检索结果-南通市图书馆

CR1SPR-Cas9技术构建LCA-Nmnat1小鼠动物模型及其发病机理研究和PHEX基因新发嵌合突变导致低磷酸盐血症性佝偻病

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

CR1SPR-Cas9技术构建LCA-Nmnat1小鼠动物模型及其发病机理研究和P...

作者：陈姣浙江大学

学位级别：硕士

第一部分CRISPR-Cas9技术构建LCA-Nmnatl小鼠动物模型及其发病机理研究背景：遗传性疾病是出生缺陷的重要原因,单纯性眼科遗传病近300种,其中先天性黑蒙症(Leber's congenital amaurosis, LCA)是发生最早、最严重的遗传性视网膜病变。... 详细信息

第一部分CRISPR-Cas9技术构建LCA-Nmnatl小鼠动物模型及其发病机理研究背景：遗传性疾病是出生缺陷的重要原因,单纯性眼科遗传病近300种,其中先天性黑蒙症(Leber's congenital amaurosis, LCA)是发生最早、最严重的遗传性视网膜病变。目前已发现18种与LCA相关的致病基因,我们课题组运用外显子组捕获和新一代高通量测序的方法,发现NMNAT1基因突变可以导致第9型先天性黑蒙症。但是具体的突变致病机制未知。方法：从生物信息学分析、细胞学分析以及CRISPR-Cas9构建定点突变小鼠动物模型三方面探究突变可能的致病机理。生物信息学分析包括人和小鼠NMNAT1蛋白同源性分析,确保以小鼠作为动物模型的可信性;蛋白晶体结构分析,找到最可能影响蛋白结构的位点作为突变研究对象;蛋白质相互作用分析,探索与NMNAT1相互作用的蛋白。细胞学分析方面构建8种突变和一种野生型重组质粒,进行荧光共聚焦和荧光定量实验,探究突变对亚细胞定位和对RNA水平的影响,后续将进一步进行蛋白质水平的Western Blot实验。CRISPR-Cas9构建小鼠动物模型方面,已获得用于显微注射的gRNA、Cas9 mRNA和模板DNA,已购买和饲养供体鼠(C57)和受体鼠(ICR),获得动物模型后将从表型、生化分析、细胞分子水平等方面全面探索致病机制,并且探寻可行的治疗方法。结果：人和小鼠NMNAT1蛋白质高度同源。蛋白晶体结构分析缬氨酸151(V151)位于蛋白的疏水核心,缬氨酸98(V98)接近配体结合位点,Trp85* (M255)以及Trp169* (M507)无义突变蛋白明显截短,结构分散。蛋白质相互作用预测其与多种蛋白存在可能的相互作用。荧光共聚焦实验结果显示Trp85*亚细胞定位有明显逸散出细胞核的现象,其他突变亚细胞定位无异常。荧光定量实验显示Trp85*(M255)、Trp169* (M507)无义突变体以及Met35Thr (M104)、Leu153Val(M457)错义突变体RNA水平和野生型差别不大,而Val151Phe(M451)错义突变体RNA水平显著下降。CRISPR-Cas9构建小鼠动物模型方面,已经准备好注射用的RNA和模板DNA。结论：本研究拟从生物信息学、细胞生物学、分子生物学、生物化学、组织和器官等多角度阐明NMNAT1突变和先天性黑蒙症的关系。目前进展顺利,已完成前期工作,包括生物信息学分析,细胞生物学的部分分析和CRISPR-Cas9构建小鼠动物模型前面部分,后续将进一步探究突变的致病机制,以及利用药物治疗和基因治疗手段研究治疗先天性黑蒙症的可行性,为临床研究和治疗奠定理论基础。第二部分PHEX基因新发嵌合突变导致低磷酸盐血症性佝偻病X连锁显性低磷酸盐血症性佝偻病(MIM#307800),是一种遗传性骨病。主要表现为肾小管对磷酸盐的重吸收异常、发育迟缓、身材矮小、骨骼疼痛、牙釉质异常、双下肢畸形、行走无力,X射线提示佝偻病症状。该病是由位于X染色体p22.1-22.2上PHEX基因突变造成。在本研究中,我们诊断出一个患病男孩,其PHEX基因看似杂合,我们拟探寻具体的致病机制。虽然患者是一名男孩,Sanger测序显示其X染色体上的PHEX基因有表象上杂合突变,存在双峰,一个是正常的碱基“G”,另一个是“A”。TA克隆测序表明确实存在这两种碱基,并且获得了大致的比率。之后我们用生物信息学工具预测以及外显子捕获技术实验验证该剪切位点突变对RNA剪切的影响。荧光定量PCR实验用以检测PHEx的基因拷贝数。TA克隆测序实验显示正常碱基G和突变碱基A的频率比为19：13。染色体核型分析结果显示病人核型正常,荧光定量PCR检测基因拷贝数的结果验证了核型分析的结果。这个剪切突变将会引起外显子18中4个碱基丢失,造成移码突变,蛋白截短,PHEX蛋白的激活位点和Zn2+结合位点丧失,因此造成肾小管重吸收障碍和骨骼矿化异常。总之,发生在保守剪切位点的突变将会造成异常的剪切,形成功能受损的蛋白。我们发现的新发突变是一个嵌合突变,可能发生于前期受精卵阶段。本研究对于之后进行X连锁显性低磷酸盐血症性佝偻病的遗传咨询时考虑嵌合突变起到重要的提示作用。

