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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2015年第5期41卷 497-504页

作者：谯天敏张静麻文建朱天辉郑磊四川农业大学林学院四川雅安625014

桉树焦枯病是威胁桉树生长的首要病害,建立准确、有效的桉树焦枯病巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)快速检测技术是桉树焦枯病前期诊断的必要手段。本研究针对柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium)菌株的β-微管蛋白(... 详细信息

桉树焦枯病是威胁桉树生长的首要病害,建立准确、有效的桉树焦枯病巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)快速检测技术是桉树焦枯病前期诊断的必要手段。本研究针对柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium)菌株的β-微管蛋白(beta-tubulin)基因上保守序列极强的靶基因区域序列进行特异性引物BT-S-1/BTA-1的设计和通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A的合成,分别利用常规PCR和巢式PCR技术对引物特异性和灵敏度进行检测和比较,同时本研究也对所建立的巢式PCR用于桉树焦枯病原菌快速检测的田间时效性进行验证。试验结果表明:利用beta-tubulin基因序列通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A对全部供试菌株进行扩增,所有参试菌株均可扩增出1条约500bp的条带;而单独使用特异性引物BT-S-1/BT-A-1进行常规PCR扩增时仅病原菌能够扩增出1条148bp的明亮条带;当利用通用引物作为第1轮引物,以稀释10倍后的第1轮PCR产物作为第2轮PCR模板,利用特异性引物进行巢式PCR扩增时,也可扩增出上述148bp大小的明亮条带,且巢式PCR的扩增效果较常规PCR具有明显的视觉优越性;灵敏度检测试验表明,巢式PCR的灵敏度可检测到5fg/μL,较常规PCR可以扩增出的极限(DNA质量浓度为5pg/μL)至少提高了103倍;田间时效检测试验也说明巢式PCR较常规PCR具有更高的准确度和灵敏性,可达到田间检测的要求。本研究建立的巢式PCR检测技术可有效应用于桉树焦枯病的早期诊断。

关键词：巢式聚合酶链反应桉树焦枯病快速检测丽赤壳属柱枝双孢霉

巢式聚合酶链反应检测不同人群隐匿性乙型肝炎病毒感染

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四川省卫生管理干部学院学报 2009年第1期28卷 6-7,18页

作者：杨朝国张玲英许建成都中医药大学医学技术学院四川成都610041 四川省人民医院四川成都610072 成都市第九人民医院四川成都610041

目的:探讨不同人群隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)感染情况。方法:采用巢式聚合酶链反应(PCR)检测268例健康献血员、386例健康体检自然人群、73例不明原因肝炎患者、26例丙型肝炎患者、38例肝硬化患者和36例肝癌患者血清HBV DNA。结果:隐匿性... 详细信息

目的:探讨不同人群隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)感染情况。方法:采用巢式聚合酶链反应(PCR)检测268例健康献血员、386例健康体检自然人群、73例不明原因肝炎患者、26例丙型肝炎患者、38例肝硬化患者和36例肝癌患者血清HBV DNA。结果:隐匿性乙型肝炎病毒感染率分别为0.37%、4.92%、35.62%、19.23%、10.53%和16.67%。隐匿性HBV感染者中,抗HBc或抗HBc和抗HBe阳性者占51.29%。结论:隐匿性HBV感染在不同人群中广泛存在,其与抗HBc存在高度相关。

关键词：隐匿性乙型肝炎病毒感染巢式聚合酶链反应乙型肝炎病毒核酸

巢式聚合酶链反应对白血病融合基因的检测分析

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吉林医学 2012年第9期33卷 1920-1921页

作者：李运斌李欣山东省枣庄市立医院血液内科山东枣庄277101 山东省枣庄市峄城区人民医院内一科山东枣庄277300

目的:探讨并分析巢式聚合酶链反应在白血病融合基因中的检测与应用。方法:回顾性分析71例白血病患者的临床资料,运用巢式聚合酶链反应,检测患者包括bcr/abl、PML/RARa、AML/ETO所有融合基因融和变异的引物阳性率。结果:38例慢性粒细胞... 详细信息

目的:探讨并分析巢式聚合酶链反应在白血病融合基因中的检测与应用。方法:回顾性分析71例白血病患者的临床资料,运用巢式聚合酶链反应,检测患者包括bcr/abl、PML/RARa、AML/ETO所有融合基因融和变异的引物阳性率。结果:38例慢性粒细胞白血病患者,bcr/abl融合基因的总阳性率为83.4%。12例急性早幼粒细胞白血病患者,PML/RARa融合基因的总阳性率为57.1%。6例急性粒细胞白血病M2患者,AML/ETO总阳性率为27.9%。结论:巢式聚合酶链反应具有较高准确性、灵敏性、简便性,为临床治疗提供较高的参考价值。

