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巢式pcr法构建人细胞色素P4501A1基因cDNA全长T载体

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广东医学 2005年第8期26卷 1046-1048页

作者：肖勇梅刘移民魏青侯孟君招小林凌文华中山大学公共卫生学院预防医学系广州510089 广东省广州市职业病防治院 510620

目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM -T载体。方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM- 000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-pcr方法扩增CYP... 详细信息

目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM -T载体。方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM- 000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-pcr方法扩增CYP1A1 mRNA全长,凝胶分离并回收扩增的DNA片断,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5α,挑选3个阳性克隆,扩增培养后抽提重组质粒并进行pcr及酶切鉴定, 再行测序分析。结果重组质粒pcr扩增得到1568 bp的片段,KpnI,XhoI限制性内切酶消化质粒证实目的片断成功插入至载体,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性为99.9%。结论该实验成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体克隆,巢式-pcr是一种简便、特异、灵敏的方法, 可用于基因的检测和载体的构建。

关键词：巢式pcr法人细胞色素P4501A1 基因表达 cDNA T载体代谢产物流行病学

用拓扑异构酶Ⅱ基因区巢式pcr法鉴别常见皮肤癣菌

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中华皮肤科杂志 2005年第8期38卷 521-522页

作者：李家文丁娟谭志建刘志香华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科武汉430022

皮肤癣菌病在人群中有较高的发病率,其临床表现、治疗效果等根据不同的病原真菌而有所不同,而且往往表现为一定的地域流行趋势[1,2],因此临床上快速准确地鉴定病原菌种对皮肤癣菌病的治疗和流行病学研究都显得相当重要.目前用于真菌菌... 详细信息

皮肤癣菌病在人群中有较高的发病率,其临床表现、治疗效果等根据不同的病原真菌而有所不同,而且往往表现为一定的地域流行趋势[1,2],因此临床上快速准确地鉴定病原菌种对皮肤癣菌病的治疗和流行病学研究都显得相当重要.目前用于真菌菌种鉴定的分子生物学方法很多,用于分类研究的真菌基因包括编码核糖体的rDNA、某些蛋白质的编码基因、全基因组等[3,4]。

关键词：皮肤癣菌病巢式pcr法拓扑异构酶Ⅱ 基因区分子生物学方法病原真菌鉴别流行病学研究菌种鉴定

人野生型抑癌基因PTEN/MMAC1的巢式pcr法克隆、测序及表达载体的构建

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吉林大学学报（医学版） 2003年第1期29卷 9-12页

作者：田梅刘林林李修义吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室吉林长春130021 吉林大学第二医院放疗科

目的 :克隆人野生型抑癌基因 PTEN/MMAC1 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用RT- nested pcr法从正常人胎盘组织中扩增出约 1 2 0 0 bp的 DNA片段 ,与 p UCm- T载体连接 ,作全自动测序确证 ,并将其重组入 pc DNA 3.1载体中 ,构建为... 详细信息

目的 :克隆人野生型抑癌基因 PTEN/MMAC1 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用RT- nested pcr法从正常人胎盘组织中扩增出约 1 2 0 0 bp的 DNA片段 ,与 p UCm- T载体连接 ,作全自动测序确证 ,并将其重组入 pc DNA 3.1载体中 ,构建为表达质粒 pc DNA- w P。结果 :对 pcr产物进行测序 ,序列基本正确。结论 :利用 RT- nested pcr法成功克隆了人野生型抑癌基因 PTEN/MMAC1c DNA序列并构建了表达质粒 pc DNA- w P。

关键词： PTEN/MMAC1 逆转录聚合酶链反应巢式pcr法表达载体基因抑制肿瘤基因表达

采用多对型特异性引物巢式pcr法研究江西省HBV基因型分布及其临床相关性

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第2期29卷 175-176页

作者：温志立邓青张华吴平张海明南昌市第一医院消化二科 330008 中南大学湘雅医学院博士后流动站南昌市卫生学校

根据HBV全基因序列的差异≥8％或者S区基因序列差异≥4％可将其分为A、B、C、D、E、F等基因型。HBV基因型的分布具有地域性，东南亚地区慢性乙型肝炎病毒感染者中以B和C基因型为主。在我国，北方地区以C型为主，南方以B型为主。

