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巢式逆转录聚合酶链反应检测冠状病毒的研究

中华检验医学杂志 2004年第7期27卷 443-445页

作者：温韬邱道明黄德庄郎振为闫惠平檀玉芬张永宏丁惠国吴昊首都医科大学附属北京佑安医院 100054 美国斯坦福大学医学院呼吸系北京市肝炎研究所

目的建立一种新的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)反应模式,以提高传染性非典型肺炎(SARS)冠状病毒检测的阳性率和研究病毒在机体的定位状态和致病机理。方法采用两种RT-PCR反应模式检测SARS患者血浆、淋巴细胞、粪便以及肺组织中病毒核... 详细信息

目的建立一种新的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)反应模式,以提高传染性非典型肺炎(SARS)冠状病毒检测的阳性率和研究病毒在机体的定位状态和致病机理。方法采用两种RT-PCR反应模式检测SARS患者血浆、淋巴细胞、粪便以及肺组织中病毒核酸。结果和常规PCR方法相比,新的PCR反应模式能显著提高标本中病毒的检出率,差别有统计学意义;急性期SARS患者淋巴细胞中病毒阳性率较高(84.6％);血浆中病毒阳性率较低(11.5％)。结论新RT-PCR反应模式可能有利于早期诊断、筛检SARS病原体;淋巴细胞中病毒的检出率较高,提示此类标本可用于SARS实验室诊断,对分析和阐明SARS的发病机制亦可能有一定的指导作用。

关键词：巢式逆转录聚合酶链反应检测冠状病毒淋巴细胞传染性非典型肺炎

激光微切和巢式逆转录聚合酶链反应联合检测单个肝细胞的基因表达

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中华肝脏病杂志 2003年第1期11卷 30-32页

作者：石欣高乃荣霍明东胡浩霖 Friess Helmut Buchler Markus 东南大学附属中大医院普外科南京210009 德国海德堡大学医院普外科

目的探讨检测单个肝细胞基因表达的方法。方法应用激光微切的方法从冰冻切片上将单个肝细胞切下,提取总RNA,将RNA逆转录成cDNA,采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA的表达。结果在显微镜下用紫外激光微切机,将单个肝细胞成功切... 详细信息

目的探讨检测单个肝细胞基因表达的方法。方法应用激光微切的方法从冰冻切片上将单个肝细胞切下,提取总RNA,将RNA逆转录成cDNA,采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA的表达。结果在显微镜下用紫外激光微切机,将单个肝细胞成功切下,提取RNA后,逆转录成cDNA,巢式RT-PCR的扩增产物在琼脂糖凝胶上清晰可见,其表达与细胞数量成正比。结论联合应用激光微切和巢式RT-PCR可以检测单个肝细胞的基因表达。

关键词： mRNA cDNA 肝癌诊断激光微切巢式逆转录聚合酶链反应检测单个肝细胞基因表达

巢式逆转录聚合酶链反应在轮状病毒型别鉴定中的适用性

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微生物学免疫学进展 2020年第2期48卷 28-32页

作者：王革胡广宏王云瑾马超兰州生物制品研究所有限责任公司质量检定室甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046

目的以巢式逆转录聚合酶链反应(nested reverse transcription PCR, Nested-RT-PCR)鉴定轮状病毒型别,并对其适用性进行验证。方法提取轮状病毒基因组RNA,以逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR, RT-PCR)扩增轮状病毒VP7基因... 详细信息

目的以巢式逆转录聚合酶链反应(nested reverse transcription PCR, Nested-RT-PCR)鉴定轮状病毒型别,并对其适用性进行验证。方法提取轮状病毒基因组RNA,以逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR, RT-PCR)扩增轮状病毒VP7基因序列,再以Nested-RT-PCR扩增各型别轮状病毒特异性目的基因片段,将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测其基因片段的大小,并与Genbank报道的相应基因序列片段预计大小进行对比,以确定各毒株的型别。分析该方法的特异性、灵敏度及准确性,对Nested-RT-PCR鉴定轮状病毒型别的适用性进行验证。结果 Nested-RT-PCR法可特异性扩增各型别轮状病毒特异性目的基因片段,所检测的轮状病毒型别特异性目的基因片段与Genbank报道的相应基因序列片段大小相符,可用于轮状病毒型别鉴定。适用性验证结果显示,此方法所用引物特异性好,能特异性扩增相应型别的轮状病毒目的基因片段;具有较高的灵敏度,可检出RNA质量浓度为0.5 ng/μL的样本,其检测灵敏度高于PrimeScriptTM One Step RT-PCR试剂盒检测灵敏度;准确性检测结果与PrimeScriptTM One Step RT-PCR试剂盒检测结果一致,且同型别轮状病毒检测重复试验结果一致。结论该方法特异、灵敏、准确,可有效判断轮状病毒毒株型别,避免了PrimeScriptTM One Step RT-PCR试剂盒检测由于样本含量低而造成的检测结果的假阴性,适用于轮状病毒毒株的检测和多价轮状病毒疫苗的质量控制。