关键词：巢式聚合酶链反应白血病融合基因检测分析

巢式聚合酶链反应检测人类DNA修复基因:ERCC2/XPD exon 6突变

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癌变．畸变．突变 2005年第1期17卷 33-35页

作者：郭丽马业罡孙中芙祁荣尹娇杨沈阳医学院中心实验室辽宁沈阳110034 辽宁省肿瘤医院胸外科辽宁沈阳110042

背景与目的:探讨血样DNA来源困难及DNA产量低的情况下,获得理想的可供突变分析的PCR产物的方法。材料与方法:应用巢式聚合酶链反应(NPCR)-限制性片断长度多态(RFLP)技术检测了人类微量DNA样品的DNA修复基因:ERCC2／XPD exon 6的单核甘... 详细信息

背景与目的:探讨血样DNA来源困难及DNA产量低的情况下,获得理想的可供突变分析的PCR产物的方法。材料与方法:应用巢式聚合酶链反应(NPCR)-限制性片断长度多态(RFLP)技术检测了人类微量DNA样品的DNA修复基因:ERCC2／XPD exon 6的单核甘酸多态(SNP)。结果:该位点群体基因分型结果显示:自身平衡检验结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡法则。结论:巢式PCR技术在扩增微量DNA、分析突变的实验中较一般单次扩增PCR技术更具有敏感性高,特异性强的优点。

关键词：巢式聚合酶链反应微量DNA样品 DNA修复基因 ERCC2/XPD exon 6

实时定量聚合酶链反应与巢式聚合酶链反应在289例白血病融合基因检测中的比较

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中国医科大学学报 2012年第8期41卷 738-741页

作者：王玥李艳金晶纯王亚柱魏鑫中国医科大学附属第一医院血液内科沈阳110001

目的比较实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)与巢式聚合酶链反应(nPCR)在白血病融合基因BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO检测中的结果。方法分别应用RT-PCR与nPCR对289例急慢性白血病初诊和完全缓解的患者BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO融合基因... 详细信息

目的比较实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)与巢式聚合酶链反应(nPCR)在白血病融合基因BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO检测中的结果。方法分别应用RT-PCR与nPCR对289例急慢性白血病初诊和完全缓解的患者BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO融合基因进行检测,结合患者骨髓细胞形态学及临床转归予以分析。结果 46例初诊慢性粒细胞白血病(CML)患者中,RT-PCR与nPCR检测BCR/ABL融合基因阳性率分别为95.7%和93.5%(P=0.997);69例完全缓解CML患者中,RT-PCR与nPCR检测阳性率分别为78.4%和58.1%(P<0.05)。32例初诊急性早幼粒细胞白血病(APL)患者中,RT-PCR与nPCR检测PML/RARa融合基因阳性率分别为93.8%和90.6%(P=0.996);114例完全缓解APL患者中,RT-PCR与nPCR检测阳性率分别为12.3%和7.0%(P<0.05)。12例初诊急性粒细胞白血病M2(ANLL-M2)患者中,RT-PCR与nPCR检测AML1/ETO融合基因阳性率分别为50.0%和50.0%(P=1.0);16例完全缓解ANLL-M2患者中,RT-PCR与nPCR检测阳性率分别为50.0%和12.5%(P<0.05)。结论 RT-PCR较nPCR更为敏感而准确,应用RT-PCR可以提高微小残留病的检出率,为临床诊断和治疗提供更为有效的分子生物学依据。

关键词：白血病融合基因实时定量聚合酶链反应巢式聚合酶链反应

巢式聚合酶链反应检测A组轮状病毒基因型的研究

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检验医学 2007年第4期22卷 377-379页

作者：林勇李敏马慧丽蒋晓飞复旦大学医学院附属华山医院检验医学中心上海200040

目的用巢式聚合酶链反应(PCR)对A组轮状病毒常见G、P基因型进行检测。方法根据A组轮状病毒不同型别共有的VP4、VP7基因设计的引物分别用于G、P分型的第1次PCR扩增,然后用可以区分不同G型和P型的A组轮状病毒的引物进行第2次PCR扩增。对... 详细信息

目的用巢式聚合酶链反应(PCR)对A组轮状病毒常见G、P基因型进行检测。方法根据A组轮状病毒不同型别共有的VP4、VP7基因设计的引物分别用于G、P分型的第1次PCR扩增,然后用可以区分不同G型和P型的A组轮状病毒的引物进行第2次PCR扩增。对不同型别A组轮状病毒标准毒株和68例A组轮状病毒腹泻的粪便标本进行了G、P型别的检测。结果不同型别A组轮状病毒标准毒株分别扩增出不同长度片段的条带。68例被检测的A组轮状病毒腹泻粪便标本中G分型以G3为主,P分型以P8为主,其余型别少见。结论巢式PCR检测A组轮状病毒基因型的分型具有较高的灵敏度,操作简便快速,适用于临床检测。

关键词：轮状病毒巢式聚合酶链反应基因型

巢式聚合酶链反应检测SEN病毒方法的建立及初步应用

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中国卫生检验杂志 2007年第10期17卷 1827-1829页

作者：庞栋黄晓群李忠龙邕泉黄金环李恒聪张翙南宁中心血站南宁530003 广西中医学院瑞康医院南宁530001

目的:研究建立巢式聚合酶链反应(nPCR)检测SEN病毒D和H亚型的方法,并将其应用到流行病调查。方法:选择SENV开放读码框1(ORFⅠ)核苷酸序列设计合成特异性引物,建立检测SEN病毒D和H型感染的巢式PCR方法,对216例无偿献血者、65例甲肝患者、... 详细信息