关键词： HBV基因型基因型分布多对型特异性引物巢式pcr法临床相关性江西省慢性乙型肝炎全基因序列

通用引物巢式pcr法对哈萨克族食管鳞癌HPV感染的检测

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世界华人消化杂志 2012年第12期20卷 1049-1053页

作者：陈卫刚杨春梅徐丽红张宁刘晓燕马云贵霍小玲韩玉胜田德安郑勇新疆石河子大学医学院第一附属医院消化内科新疆维吾尔自治区石河子市832000 新疆伊犁哈萨克自治州新源县人民医院新疆维吾尔自治区新源县835800 新疆生产建设兵团农四师医院新疆维吾尔自治区伊宁市835000 新疆伊犁哈萨克自治州友谊医院新疆维吾尔自治区伊宁市835000 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科湖北省武汉市43000

目的:应用通用引物巢式pcr技术检测新疆哈萨克族食管鳞癌人乳头瘤病毒(HPV)的感染率,并探讨HPV与新疆哈萨克族食管鳞癌的关系.方法:提取新疆哈萨克族食管鳞癌及正常食管组织的DNA,应用通用引物HPV MY09/11及HPV G5+/6+进行巢式pcr,检测... 详细信息

目的:应用通用引物巢式pcr技术检测新疆哈萨克族食管鳞癌人乳头瘤病毒(HPV)的感染率,并探讨HPV与新疆哈萨克族食管鳞癌的关系.方法:提取新疆哈萨克族食管鳞癌及正常食管组织的DNA,应用通用引物HPV MY09/11及HPV G5+/6+进行巢式pcr,检测新疆哈萨克族食管鳞癌中HPV的感染率.结果:巢式pcr法扩增后检测到食管鳞癌中HPV感染率为66.67%,正常对照组为12.12%,两者差异有统计学意义(P巢式pcr法可以更加方便可靠的检测HPV-DNA.

关键词：哈萨克族食管鳞癌人乳头瘤病毒巢式pcr法

巢式pcr法检测儿童咽拭子TTV及临床意义

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中国实验诊断学 2002年第2期6卷 111-112页

作者：丁庆黄锡全邵启群李良菊马斌江苏大学医学技术学院微免教研室江苏镇江212001

输血传播病毒(TTV)主要通过输血和毒品静脉注射等非肠道途径传播,可从粪便中检出病毒,故兼有粪-口传播的可能性.这种双途径传播方式,有可能促进TTV在世界范围内扩散[1].

关键词：巢式pcr法检测儿童咽拭子 TTV 临床意义输血传播病毒

多引物对巢式pcr法检测HBV基因型的流行病学分析

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世界华人消化杂志 2004年第5期12卷 1073-1076页

作者：谷鸿喜徐子龙刘建宇钟照华王华庆张淑云李迪张海红阿部贤治哈尔滨医科大学微生物教研室黑龙江省哈尔滨市150086 呼伦贝尔盟防疫站检验科内蒙古海拉尔021008 日本国立感染症研究所病理室

目的:掌握我国北方地区乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV基因型分布情况,为了解其流行病学及临床意义提供基础. 方法:首先采用巢式pcr法对801份血清进行HBV DNA检测,其中包括154份健康人血清、594份HBV感染的各类肝病患者及53例抗HCV阳性血... 详细信息

目的:掌握我国北方地区乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV基因型分布情况,为了解其流行病学及临床意义提供基础. 方法:首先采用巢式pcr法对801份血清进行HBV DNA检测,其中包括154份健康人血清、594份HBV感染的各类肝病患者及53例抗HCV阳性血清标本.再采用HBV A- F六个主要基因型特异性多引物对巢式pcr法对HBV DNA 进行基因型检测及分析. 结果:在801例血清标本中有464例(57.9%)检测到HBV DNA,其中154名健康人血清阳性率为8.4%(13/154), 594例不同临床表现的乙肝患者血清HBV DNA总检出率为74.4%(442/594),二者相比差异显著(P<0.01);抗HCV阳性血清中检出HBV DNA占17%(9/53).464例HBV DNA阳性标本中,HBV基因型检出率分别是:A型为5.2%(24/464), B型为7.1%(33/464),C型为77.2%(358/464),D型2.4% (11/464),未检出E和F型,但尚有14例(3%)同时检出B型和C型,有24例未检出型别.急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、原发肝癌各不同临床表现组间基因型分布无统计学差异. 结论:结果看出,我国北方地区感染的HBV基因型存在A、B、C、D四个型别,其中C型为主(77.2%),各临床表现组基因型分布也均以C型为主,组间无统计学差异.