关键词：先天性黑蒙症 MMNAT1基因 CRISPR-Cas9技术小鼠动物模型 X连锁显性低磷酸盐血症性佝偻病 PHEX基因嵌合突变

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

嵌合突变在遗传性皮肤病中的研究进展

皮肤科学通报 2022年第2期39卷 85-89,M0001,M0002页

作者：丘贵英姚典沂刘吉鹏任韵清浙江大学医学院附属儿童医院皮肤科浙江杭州310057

嵌合突变是指同一个体具有不同基因型的情况,包括体细胞嵌合、生殖细胞嵌合以及体细胞生殖细胞嵌合三种模式。近年来,单基因遗传性皮肤病中嵌合突变现象逐渐增多,其临床表现多样且隐匿,与胚系突变有很大不同,临床上较难识别,容易造成误... 详细信息

嵌合突变是指同一个体具有不同基因型的情况,包括体细胞嵌合、生殖细胞嵌合以及体细胞生殖细胞嵌合三种模式。近年来,单基因遗传性皮肤病中嵌合突变现象逐渐增多,其临床表现多样且隐匿,与胚系突变有很大不同,临床上较难识别,容易造成误诊和漏诊。本文概述了单基因遗传性皮肤病中的嵌合突变现象及诊断、检测方法,以期更好地进行遗传咨询、产前诊断和遗传诊断。

关键词：嵌合突变单基因遗传性皮肤病研究进展遗传咨询

COL6A1基因嵌合突变的Bethlem肌病一例并文献复习

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

新医学 2021年第12期52卷 941-946页

作者：吴若豪邱坤银唐文婷何展文中山大学孙逸仙纪念医院儿科广州510120 中山大学肿瘤防治中心分子诊断科广州510060

目的报道1例由COL6A1基因嵌合突变所致的Bethlem肌病,并分析该突变的致病性。方法应用全外显子基因组测序法(trio-WES)对1例Bethlem肌病患儿及其父母进行基因测序,对检出突变进行生物信息学预测,并以"Bethlem肌病""COL6A1"(包括中英文)... 详细信息

