逐步深入,发现酱油对人体具有保健作用,而良好的酱油品质是发挥其保健作用的基础。若酱油发生胀气、胀罐等现象,不仅影响产品外观,而且会降低酱油的品质。研究发... 详细信息

酱油是我国历史悠久的酿造型调味食品,深受广大人民欢迎。随着对酱油探究的逐步深入,发现酱油对人体具有保健作用,而良好的酱油品质是发挥其保健作用的基础。若酱油发生胀气、胀罐等现象,不仅影响产品外观,而且会降低酱油的品质。研究发现,酱油胀气、胀罐现象的发生与微生物活动密切相关。因此,本论文从酱油成品与酱醅的基本理化性质,以及酱油中微生物组成两方面入手,对三个不同产地的酱油进行分析,试图阐释酱油发生胀罐、胀气的原因。主要的研究方法与成果如下:⑴运用生化检测手段与HPLC技术研究了同批次正常成品酱油与胀罐酱油的基本理化性质,包括酱油的p H值、总酸度、含盐量、还原糖、乳酸与乙酸等。实验结果表明酱油样品中乙酸含量差异较小,且含盐量在标准范围16%8%之内。胀罐酱油中乳酸含量均高于正常酱油,而还原糖含量却低于正常酱油。说明胀罐酱油的部分理化性质发生了改变。⑵运用传统的平板培养与巢式pcr-dgge技术研究了胀罐酱油与正常酱油中主要污染菌的差异。实验结果表明:平板培养筛选到4株菌(Bacillus subtilis,Lactobacillus acidipiscis,***和***);巢式pcr-dgge方法鉴定到4株菌(***,***,***和Lactobacillus sp.);两种方法均能鉴定到***菌株。正常酱油中主要污染菌为***,***,***和***;胀罐酱油中主要污染菌为***,***,***,***,***,***和Lactobacillus sp..可看出胀罐成品酱油中污染菌多于正常酱油,而腐败酱油的理化性质改变可能与其中的微生物生长代谢相关。⑶为了筛选到产气能力较强的菌株,本研究从酱醅中筛选到2株新的微生物菌株(Enterobacter aerogenes,Enterococcus faecium),其中***产气能力很强。将(***,***,***)三株产气菌接种到成品酱油中,发现酱油p H值会发生微弱改变;并且这三株菌对温度、p H值、盐度均有一定程度的耐受性。说明酱醅中污染微生物若灭菌不彻底,遗留在酱油成品中,会导致酱油胀气腐败。这三株菌的分离鉴定,对酱油的质量保证和食用安全性具有重要意义。通过以上研究,我们初步探究了胀罐酱油发生腐败的原因,为酱油生产与保藏提供了实验与技术支持。

关键词：酱油巢式pcr-dgge 平板培养 HPLC 理化性质

蚕用益生芽孢杆菌SWL-19的筛选鉴定及其对肠道菌群多样性的影响

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蚕用益生芽孢杆菌SWL-19的筛选鉴定及其对肠道菌群多样性的影响

第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：李冠楠夏雪娟 SENDEGEYA Parfait 何石宝郭东东朱勇

【目的】筛选对家蚕（Bombyx mori）具有益生作用的芽孢杆菌,改善家蚕肠道微环境,促进蚕业生产的发展。【方法】采用高温选育法对家蚕肠道内的芽孢杆菌进行初筛;以产胞外消化酶（蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶）及能在肠道定殖为基... 详细信息

【目的】筛选对家蚕（Bombyx mori）具有益生作用的芽孢杆菌,改善家蚕肠道微环境,促进蚕业生产的发展。【方法】采用高温选育法对家蚕肠道内的芽孢杆菌进行初筛;以产胞外消化酶（蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶）及能在肠道定殖为基础,结合溶血试验、抗生素药敏试验和产消化酶能力大小等对芽孢杆菌进行复筛。通过形态、生理生化特征和16S r DNA序列分析鉴定菌种,再利用变性梯度凝胶电泳（dgge）技术检测其在家蚕肠道内定殖情况及其对肠道内微生物菌群多样性的影响。【结果】共从57株细菌中筛选出两株能同时产蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶且不产生溶血现象的芽孢杆菌SWL-17和SWL-19。14种抗生素药敏纸片检测结果表明,二者对绝大多数抗生素敏感,且敏感程度基本相同。除SWL-19不能利用蔗糖发酵外,两个株菌的革兰氏染色、芽孢染色、产酸产气、柠檬酸利用、葡萄糖发酵、硝酸盐还原和V-P等生理生化特性均相同。二者生长速度相同,但菌落形态特征差异较大。SWL-17的菌落形态为淡黄色,圆形隆起,表面光滑湿润,边缘整齐,而SWL-19的菌落形态为乳白色不透明,表面扁平干燥,边缘不整齐。SWL-17产蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶的能力分别为（1.62±0.04）、（2.12±0.11）、（1.87±0.03）和（1.43±0.03）,SWL-1的产酶能力分别为（2.91±0.05）、（2.43±0.04）、（3.24±0.12）和（3.48±0.10）。因此SWL-19具有较高的产消化酶能力,且除脂肪酶外,其产蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶的能力均显著性高于SWL-17（P＜0.05）。细菌16S rDNA序列比对和系统发育分析表明SWL-17和SWL-19分别为芽孢杆菌（Bacillus sp.）和枯草芽孢杆菌（***）,且SWL-19具有更清楚的遗传背景,适于进行后续试验。进一步dgge试验结果表明,自然条件下家蚕肠道内的优势菌群为肠球菌属（Enterococcus）细菌,而外源性添加菌株SWL-19后能使家蚕肠道内的芽孢杆菌属和肠杆菌属细菌成为优势菌群,说明芽孢杆菌SWL-19能在家蚕肠道内定殖,并且能改变家蚕肠道内微生物菌群的结构和多样性。【结论】家蚕益生芽孢杆菌的筛选为研发蚕用复合微生态制剂提供菌株资源,在蚕业生产上具有重要的应用价值。

关键词：益生菌筛选家蚕肠道菌群芽孢杆菌巢式pcr-dgge

来源： cnki会议评论

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氟化物对家蚕肠道微生物菌群的影响

氟化物对家蚕肠道微生物菌群的影响