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基于UPLC-CAD的不同产地麦冬及不同基原山麦冬药材鉴别研究

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亚太传统医药 2024年第2期20卷 24-28页

作者：周海琴海丰胡剑虹钱润陈盛君江阴天江药业有限公司江苏江阴214434

目的:建立麦冬药材超高效液相-电雾式检测器(UPLC-CAD)特征图谱测定方法,对不同产地麦冬及山麦冬药材进行鉴别研究。方法:采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP_(18)(Waters,2.1 mm×150 mm,1.7μm)色谱柱;以乙腈-0.08%甲酸为流动相进行梯度... 详细信息

目的:建立麦冬药材超高效液相-电雾式检测器(UPLC-CAD)特征图谱测定方法,对不同产地麦冬及山麦冬药材进行鉴别研究。方法:采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP_(18)(Waters,2.1 mm×150 mm,1.7μm)色谱柱;以乙腈-0.08%甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速为0.30 mL/min,柱温为40℃;建立麦冬特征图谱,并对其特征峰进行分析。结果:建立的特征图谱方法符合方法学要求,16批川麦冬及19批浙麦冬样品的特征图谱中各有10个共有峰作为特征峰,通过质谱指认及对照品确认,川麦冬指认了其中5个,浙麦冬指认了其中2个。通过麦冬皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷可区分麦冬和山麦冬;麦冬皂苷D可区分浙麦冬和川麦冬;麦冬龙脑苷可区分湖北麦冬和短葶山麦冬。结论:建立的特征图谱能有效区分川麦冬、浙麦冬及湖北麦冬、短葶山麦冬,该方法具有快速、准确和操作简单等特点,为麦冬药材的快速鉴别提供理论依据。

关键词：麦冬山麦冬特征图谱鉴别

山麦冬果实花青素生物合成中内参基因的筛选与验证

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浙江农林大学学报 2022年第2期39卷 307-317页

作者：干思宸师悦梁立军浙江农林大学风景园林与建筑学院浙江杭州311300

【目的】为山麦冬Liriope spicata果实花青素生物合成研究筛选最佳内参基因。【方法】基于山麦冬转录数据,通过变异系数以及变化倍数初步筛选出山麦冬15个候选内参基因。以幼果期和成熟期山麦冬果实为材料,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR... 详细信息

【目的】为山麦冬Liriope spicata果实花青素生物合成研究筛选最佳内参基因。【方法】基于山麦冬转录数据,通过变异系数以及变化倍数初步筛选出山麦冬15个候选内参基因。以幼果期和成熟期山麦冬果实为材料,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术测定候选内参基因的表达,采用ΔCt值法、geNorm、NormFinder和BestKeeper等软件包分析候选基因的表达稳定性,最后选取来自6个基因家族(C4H、CHS、MT、UFGT、MYB和bHLH)的10个目的基因(C4H、CHS-1、CHS-2、MT、UFGT-1、UFGT-2、MYB-1、MYB-2、MYB-3、bHLH),对所选内参基因组合进行验证。【结果】4种方法分析得出的候选内参排序存在一定差异,需综合4种方法的几何平均值作为综合排序。根据geNorm软件推荐的最适内参数目为4个,即CNNM、GPR107、EF1-α、G6PD-2最稳定,PDP最不稳定。对10个目的基因表达量标准化验证发现:以CNNM、GPR107为内参组合与选用4个基因作为内参组合无显著差异,相关系数可达0.999 9,且选用双内参组合比4个内参组合的可操作性强,而不适合的内参基因(PDP)会对RT-qPCR结果产生严重偏差。【结论】以CNNM、GPR107作为组合是山麦冬果实花青素生物合成研究的最佳内参基因。

关键词：山麦冬实时定量PCR 花青素合成内参基因

基于代谢组学的麦冬和山麦冬类黄酮化合物的差异性研究

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中国现代应用药学 2023年第9期40卷 1170-1179页