目的报道1例由COL6A1基因嵌合突变所致的Bethlem肌病,并分析该突变的致病性。方法应用全外显子基因组测序法(trio-WES)对1例Bethlem肌病患儿及其父母进行基因测序,对检出突变进行生物信息学预测,并以"Bethlem肌病""COL6A1"(包括中英文)为检索词在PubMed、CNKI、中华医学期刊全文数据库(MedBook)检索相关病例,在千人基因组数据库、ExAC数据库及ClinVar数据库检索患儿的基因突变。结果经trio-WES检测发现,患儿COL6A1基因第8外显子存在1个c.868G>A(p.G290R)错义突变(突变频率为48.13%),该突变同时在其父亲外周血中检出,但突变频率仅7.89%,考虑为嵌合突变(突变频率突变(PS2);该突变导致的蛋白水平改变发生在甘氨酸位置,属于COL6A1基因热点区域突变(PM1);同时该突变在正常人群突变频率数据库中均不存在(PM2)。经多种有害突变预测软件预测结果均提示c.868G>A(p.G290R)为有害突变(PP2+PP3),根据美国医学遗传学与基因组学学会指南判定该新发错义突变为致病性突变(PS2+PM1+PM2+PP2+PP3)。在数据库检索到6例COL6A1基因突变所致Bethlem肌病先证者,无存在嵌合突变者。结论COL6A1基因c.868G>A(p.G290R)为该患儿罹患Bethlem肌病的致病原因,该突变未曾被报道,这在一定程度上扩充了COL6A1基因的变异谱。

关键词： COL6A1基因 Bethlem肌病嵌合突变错义突变

AKT1基因嵌合突变致Proteus综合征一例报告并文献复习

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

北京医学 2021年第4期43卷 304-307页

作者：马明圣刘华祯张天楠周煜凌超邱正庆中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院儿科100730 中国医学科学院北京协和医学院医学科学研究中心-临床遗传学实验室100730 中国医学科学院北京协和医学院

目的对1例AKT1基因嵌合突变致Proteus综合征患儿的临床资料及遗传学特点进行分析并复习相关文献。方法对2015年6月北京协和医院儿科收治的1例Proteus综合征患儿的临床资料及基因检测结果进行分析,并以“Proteus syndrome”“Proteus综... 详细信息

目的对1例AKT1基因嵌合突变致Proteus综合征患儿的临床资料及遗传学特点进行分析并复习相关文献。方法对2015年6月北京协和医院儿科收治的1例Proteus综合征患儿的临床资料及基因检测结果进行分析,并以“Proteus syndrome”“Proteus综合征”为检索词,分别检索Pubmed数据库及中文数据库截至2020年7月收录的文献,对行基因检测的Proteus综合征病例进行文献复习,总结该病临床特征和遗传学特点。结果患儿,女,2岁9个月,生后3个月起逐渐出现面部、头颅、肢体进行性不对称生长。查体:面容不对称,左侧额骨突出。左侧肢体较右侧肢体过度生长,脚底可见脑回状组织痣,颈部及下腹部可见表皮痣。患儿病变组织中检出AKT1基因嵌合突变(c.49G>A,变异频率为25%),患儿及其父母外周血DNA均未检出该突变。文献复习9例患者,均在儿童期起病,4例合并肿瘤,7例病变组织中检出AKT1基因嵌合突变。结论Proteus综合征常累及皮肤、骨骼、脂肪和中枢神经系统,主要表现为不对称的过度生长,易合并肿瘤。病变组织中发现AKT1基因嵌合突变有助于本病确诊。

关键词： Proteus综合征 AKT1基因嵌合突变

建立TaqMan实时定量PCR检测SCN1A基因嵌合突变

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国优生与遗传杂志 2017年第8期25卷 7-9,34页

作者：朱喆朱萌华王震陈秉宇郝珂蒋璐茜李凯强吕建新温州医科大学检验医学院和生命科学学院浙江温州325035 浙江省宁波市第二医院输血科浙江宁波315010 杭州医学院附属人民医院浙江省人民医院输血科浙江杭州310014

目的建立TaqMan实时定量PCR检测SCN1A基因嵌合突变的方法,调查婴儿严重肌阵挛癫痫(SMEI)家系的遗传背景。方法抽提1例SMEI患儿及其父母的外周血全基因组DNA,对SCN1A基因外显子PCR扩增后直接测序检测突变位点。然后根据患儿所携带的c.302... 详细信息

