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应用巢式多聚合酶链反应检测母婴血清及母乳中乙型肝炎病毒DNA的意义

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新疆医科大学学报 1997年第4期20卷 20-22页

作者：王素秋郑美玉新疆医学院第一附属医院产科

采用巢式多聚合酶链反应（Ｎ－ＰＣＲ）结合酶联免疫检测ＡＳＣ妇女３０例母婴血清和初乳的酶联标志物和ＨＢＶ－ＤＮＡ，同时取１１例健康产妇对照。结果：３０例母血清有１９例ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋），占６３．３％；初乳１６例感染，... 详细信息

采用巢式多聚合酶链反应（Ｎ－ＰＣＲ）结合酶联免疫检测ＡＳＣ妇女３０例母婴血清和初乳的酶联标志物和ＨＢＶ－ＤＮＡ，同时取１１例健康产妇对照。结果：３０例母血清有１９例ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋），占６３．３％；初乳１６例感染，占５３．３％，呈ＤＮＡ（＋）７例，占２３．３％；婴儿３１例（有１例双胎）中有２０例感染，占６４．５％，呈ＤＮＡ（＋）者４例。初乳ＤＮＡ（＋）中５例和婴儿ＤＮＡ（＋）４例均在母血小三阳、ＤＮＡ（＋）组。说明ＡＳＣ妇女可以母婴宫内传播和病毒进入乳汁，Ｎ－ＰＣＲ和酶联免疫检测结合可提高诊断率，并提示新生儿期必须联合预防接种，仍可哺乳。

关键词：巢式聚合酶链反应初乳乙型肝炎病毒血清

巢式-实时PCR检测梅毒初诊患者不同样本中梅毒螺旋体靶DNA

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中华皮肤科杂志 2017年第5期50卷 346-350页

作者：叶兴东高方铭曹文苓林宏达任泽舫广州市皮肤病防治所 510095 中山大学公共卫生学院

目的探讨巢式-实时PCR（NR？PCR）检测初诊梅毒患者不同样本中梅毒螺旋体（Tp）靶DNA的可行性及应用前景。方法以Tp polA为靶基因，用NR？PCR检测梅毒患者初诊时皮损拭子、血清、全血、脑脊液、末梢耳垂血等样本中的靶DNA，用统计软件... 详细信息

目的探讨巢式-实时PCR（NR？PCR）检测初诊梅毒患者不同样本中梅毒螺旋体（Tp）靶DNA的可行性及应用前景。方法以Tp polA为靶基因，用NR？PCR检测梅毒患者初诊时皮损拭子、血清、全血、脑脊液、末梢耳垂血等样本中的靶DNA，用统计软件SPSS.13分析结果。结果 NR？PCR检测Tp polA靶DNA的极限为2个Tp/ml，总体阳性率为71.7%，检测不同类样本的阳性率从高到低依次为：耳垂血92.0% 〉脑脊液90.2% 〉拭子74.3% 〉血清66.9% 〉全血64.2%。NR-PCR结果与血清学检查结果的一致性为76.0%（152/200）。进一步分析显示：一期、二期梅毒拭子DNA阳性率（63.2%比 87.5%）差异无统计学意义（χ2 = 2.62，P 〉 0.05）；血清样本中，二期梅毒DNA阳性率高于一期梅毒（χ2 = 3.6，P = 0.06）；全血样本中，二期梅毒DNA阳性率高于其他各类型梅毒；神经梅毒耳垂末梢血阳性率与脑脊液比较，P = 0.06。隐性梅毒血清（RPR）滴度 ≥ 1∶8组的Tp DNA阳性率高于RPR ≤ 1∶4组。结论 NR？PCR方法检测梅毒患者不同样本中Tp DNA是可行的，不同类型梅毒、不同类型样本以及其血清RPR滴度水平都影响Tp DNA阳性率。

关键词：梅毒苍白密螺旋体临床实验室技术实时聚合酶链反应巢式聚合酶链反应

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犬贾第虫巢式PCR检测方法的建立

中国生物制品学杂志 2013年第11期26卷 1668-1671页

作者：李棕松高珺珊翟涛吴威宫鹏涛李建华杨举李赫张国才张西臣吉林大学动物医学学院吉林长春130062

目的建立犬贾第虫巢式PCR检测方法并进行验证。方法根据犬贾第虫Rnase P基因序列设计两对特异性引物,通过优化Mg2+浓度和退火温度建立巢式PCR检测方法,并进行灵敏度和特异性验证。用优化的巢式PCR方法检测60份犬临床粪样。结果建立的巢... 详细信息