作者：张艺彭昕徐建中孙健赵翠荣王志安浙江中医药大学杭州310053 浙江省中药研究所有限公司杭州310023 宁波市中医院浙江宁波315016 襄阳市农业科学院湖北襄阳441057

目的研究麦冬和山麦冬药材中类黄酮化合物的分布差异及积累规律,探寻麦冬和山麦冬的特征性差异物质。方法采用紫外分光光度法和HPLC对麦冬和山麦冬中总黄酮、麦冬甲基黄烷酮A、麦冬甲基黄烷酮B进行定量分析;运用UPLC-MS/MS对麦冬和山... 详细信息

目的研究麦冬和山麦冬药材中类黄酮化合物的分布差异及积累规律,探寻麦冬和山麦冬的特征性差异物质。方法采用紫外分光光度法和HPLC对麦冬和山麦冬中总黄酮、麦冬甲基黄烷酮A、麦冬甲基黄烷酮B进行定量分析;运用UPLC-MS/MS对麦冬和山麦冬中类黄酮物质进行检测鉴定,利用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析法等多元统计分析方法筛选差异代谢物,并对差异代谢物进行KEGG通路富集分析。结果麦冬中总黄酮、麦冬甲基黄烷酮A,麦冬甲基黄烷酮B的含量显著高于山麦冬。在麦冬和山麦冬中共鉴定出190个类黄酮化合物,其中160个为差异代谢物,主要包括黄酮(31个)、黄酮醇(22个)、异黄酮及其他类黄酮(70个)等。与麦冬比较,山麦冬中有45种物质上调积累,上调物质主要为黄酮和黄酮醇类化合物;有115种物质下调,主要为异黄酮及其他类黄酮化合物。黄酮及黄酮醇类呈现出不同的积累模式,大多数的芹菜素类、山柰酚类在麦冬中上调积累,而橙皮素类、槲皮素类在山麦冬中上调积累。异黄酮及其他类黄酮化合物在麦冬中积累丰富,特别是高异黄酮类在麦冬中全部上调,是麦冬和山麦冬中差异最为明显的一类。通过对160种差异代谢物进行KEGG注释,发现以类黄酮生物合成(ko00941)、异黄酮生物合成(ko00943)、黄酮和黄酮醇生物合成(ko00944) 3条代谢通路富集显著。结论麦冬和山麦冬中含有丰富的类黄酮物质,整体呈现出明显差异的积累模式,高异黄酮类可作为区分两者的特征成分,该结果可为麦冬类中药品质的深入研究和临床利用提供借鉴。

关键词：麦冬山麦冬 UPLC-MS/MS 代谢组学类黄酮 KEGG通路

山麦冬水提物对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的缓解作用及机制

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中国兽医杂志 2023年第5期59卷 133-140页

作者：宋肖李微周茜胡晓悦张文静徐红丹刘琦张国华丁露湖北文理学院基础医学院湖北襄阳441053 无锡卫生高等职业技术学院江苏无锡214028 齐齐哈尔医学院黑龙江齐齐哈尔161006 黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院黑龙江齐齐哈尔161000

为了明确山麦冬缓解急性肺损伤(ALI)的作用及其机制,本试验使用脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤进行造模,造模前用不同浓度的山麦冬水提物进行干预治疗,通过测定肺组织湿干重比(W/D)评价小鼠肺水肿程度,通过苏木精-伊红(H.E.)染色观察肺... 详细信息

为了明确山麦冬缓解急性肺损伤(ALI)的作用及其机制,本试验使用脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤进行造模,造模前用不同浓度的山麦冬水提物进行干预治疗,通过测定肺组织湿干重比(W/D)评价小鼠肺水肿程度,通过苏木精-伊红(H.E.)染色观察肺组织病理损伤,通过测定氧化应激指标评价肺部氧化损伤情况,通过ELISA检测肺组织中炎症因子的含量,通过免疫组织化学染色技术和Western blot检测ALI小鼠肺损伤相关蛋白的含量。结果显示,LPS造模后,小鼠的肺组织出现严重的损伤,肺组织W/D、氧化应激指标和炎症因子水平均极显著升高(P山麦冬治疗组小鼠W/D显著降低(P0.05,P0.05,P山麦冬具有良好的防治急性肺损伤的作用,其主要的作用机制可能与激活NF-κB信号通路以减轻炎症反应和抑制氧化应激有关。本试验结果可为山麦冬的ALI缓解作用研究和产业开发提供理论支撑。