目的建立TaqMan实时定量PCR检测SCN1A基因嵌合突变的方法,调查婴儿严重肌阵挛癫痫(SMEI)家系的遗传背景。方法抽提1例SMEI患儿及其父母的外周血全基因组DNA,对SCN1A基因外显子PCR扩增后直接测序检测突变位点。然后根据患儿所携带的c.302G>A突变,合成突变型质粒、野生型质粒、TaqMan-MGB探针和引物。并以突变型及野生型质粒为研究对象,进一步分析方法的特异性及敏感度。最后用TaqMan实时定量PCR探寻其父母是否为SCN1A基因突变嵌合子。结果建立的TaqMan实时定量PCR未发现非特异性扩增,且敏感度高,在107copies/ml的野生序列背景下能检测出1.6%的突变量。直接测序发现患儿存在SCN1A c.302G>A杂合突变,父亲发现少量可疑突变背景,而母亲未发现。运用TaqMan实时定量PCR证实了患儿父亲含有c.302G>A嵌合突变。结论 TaqMan实时定量PCR能有效提高SCN1A基因嵌合突变的检出率,对优生优育和遗传咨询有较大帮助。

关键词： TaqMan实时定量PCR 癫痫婴儿严重肌阵挛性癫痫 Ⅰ型电压门控钠离子通道α亚基嵌合突变

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Ⅰ型电压依赖型钠通道基因突变嵌合体的检测

实用医学杂志 2012年第9期28卷 1444-1446页

作者：石奕武秦兵邓维意高玫梅于美娟廖卫平广州医学院第二附属医院神经科学研究所 510260 广东省人民医院神经内科广东省医学科学院广东省神经科学研究所广州市510080

目的:寻找鉴定Ⅰ型电压依赖型钠通道基因(SCN1A)突变嵌合体的有效方法,降低癫痫伴热性惊厥附加症的再发风险。方法:抽取携带已知突变c.5768A>G/p.Q1923R的患儿及无突变的患儿母亲的外周血全基因组DNA,将患儿的DNA与母亲的DNA以1∶0、1∶... 详细信息

目的:寻找鉴定Ⅰ型电压依赖型钠通道基因(SCN1A)突变嵌合体的有效方法,降低癫痫伴热性惊厥附加症的再发风险。方法:抽取携带已知突变c.5768A>G/p.Q1923R的患儿及无突变的患儿母亲的外周血全基因组DNA,将患儿的DNA与母亲的DNA以1∶0、1∶1、1∶3、1∶7、1∶15、1∶31及0∶1混合,对包含该突变位点的片段进行PCR扩增后,进行变性高效液相色谱(dHPLC)技术分析、常规测序及焦磷酸测序(pyrosequencing)。结果:常规测序仅能检测出1∶0及1∶1混合样本的突变,而dHPLC及焦磷酸测序均能检测出低至1∶15混合样本的突变,且后者能对突变进行定量。结论:利用dHPLC结合焦磷酸测序的方法能有效快速地检测出低至3%左右的突变,可以避免绝大多数SCN1A基因嵌合突变的漏检。

关键词：惊厥,发热性癫痫 Ⅰ型电压依赖型钠通道基因嵌合突变变性高效液相色谱焦磷酸测序

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

C3肾病遗传特征分析及基因突变检测

C3肾病遗传特征分析及基因突变检测

作者：赵玮玮南京大学

学位级别：硕士

C3肾病(C3 glomerulopathy)是一类免疫荧光下特征性地表现为补体C3沉积显著,不伴或仅伴少量免疫球蛋白沉积的膜增生性肾炎(membranoproliferative glomerulonephritis,MPGN)。补体系统活化异常在C3肾病、免疫复合物介导的膜增生性肾炎(i... 详细信息