关键词：引物巢式pcr法 HBV基因型流行病学乙型肝炎病毒肝硬化

镜检和疟原虫抗原快速检测(RDT)胶体金法及巢式pcr法在疟疾诊断中的价值

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当代医学 2021年第29期27卷 82-84页

作者：梁文娇辽宁省朝阳市疾病预防控制中心微生物检测所辽宁朝阳122000

目的探究镜检、疟原虫抗原快速检测(RDT)胶体金法、巢式pcr法在疟疾诊断中的价值。方法选取2019年2月至2020年2月本中心收治的疑似疟疾患者50例作为研究对象,所有患者均接受镜检、RDT胶体金法、巢式pcr法,以实验室检测结合临床特征结果... 详细信息

目的探究镜检、疟原虫抗原快速检测(RDT)胶体金法、巢式pcr法在疟疾诊断中的价值。方法选取2019年2月至2020年2月本中心收治的疑似疟疾患者50例作为研究对象,所有患者均接受镜检、RDT胶体金法、巢式pcr法,以实验室检测结合临床特征结果为金标准,比较3种方式检测结果。结果实验室检测结合临床特征结果显示,50例疑似疟疾患者中,阳性36例,阴性14例。经镜检法检出疟疾28例,检出率为46.67%;经RDT胶体金法检出疟疾35例,检出率为58.33%;经巢式pcr法检出疟疾30例,检出率为50.00%;RDT胶体金法准确度及灵敏度均高于镜检法、巢式pcr法,差异有统计学意义(P法特异度、阳性预测值、阴性预测值比较差异无统计学意义。结论在疟疾临床诊断中,RDT胶体金法具有较高的灵敏度及检出率,且与镜检、巢式pcr法联合诊断,可进一步提高检出率,为临床治疗提供依据。

关键词：疟疾镜检疟原虫抗原快速检测(RDT)胶体金法巢式pcr法

新型冠状病毒巢式pcr检测方法的建立与初步应用

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中华实验和临床病毒学杂志 2022年第2期36卷 214-218页

作者：石伟先冯兆民崔淑娟潘阳钱城辛若雷杨鹏王全意张代涛高志勇北京市疾病预防控制中心传染病地方病控制所北京100013

目的建立一种检测新型冠状病毒的巢式pcr方法,作为实时荧光pcr法检测新型冠状病毒的补充,并探讨该方法在临床样本检测中的初步应用价值。方法根据新型冠状病毒基因保守序列,利用在线软件设计N、S基因引物,构建巢式pcr反应体系,N基因巢式... 详细信息

目的建立一种检测新型冠状病毒的巢式pcr方法,作为实时荧光pcr法检测新型冠状病毒的补充,并探讨该方法在临床样本检测中的初步应用价值。方法根据新型冠状病毒基因保守序列,利用在线软件设计N、S基因引物,构建巢式pcr反应体系,N基因巢式pcr及产物测序用于定性检测,S基因pcr产物测序用于型别初步鉴定。检测梯度稀释新型冠状病毒阳性样本评价检测灵敏度,检测流感病毒和人冠状病毒OC43、229E、HKU1、NL63等样本评价其特异性。分别检测Ct值>33与Ct值法进行验证。结果所建立的巢式pcr法可扩增出355 bp N基因片段及449 bp S基因片段的特异性条带,冠状病毒229E、OC43、HKU1、NL63、H3N2亚型流感病毒、甲型H1N1流感病毒、乙型流感病毒阳性样本无扩增条带。N基因片段最低检测限可达Ct值37.21。30份新冠核酸阳性样本中,巢式pcr检测的N基因阳性符合一致率达100%(30/30);S基因阳性符合一致率达60%(18/30)。28份样本N基因片段测序成功,BLAST与新型冠状病毒相似性100%。12份样本S基因片段可获得位点突变特征结果。结论建立了可特异检测新型冠状病毒的巢式pcr方法,并可通过对pcr扩增产物测序分析其位点突变特征,可作为实时荧光pcr法的补充。

关键词：新型冠状病毒实时荧光pcr法巢式pcr法