关键词：巢式逆转录聚合酶链反应轮状病毒型别鉴定验证

用改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术检测血中CK20mRNA

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实用临床医学（江西） 2006年第12期7卷 27-28页

作者：胡庆宏易诚予刘明圭南昌大学第一附属医院细胞基因室南昌330006

目的建立一种简便、快速的检测血中微量大肠癌细胞CK20mRNA的方法。方法用改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术检测血中大肠癌标准细胞株VoLo的CK20mRNA。结果浓度分别为1、10、100、1000个/mL的大肠癌标准细胞株LoVo的每份标本,均扩增出... 详细信息

目的建立一种简便、快速的检测血中微量大肠癌细胞CK20mRNA的方法。方法用改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术检测血中大肠癌标准细胞株VoLo的CK20mRNA。结果浓度分别为1、10、100、1000个/mL的大肠癌标准细胞株LoVo的每份标本,均扩增出了符合所设计片段大小的303bp的目的产物条带。结论用改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术检测血中微量存在的大肠癌细胞CK20mRNA具有简便、快速、灵敏的优点,可以大力地推广于临床。

关键词：细胞角蛋白20 大肠癌逆转录聚合酶链反应巢式逆转录聚合酶链反应

改良巢式逆转录聚合酶链反应检测大肠癌血中微转移

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江西医学院学报 2009年第4期49卷 115-116,121页

作者：胡庆宏易诚予彭燕刘明圭熊建萍南昌大学第一附属医院细胞基因室南昌330006 南昌大学第一附属医院肿瘤科南昌330006

目的探讨改良巢式RT-PCR法检测大肠癌患者外周血中CK20mRNA的表达情况,并分析其与微转移的关系,建立一种简便、快速的检测血中癌细胞微转移的方法。方法采用改良的巢式RT-PCR技术检测大肠癌患者及正常对照组外周血CK20mRNA的表达。结果C... 详细信息

目的探讨改良巢式RT-PCR法检测大肠癌患者外周血中CK20mRNA的表达情况,并分析其与微转移的关系,建立一种简便、快速的检测血中癌细胞微转移的方法。方法采用改良的巢式RT-PCR技术检测大肠癌患者及正常对照组外周血CK20mRNA的表达。结果CK20mRNA在正常对照组中均无表达,在大肠癌患者中阳性表达率为55.4%(62/112)。不同细胞分化程度大肠癌患者其外周血中CK20mRNA阳性表达率无显著性差异(P>0.05);而不同Dukes分期大肠癌患者其外周血中CK20mRNA阳性表达率有显著性差异(P巢式RT-PCR技术检测血中微转移大肠癌细胞的CK20mRNA具有简便、快速、灵敏的优点,有助于癌细胞微转移的早期诊断,有助于指导辅助化疗和监测疗效。

关键词：大肠癌细胞角蛋白20 巢式逆转录聚合酶链反应

逆转录聚合酶链反应在艾滋病患者HIV-1毒株env基因的序列测定和亚型分析中的应用

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中华检验医学杂志 2005年第4期28卷 430-432页

作者：王辉李兵徐六妹陆坚李丽雄胡毅文周伯平广东省深圳市东湖医院深圳市肝病研究所 518020

目的了解深圳地区艾滋病患者中Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)毒株各亚型的感染情况,及其不同亚型对患者疾病进程的影响。方法采用巢式逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法对26例艾滋病患者血浆中的HIV-1毒株的env基因片段进行扩增,并对扩增片段... 详细信息

目的了解深圳地区艾滋病患者中Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)毒株各亚型的感染情况,及其不同亚型对患者疾病进程的影响。方法采用巢式逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法对26例艾滋病患者血浆中的HIV-1毒株的env基因片段进行扩增,并对扩增片段进行序列测定和分析,同时检测其CD4+细胞计数与血浆病毒载量。结果基因系统树显示深圳地区26例艾滋病患者的HIV-1毒株env基因序列,B亚型12例,其中1例与欧美B亚型序列十分接近,11例与中国云南B亚型序列十分接近;循环重组亚型AE(CRF01AE)13例,均与泰国AE亚型序列十分接近。比较B、AE亚型感染患者的CD4细胞计数与病毒载量之间的差异无统计学意义。结论深圳地区艾滋病患者中以HIV-1毒株以B亚型和循环重组亚型AE最常见,尚未观察到B、AE亚型对艾滋病进展的影响。

关键词： HIV-1毒株艾滋病患者序列测定 env基因亚型分析巢式逆转录聚合酶链反应 Ⅰ型人类免疫缺陷病毒 CD4^+细胞计数 CD4细胞计数深圳地区血浆病毒载量毒株env B亚型 E亚型感染情况疾病进程不同亚型基因片段患者血浆

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巢式PCR诊断儿科患者鼻病毒感染的探讨

中华流行病学杂志 2006年第2期27卷 154-156页

作者：赵林清钱渊朱汝南邓洁王芳首都儿科研究所病毒研究室北京市感染与免疫中心实验室 100020

目的了解儿科急性呼吸道感染的病毒病原,建立快速、敏感、特异的检测鼻病毒（HRV）的方法.方法根据已发表的HRV的核苷酸序列设计巢式PCR引物,并用多种呼吸道病毒的标准毒株确定方法的特异性.收集2002年11月至2003年10月的急性呼吸道感... 详细信息