C3肾病(C3 glomerulopathy)是一类免疫荧光下特征性地表现为补体C3沉积显著,不伴或仅伴少量免疫球蛋白沉积的膜增生性肾炎(membranoproliferative glomerulonephritis,MPGN)。补体系统活化异常在C3肾病、免疫复合物介导的膜增生性肾炎(immune complex mediated membranoproliferative glomerulonephritis,IC-MPGN)、非典型溶血尿毒综合征(atypical hemolytic uremic syndrome,aHUS)等补体相关性罕见肾病的发生发展中起着重要作用。遗传突变导致的补体系统异常活化在C3肾病中的致病机制近年来受到广泛关注和深入研究。然而,已有的研究多集中在高加索人群,并且研究仅是传统的突变,对筛查出来的突变也缺乏严格的致病性评估。另一方面,此类疾病表现为复杂的多因素遗传疾病,尽管有证据表明,经典遗传模式可以参与部分疾病的发生发展,然而更多病例为散发,不排除其他复杂遗传模式参与的可能性。因此,本研究旨在通过回顾性队列分析,结合临床观察、遗传分析及生物信息学预测,探讨亚洲人群C3肾病突变图谱的分布特征,并针对合子后单核苷酸嵌合突变(postzygotic single-nucleotide mosaicisms,pSNMs),检测这种体细胞突变与肾脏特异性受累之间的可能关联。第一部分:C3肾病补体途径基因的突变图谱本部分回顾性地收集了自1985年9月至2014年2月于南京军区南京总医院肾脏病研究所经肾活检明确诊断的43例C3肾病患者,包括33例C3肾炎(C3 glomerulonephritis,C3GN)和 10 例致密物沉积病(dense deposit disease,DDD),以及24例IC-MPGN患者作为对照,运用靶向外显子捕获和大规模平行测序技术,对病人的补体系统旁路途径11个候选基因进行测序。经过严格的筛查,共确定20个罕见突变:16个为文献报道突变,4个为本研究新发现突变。根据指南进行突变致病性分类定义:1个为可能致病突变(likely pathogenic,LP),余 19 个均为功能不确定突变(variants of uncertain significance,VUS)。3个突变被报道经实验证实可导致突变蛋白功能缺陷。补体CFH、CFI、CD46和C3基因的突变频率最高。在DDD、C3GN和IC-MPGN病人中,分别有50%、27%和17%的病人检测出旁路途径遗传异常改变。不论哪一类疾病,有无突变的病人之间在临床表征、疾病进展及预后方面均无统计学差异。本部分研究通过大样本遗传筛查,肯定了 C3肾病等补体相关性肾病复杂的遗传背景,促进了亚洲人群中此类疾病的研究进展。此外,精确的遗传学检测有助于提升对C3肾病致病机制的理解;对筛查出来的突变进行严格的致病性定义对于疾病临床诊断、预后和治疗均具有重要意义。第二部分C3肾病补体途径基因嵌合突变的筛查与鉴定本部分设计了严格的工作流程,对C3肾病等补体相关性罕见肾病病人的嵌合突变进行了筛查及鉴定,探讨了复杂遗传模式下嵌合突变与散发性遗传相关性肾病肾脏受累的关联,以及其可能的致病机制。运用MosaicHunter和PGM嵌合突变扩增测序技术,共检出9个候选嵌合突变。CFH基因上的错义突变c.2808G>T(rs1065489)同时在4例病人身上被检测到,利用焦磷酸测序对该突变进一步验证,结果证实在1例DDD和1例C3GN病人中为嵌合突变,嵌合比例均为5%;在另2例病人中为杂合突变。Sanger测序未能观察到嵌合突变的低峰。嵌合突变在病人肾组织、口腔颊粘膜、尿液中的比例范围为8～35%,显著高于血DNA(P突变可显著增加补体相关的自身免疫性疾病,尤其是DDD及aHUS的患病风险。生物信息学软件预测该突变对蛋白功能有害。同源建模观察到该突变位于配体连接表面,突变导致CFH蛋白和配体C3b的结合自由能下降6.55kcal/mol。本部分内容联合MosaicHunter和PASM技术,以及焦磷酸验证,显著提高了嵌合突变的检测敏感性和特异性,为非肿瘤性疾病嵌合突变的研究提供了可靠的技术路线。此外,C3肾病中肾组织高比例嵌合突变的发现提示其导致肾脏特异性受累的可能性。综上所述,本研究回顾性地收集了亚洲人群最大样本量的以C3肾病为主的补体相关性罕见肾病队列,同时检测了补体系统相关的11个基因,我们发现:1)1个可能致病突变,和19个功能不确定突变;2)补体CFH、CFI、CD46和C3基因的突变频率最高;3)在DDD、C3GN和IC-MPGN病人中,分别有50%、27%和17%的病人检测出旁路途径遗传异常改变