目的建立犬贾第虫巢式PCR检测方法并进行验证。方法根据犬贾第虫Rnase P基因序列设计两对特异性引物,通过优化Mg2+浓度和退火温度建立巢式PCR检测方法,并进行灵敏度和特异性验证。用优化的巢式PCR方法检测60份犬临床粪样。结果建立的巢式PCR方法的最佳Mg2+浓度为3.0 mmol/L;最佳退火温度为53℃;对犬贾第虫的最低检测量可达1个虫体DNA/ml;对柔嫩艾美尔球虫、伊氏锥虫、弓形虫、阴道毛滴虫、犬心丝虫等寄生虫基因组DNA的扩增结果均为阴性;60份犬临床粪样贾第虫的检出率为61.7%。结论建立的巢式PCR检测方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于犬贾第虫感染的临床检测。

关键词：犬贾第虫巢式聚合酶链反应

巢式PCR及序列分析用于攀枝花市恙虫病东方体检测

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中国媒介生物学及控制杂志 2016年第1期27卷 38-41页

作者：廖虹瑜蒋德勇母永贵杨小蓉四川省疾病预防控制中心微生物所成都610041 泸州市疾病预防控制中心四川泸州646699 米易县疾病预防控制中心四川米易617200

目的对采集自攀枝花市的疑似恙虫病患者血液样本进行实验室检测,了解攀枝花地区恙虫病东方体感染情况,同时为四川省恙虫病早期诊断提供依据。方法运用巢式PCR对2013年7-10月采集自攀枝花市的48份疑似恙虫病患者全血样本中提取的基因组DN... 详细信息

目的对采集自攀枝花市的疑似恙虫病患者血液样本进行实验室检测,了解攀枝花地区恙虫病东方体感染情况,同时为四川省恙虫病早期诊断提供依据。方法运用巢式PCR对2013年7-10月采集自攀枝花市的48份疑似恙虫病患者全血样本中提取的基因组DNA进行恙虫病东方体sta-58编码基因检测;随机挑取2份阳性样本进行恙虫病东方体sta56基因片段扩增、测序及序列分析。结果 48份样本中,巢式PCR检测阳性的样本18份;2份样本均扩增到恙虫病东方体sta56基因片段,其序列同源性为96%,系统进化分析显示该2株恙虫病东方体均与某些恙虫病东方体台湾株位于同一个分支,同时与Karp株位于同一个分支。结论在四川省范围内首次运用巢式PCR法检测恙虫病东方体,实验室确诊攀枝花市存在恙虫病的感染,攀枝花市部分恙虫病患者由恙虫病东方体Karp型感染,在遗传进化上与某些台湾恙虫病东方体株关系密切。

关键词：恙虫病东方体巢式聚合酶链反应序列分析

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河南省新确证艾滋病感染者毒株亚型分析

中国公共卫生 2013年第8期29卷 1104-1107页

作者：孙国清刘佳王哲崔为国河南省疾病预防控制中心性病艾滋病防治研究所郑州450016

目的了解河南省新确证的艾滋病感染者人类免疫缺陷病毒(HIV)亚型分布情况及其流行特征。方法随机采集351例河南省2010年新确证HIV-1阳性者的全血样本,分离血浆,提取RNA,PCR扩增gag区基因并进行序列测定,对测序得到的序列进行生物信息学... 详细信息

目的了解河南省新确证的艾滋病感染者人类免疫缺陷病毒(HIV)亚型分布情况及其流行特征。方法随机采集351例河南省2010年新确证HIV-1阳性者的全血样本,分离血浆,提取RNA,PCR扩增gag区基因并进行序列测定,对测序得到的序列进行生物信息学分析,确定基因亚型。结果最终得到210条gag区基因序列,包含B、CRF01-AE、CRF07-BC、CRF08-BC、CRF01A1、CRF01B和CRF31-BC 7种亚型,其中B亚型185例(88.09%),CRF01-AE亚型12例(5.71%),CRF07-BC亚型8例(3.81%),CRF08-BC亚型2例(0.95%),CRF01A1、CRF01B和CRF31-BC各1例(0.48%)。结论河南省新确证的艾滋病感染者艾滋病毒有7种亚型,B亚型仍然占主导地位。

关键词：艾滋病巢式聚合酶链反应序列测定亚型

北京市2006年HIV-1流行毒株的gag和env基因序列测定及亚型分析

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中华流行病学杂志 2007年第6期28卷 586-588页

作者：叶景荣邢辉刘海林黑发欣赵月娟刘胜牙孙伟东张启云张琴卢红艳贺雄邵一鸣北京市疾病预防控制中心 100013 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心

目的监测2006年北京市北京户籍HIV感染者中HIV-1型流行病毒株的亚型分布特点和变化规律。方法采集北京市2006年新确认北京户籍HIV-1感染者的抗凝全血样品32份，分离血浆，提取病毒RNA，用巢式聚合酶链反应方法扩增病毒gag和env基因，并... 详细信息