关键词：山麦冬急性肺损伤 IL-1β TNF-α NF-κB

麦冬药材及饮片中掺混山麦冬的PCR-RFLP鉴别方法研究

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药物分析杂志 2023年第4期43卷 712-720页

作者：张林祥倪琳赖晶魏锋宋平顺甘肃中医药大学药学院兰州730000 甘肃省药品检验研究院国家中药材及饮片质量控制重点实验室甘肃省中藏药检验检测技术工程实验室兰州730000 中国食品药品检定研究院北京102629

目的:通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP法)建立一种能快速鉴别麦冬药材及饮片中掺混山麦冬的方法。方法:对麦冬和山麦冬的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列酶切位点进行比对,选择山麦冬的特异性酶切位点PmlI,设计PCR-... 详细信息

目的:通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP法)建立一种能快速鉴别麦冬药材及饮片中掺混山麦冬的方法。方法:对麦冬和山麦冬的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列酶切位点进行比对,选择山麦冬的特异性酶切位点PmlI,设计PCR-RFLP反应引物。以退火温度58℃、循环数为30,LR-F和LR-R鉴别引物(10μmol·L^(-1))各0.5μL,PmlI限制性内切酶在37℃酶切2 h的反应条件为PCR-RFLP法的参数,并进行方法学考察和统计分析。结果:在退火温度58℃、循环数为30时,山麦冬或掺有山麦冬的麦冬样品经过特异性引物扩增后,能被PmlI限制性内切酶酶切,在100~250 bp之间检出2条单一DNA条带,麦冬样品则无此条带。该方法稳定性好,专属性强,能对麦冬与山麦冬饮片及掺混样品进行鉴别,并对麦冬中掺入山麦冬的检出限为5%。结论:建立的PCR-RFLP鉴别方法稳定性好,灵敏度高,实现了麦冬与山麦冬饮片及麦冬中掺混山麦冬的快速检测,可用于麦冬与山麦冬药材真伪鉴别的补充检验方法。

关键词：麦冬山麦冬掺混鉴别 PCR-RFLP转录间隔区(ITS) 特异性限制酶鉴定

山麦冬和麦冬皂苷类成分的HPLC/ESI-MS图谱研究

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中国药学杂志 2005年第21期40卷 1619-1621页

作者：韩凤梅李紫张玲蔡敏陈勇湖北大学中药生物技术省重点实验室湖北武汉430062

目的鉴定山麦冬和麦冬中的皂苷成分,并建立其特征图谱。方法用甲醇提取山麦冬和麦冬对照药材,并用C_(18)SPE固相萃取柱除去提取液中的多糖成分制备供试液;用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱(HPLE/ESI-ITMS)研究供试液中的总皂苷成分并建... 详细信息

目的鉴定山麦冬和麦冬中的皂苷成分,并建立其特征图谱。方法用甲醇提取山麦冬和麦冬对照药材,并用C_(18)SPE固相萃取柱除去提取液中的多糖成分制备供试液;用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱(HPLE/ESI-ITMS)研究供试液中的总皂苷成分并建立相应的特征图谱。实验条件为:AICHROM^(TM)RelizSilC_(18)(2.1mm×150mm,5μm)分析柱,流动相为10mmol·L^(-1)醋酸铵和乙腈(60min内乙腈浓度变化为25%～60%),流速为0.2mL·min^(-1),自动进样后色谱分离、质谱检测。结果山麦冬、麦冬对照药材中分别有17个和14个特征色谱峰,根据各色谱峰的二级质谱碎片信息并参考有关文献,对其中的一些皂苷成分进行了初步定性分析。结论所测山麦冬与麦冬样品两者HPIE/ESI-ITMS的图谱特征性强,差异明显。