目的:研究建立巢式聚合酶链反应(nPCR)检测SEN病毒D和H亚型的方法,并将其应用到流行病调查。方法:选择SENV开放读码框1(ORFⅠ)核苷酸序列设计合成特异性引物,建立检测SEN病毒D和H型感染的巢式PCR方法,对216例无偿献血者、65例甲肝患者、152例乙肝患者、79例丙肝患者和83例非甲～非戊肝患者进行了SENV感染的检测。结果:该方法特异性和灵敏度均较高,检测结果显示健康献血者、甲肝、乙肝、丙肝和非甲～非戊型肝炎患者SENVD和/或H总感染率分别为29.1%、38.5%、55.3%、54.4%、38.5%。SENV D和/或H在健康献血者中总感染率显著低于乙肝和丙肝患者(P0.05)。结论:巢式PCR方法可用于检测SENV感染。我国部分地区无偿献血和肝炎等患者中存在SENV感染,其致病性有待进一步研究。

关键词：巢式聚合酶链反应 SEN病毒

多重巢式聚合酶链反应在疟疾混合感染检测与分型中的应用

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东南大学学报（医学版） 2015年第2期34卷 182-186页

作者：张勤侯瑞生薛云红徐超苗丽李丽王晓梦河南出入境检验检疫局河南郑州450003

目的:应用能够同时检测恶性疟(P.falciparum)、间日疟(P.vivax)、卵形疟(P.ovale)、三日疟(P.malarie)及其混合感染的多重巢式PCR方法,对疑似疟疾混合感染样本进行检测,评价其在疟原虫混合感染及分型中的应用价值,旨在为疟疾流行病学调... 详细信息

目的:应用能够同时检测恶性疟(P.falciparum)、间日疟(P.vivax)、卵形疟(P.ovale)、三日疟(P.malarie)及其混合感染的多重巢式PCR方法,对疑似疟疾混合感染样本进行检测,评价其在疟原虫混合感染及分型中的应用价值,旨在为疟疾流行病学调查、疟疾混合感染的确诊提供一种快速高效、特异性强、灵敏度高的实验室诊断方法,为传统的镜检法提供有效的补充。方法:根据恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫的18SSU rRNA基因序列设计5对引物(1对通用引物、4对特异性引物),以等比例混合的4种疟原虫核酸为模板,建立疟疾多重巢式PCR检测方法,并应用该法对28份疑似疟疾混合感染样本进行检测及测序验证,将其结果与镜检法比较。结果:28份疑似混合感染样本中混合感染样品数为6例,其中恶性疟和间日疟混合感染样品5例,恶性疟和卵形疟混合感染样品1例。结论:本研究建立的多重巢式PCR检测方法能够同时用于恶性疟、间日疟、卵形疟、三日疟及其混合感染样本的检测,在疟疾混合感染的确诊与分型上较镜检法有明显的优势和更高的应用价值。

关键词：疟原虫巢式聚合酶链反应混合感染分型

巢式聚合酶链反应快速检测贝氏柯克斯体的研究

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中华检验医学杂志 2000年第2期23卷 74-76页

作者：崔红张雪颖宫占威程聪陈香蕊军事医学科学院微生物流行病学研究所北京100071 兰州军区后勤部军事医学研究所

目的　建立特异敏感的快速检测贝氏柯克斯体的分子生物学方法。方法　采用巢式聚合酶链反应 (PCR)方法 ,进行实验室模拟检测。结果　以贝氏柯克斯体com1基因 (编码 2 70 0 0蛋白 )为靶标设计了 2对引物 ;该引物特异性实验表明仅贝氏柯... 详细信息

目的　建立特异敏感的快速检测贝氏柯克斯体的分子生物学方法。方法　采用巢式聚合酶链反应 (PCR)方法 ,进行实验室模拟检测。结果　以贝氏柯克斯体com1基因 (编码 2 70 0 0蛋白 )为靶标设计了 2对引物 ;该引物特异性实验表明仅贝氏柯克斯体特异性片段可以扩增出来 ,其余相关立克次体均扩不出 ;敏感性测试结果可检测出 1.5fg的贝氏柯克斯体DNA ,可检测出 0 .0 0 1个鸡胚半数致死量 (CELD50 )的立克次体 ;以 10 0 0 0个CELD50 立克次体感染小鼠时 ,可于 2 4h在脾脏中检测出贝氏柯克斯体 ,检出率为 83.3% ;对人工模拟的灭菌牛奶、小鼠脏器研磨液、蜱组织研磨液、小鼠血液标本检测发现该法在牛奶和血液标本中的检测敏感性下降 3～ 4个滴度。结论　巢式PCR是快速检验贝氏柯克斯体的敏感特异的方法 ,经过进一步推广应用 ,有望应用于临床检验。

关键词：巢式聚合酶链反应贝氏柯克斯体检测