目的监测2006年北京市北京户籍HIV感染者中HIV-1型流行病毒株的亚型分布特点和变化规律。方法采集北京市2006年新确认北京户籍HIV-1感染者的抗凝全血样品32份，分离血浆，提取病毒RNA，用巢式聚合酶链反应方法扩增病毒gag和env基因，并进行序列测定和亚型分析。结果系统进化分析表明北京户籍HIV-1感染者样品分别属于5个亚型，分别为B亚型9份，泰国B亚型2份、C亚型2份，流行重组型CRF07BC亚型5份，流行重组型CRF01_AE亚型4份。结论北京市居民中已存在多种HIV-1亚型和流行重组型，应加强对HIV-1毒株亚型变异的监测，及时调整防治策略。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型亚型巢式聚合酶链反应

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3种实验室检测方法在疟疾诊断中的应用比较

中国媒介生物学及控制杂志 2015年第2期26卷 206-207,210页

作者：雷露刘学升毛玲玲王博滕聪姚文清辽宁省疾病预防控制中心感染与传染性疾病防制所沈阳110005

目的探讨3种实验室检测方法在疟疾诊断方面的应用价值。方法分别采用传统镜检法、Opti MAL法及巢式PCR法,对辽宁省2011-2013年的102份疟疾疑似病例血样进行检测。结果镜检法、Opti MAL法和PCR法阳性率分别为54.90%、63.73%和70.59%,三... 详细信息

目的探讨3种实验室检测方法在疟疾诊断方面的应用价值。方法分别采用传统镜检法、Opti MAL法及巢式PCR法,对辽宁省2011-2013年的102份疟疾疑似病例血样进行检测。结果镜检法、Opti MAL法和PCR法阳性率分别为54.90%、63.73%和70.59%,三者两两比较,只有镜检法和PCR法差异有统计学意义(χ2=4.718,P=0.030)。3种方法中,PCR法的敏感性和特异性最好。结论镜检法结合Opti MAL法和PCR法会提高疟疾病例的诊断水平。

关键词：疟疾 Opti MAL法巢式聚合酶链反应镜检法

MLPA联合二代测序、longPCR产物巢式PCR诊断脊髓性肌萎缩一例

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现代医学 2021年第5期49卷 573-576页

作者：夏静宜郭虎南京医科大学附属儿童医院神经内科江苏南京210008

在常染色体隐性遗传疾病中,脊髓性肌萎缩(spinal muscular atrophy,SMA)是婴儿和儿童早期死亡的最常见遗传原因[1-2]。其致病基因为运动神经元生存基因1 (survival motor neuron 1,SMN1),临床以SMN1基因外显子纯合缺失为主,SMN1基因外... 详细信息

在常染色体隐性遗传疾病中,脊髓性肌萎缩(spinal muscular atrophy,SMA)是婴儿和儿童早期死亡的最常见遗传原因[1-2]。其致病基因为运动神经元生存基因1 (survival motor neuron 1,SMN1),临床以SMN1基因外显子纯合缺失为主,SMN1基因外显子杂合缺失复合SMN1基因点突变少见[3]。由于SMN1基因存在高度同源基因SMN2基因,发现点突变时需要鉴定点突变来源。现报道1例SMN1基因复合杂合变异SMA患儿的临床资料,以期提高临床医生对高度同源基因的认识。

关键词：脊髓性肌萎缩运动神经元生存基因多重连接探针扩增技术二代测序巢式聚合酶链反应

建立快速检测循环癌细胞高表达基因KRT19的巢式PCR新方法

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重庆医学 2013年第23期42卷 2773-2775页

作者：左欣鹭潘理会刘镭承德市职业护理学院河北承德067000 承德医学院免疫学教研室河北承德067000

目的建立一种快速简便的巢式聚合酶链式反应(PCR)法,以检测乳腺癌外周血循环癌细胞高表达基因角蛋白19(KRT19)。方法通过设计退火温度分别为72℃和60℃的内、外侧2对引物,在一个PCR反应体系中,同时加入0.2μmol/L外侧引物和20μmol/L内... 详细信息

目的建立一种快速简便的巢式聚合酶链式反应(PCR)法,以检测乳腺癌外周血循环癌细胞高表达基因角蛋白19(KRT19)。方法通过设计退火温度分别为72℃和60℃的内、外侧2对引物,在一个PCR反应体系中,同时加入0.2μmol/L外侧引物和20μmol/L内侧引物,使2轮PCR扩增反应一步完成。分别用建立的巢式PCR法与传统巢式PCR法检测30例乳腺癌患者和10例健康人外周血KRT19基因表达,比较其特异性;将肿瘤细胞系列稀释后分析两法的敏感性。结果建立的巢式PCR新方法与传统巢式PCR法在40份标本中均检出16份阳性,并都能检测到106稀释度中的肿瘤细胞,两法特异性和敏感性相同。建立的巢式PCR法所需的时间缩短了27min,且步骤简便。结论建立的巢式PCR法敏感、特异,且快速、简便,适用于临床快速检测。

关键词：乳腺癌循环癌细胞巢式聚合酶链反应基因角蛋白19