目的了解儿科急性呼吸道感染的病毒病原,建立快速、敏感、特异的检测鼻病毒（HRV）的方法.方法根据已发表的HRV的核苷酸序列设计巢式PCR引物,并用多种呼吸道病毒的标准毒株确定方法的特异性.收集2002年11月至2003年10月的急性呼吸道感染患儿标本771例,应用巢式PCR方法检测标本中有无HRV基因片段.结果特异性检测结果显示仅HRV cDNA有预期大小的片段扩增.771例标本中HRV总检出例数为148例（148/771）,占19.2%;HRV阳性检出率在咽炎患儿中达到53.3%（8/15）,喉炎患儿43.8%（7/16）,支气管炎患儿为28.7%（29/101）,其他如急性扁桃体炎、急性肺炎等患儿也有较高的HRV阳性检出率.在2002年11月以及2003年8-10月HRV检测阳性率较高（21.6%～32.6%）,尤其在2003年9月份HRV检测阳性率最高,达到32.6%;2003年3-7月HRV阳性标本所占百分率较平稳,在16.0%～19.1%之间.结论建立的巢式RT-PCR可以检测到儿科呼吸道感染患儿标本中的鼻病毒基因片段;HRV是北京婴幼儿急性呼吸道感染的重要病毒病原之一.

关键词：鼻病毒巢式逆转录聚合酶链反应

下咽鳞状细胞癌中FHIT基因异常表达的研究

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2009年第6期23卷 245-248,253页

作者：吴昊栾信庸潘新良黄剑飞王强雷大鹏南通大学附属医院耳鼻咽喉-头颈外科江苏南通226001 山东大学齐鲁医院耳鼻咽喉-头颈外科南通大学附属医院病理科江苏南通226001

目的:分析下咽鳞状细胞癌中脆性组氨酸三联体FHIT基因转录本的表达,探讨FHIT基因与下咽鳞状细胞癌生物学行为的相关性。方法:应用nestedRT-PCR及DNA测序技术检测24例下咽鳞状细胞癌组织及对应的正常组织标本中FHIT基因的表达情况。结果... 详细信息

目的:分析下咽鳞状细胞癌中脆性组氨酸三联体FHIT基因转录本的表达,探讨FHIT基因与下咽鳞状细胞癌生物学行为的相关性。方法:应用nestedRT-PCR及DNA测序技术检测24例下咽鳞状细胞癌组织及对应的正常组织标本中FHIT基因的表达情况。结果:24例正常配对下咽组织中23例有FHIT基因完整表达,1例未见任何转录本,9例(37.5%)下咽癌标本中检测出FHIT基因mRNA转录本的异常表达。高分化鳞状细胞癌FHIT基因转录本异常率为28.6%(2/7),中分化鳞状细胞癌为50.0%(4/8),低分化鳞状细胞癌为33.3%(3/9),各个病理分级之间的差异无统计学意义(rs=-0.0198,P>0.05);无淋巴结转移下咽癌FHIT基因转录本异常率为33.3%(4/12),伴淋巴结转移癌组41.7%(5/12),差异无统计学意义(P<0.01)。2例原发性下咽癌经测序发现,分别缺失exon8,exon7～9,所有缺失的起始处均为外显子之间的连接部位。结论:位于3P14.2的FHIT基因在下咽鳞状细胞癌中存在较高的缺失率,提示FHIT基因为下咽鳞状细胞癌的候选抑制基因,在下咽癌的发生、演化和进展中起着重要作用。

关键词：下咽肿瘤癌鳞状细胞脆性组氨酸三联体基因抑癌基因巢式逆转录聚合酶链反应

应用激光显微切割技术检测单个结肠细胞的基因表达

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中国应用生理学杂志 2003年第3期19卷 310-312页

作者：石欣高乃荣胡浩霖霍明东汤文浩东南大学附属中大医院普外科江苏南京210009

目的 :探讨检测单个结肠细胞的基因表达的方法。方法 :应用激光显微切割技术 (lasermicrodissection)从冰冻切片上将单个结肠细胞切下 ,提取总RNA ,将RNA逆转录成cDNA ,采用巢式逆转录聚合酶链反应 (nestedRT PCR)检测mRNA的表达。结果 ... 详细信息

目的 :探讨检测单个结肠细胞的基因表达的方法。方法 :应用激光显微切割技术 (lasermicrodissection)从冰冻切片上将单个结肠细胞切下 ,提取总RNA ,将RNA逆转录成cDNA ,采用巢式逆转录聚合酶链反应 (nestedRT PCR)检测mRNA的表达。结果 :在显微镜下用紫外激光显微切割机 ,将单个结肠细胞成功切下 ,提取RNA后 ,逆转录成cDNA ,经过巢式RT PCR扩增后 ,扩增产物在琼脂糖凝胶上清晰可见。结论 :联合应用激光显微切割和巢式RT

关键词：激光显微切割检测结肠细胞基因表达巢式逆转录聚合酶链反应