关键词： C3肾病补体系统遗传分析嵌合突变

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

22例单基因遗传性骨病家系的产前诊断分析

中华内分泌代谢杂志 2022年第7期38卷 595-600页

作者：梅亚曌傅文贞岳华汪纯胡伟伟顾洁梅李珊珊张浩章振林上海交通大学附属第六人民医院骨质疏松和骨病专科上海市骨疾病临床研究中心200223

目的总结22个单基因遗传性骨病家系的产前诊断特点, 探讨产前分子诊断技术的应用价值, 切实阻断遗传性疾病的遗传链。方法回顾性分析2014年1月至2021年7月就诊于本院骨质疏松和骨病专科门诊的22个单基因遗传性骨病家系的产前分子诊断结... 详细信息

目的总结22个单基因遗传性骨病家系的产前诊断特点, 探讨产前分子诊断技术的应用价值, 切实阻断遗传性疾病的遗传链。方法回顾性分析2014年1月至2021年7月就诊于本院骨质疏松和骨病专科门诊的22个单基因遗传性骨病家系的产前分子诊断结果。结果在22个家系中, X连锁低磷佝偻病家系10例, 均为PHEX基因突变, 共检测到胎儿突变8例;骨硬化症家系6例, 其中CLCN7基因突变3例, TCIRG1基因突变2例, CTSK基因突变1例, 共检测到患胎2例, 携带者1例;成骨不全症4例, COL1A1基因突变2例, COL1A2和SERPINF1基因突变各1例, 共检测到患胎1例, 携带者1例;骨关节炎伴轻度软骨发育不良1例, 由COL2A1基因突变所致, 胎儿检测到该致病突变;低磷酸酶症1例, 为ALPL基因突变, 胎儿未检测到该致病突变。截止随访时间, 12例患胎均终止妊娠, 剩余10例胎儿除了1例仍在妊娠中, 其余均已出生, 健康状况良好。结论产前分子诊断可以在妊娠早、中期明确胎儿是否携带遗传变异。对于符合孟德尔分离定律的单基因遗传性骨病, 可以通过推算子代再发风险的概率决定是否进行产前诊断。另外, 对于子代出现新发突变的家系, 需要注意亲代是否存在嵌合突变。

关键词：单基因遗传性骨病遗传咨询产前诊断羊膜腔穿刺术嵌合突变

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

大麦诱发基因突变的遗传类型

Journal of Genetics and Genomics 1981年第1期 84-90页

作者：李浚明蔡体树毛炎麟张崇礼北京农业大学北京农业大学农业生物物理专业

本文从植物诱变育种的实际需要出发,以大麦为材料,探讨了种子经诱变处理后诱发基因突变的遗传类型。试验结果表明,由于穗原基细胞在一次诱变处理中所发生的突变数目的不同,由于突变在原基细胞间以及在同一原基细胞染色体上分布的不同,... 详细信息

本文从植物诱变育种的实际需要出发,以大麦为材料,探讨了种子经诱变处理后诱发基因突变的遗传类型。试验结果表明,由于穗原基细胞在一次诱变处理中所发生的突变数目的不同,由于突变在原基细胞间以及在同一原基细胞染色体上分布的不同,以及由于突变方向的不同,发生在原基细胞内的突变可分为单位点突变和多位点突变两大类。两者或可出现在M穗水平上,也可出现M植株水平上。而后者又可分为:1.嵌合突变;2.复突变;3.等点突变三类。其中每一类又可再分为若干类型。总计起来,我们将发生在穗原基细胞内诱发的基因突变共分为12种可能的遗传类型。本文对上述的若干诱发突变的遗传类型给出了实例。我们希望这项研究将不仅有助于对诱发突变遗传现象的深入了解,而且能为合理地筛选和利用突变体提供某些科学的依据。

关键词：突变体原始品种遗传类型突变型大麦麦类作物基细胞穗行嵌合突变单位点突变杂合体诱发突变诱变基因突变点突变