关键词：山麦冬麦冬皂苷高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱

麦冬与伪品山麦冬的质量评价及在中成药中的应用

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麦冬与伪品山麦冬的质量评价及在中成药中的应用

作者：邸旭晨哈尔滨商业大学

学位级别：硕士

麦冬为百合科沿阶草属植物麦冬Ophiopogon japonicus(L.f)Ker Gawl.的干燥块根,伪品山麦冬为百合科山麦冬属植物湖北麦冬Liriope spicata(Thunb.)*** ***和山麦冬属植物短葶山麦冬Liriope muscari(Decne.)Baily的干燥块根。麦冬中含量... 详细信息

麦冬为百合科沿阶草属植物麦冬Ophiopogon japonicus(L.f)Ker Gawl.的干燥块根,伪品山麦冬为百合科山麦冬属植物湖北麦冬Liriope spicata(Thunb.)*** ***和山麦冬属植物短葶山麦冬Liriope muscari(Decne.)Baily的干燥块根。麦冬中含量最多的标志性成分为麦冬皂苷D,湖北麦冬中含量最多的标志性成分为山麦冬皂苷B,短葶山麦冬中含量最多的标志性成分为短葶山麦冬皂苷C。麦冬类药材在种植过程中常喷洒植物生长调节剂多效唑来干预植物的生长发育,以期缩短种植周期,增加重量和产量。调查发现,市场上关于麦冬药材存在两个常见问题:1、伪品山麦冬代替麦冬;2、麦冬药材中残留多效唑。本课题以上述问题为导向,通过文献查询及调研,建立合理的方法检测山麦冬特有成分山麦冬皂苷B、短葶山麦冬皂苷C来解决麦冬中掺伪山麦冬的问题,并以多效唑为指标,检测麦冬药材中是否残留植物生长调节剂,并重点将方法应用于含麦冬的中成药中,进一步加强中药材的终端产品的质量控制。具体研究简述如下:1、采用薄层色谱法和液相色谱法对麦冬和山麦冬进行鉴别。结果显示薄层色谱法只能鉴别麦冬皂苷D与山麦冬皂苷B,而不能鉴别麦冬皂苷D与短葶山麦冬皂苷C,不足以区分麦冬与山麦冬。进一步采用液相色谱法建立麦冬药材的指纹图谱对麦冬和山麦冬进行鉴别,确认了 14个共有峰,并进行方法学验证,结果表明该方法的精密度和重复性良好,样品成分在10 h内稳定,通过该方法测定的9批麦冬药材,相似度为0.900～0.999。1批湖北麦冬和1批短葶山麦冬测定结果相似度分别为0.500和0.000,表明该指纹图谱能够有效区分麦冬与山麦冬。2、通过超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-MS/MS)法鉴别麦冬及其伪品山麦冬。离子源选择电喷雾的正离子和负离子扫描,采用多反应监测(MRM)模式,对山麦冬皂苷B和短葶山麦冬皂苷C进行定性鉴别。该方法样品前处理快速简便,检测灵敏度较高,准确度良好,可推广用于麦冬药材的真伪鉴别,检出1批中成药为伪品湖北麦冬投料,该中成药为口炎清颗粒。3、采用液相色谱建立麦冬皂苷D、山麦冬皂苷B和短葶山麦冬皂苷C的含量测定方法,并对样品的前处理条件进行考察和优化,同时进行方法学验证。结果显示,各成分线性结果和重复性结果良好;稳定性结果的RSD值均符合要求表明这三种成分在24 h之内稳定;回收率结果在97%～101%之间,RSD值在1.8%～2.9%之间,表明准确度良好。并用该方法对10批麦冬、10批湖北麦冬和3批短葶山麦冬药材进行含量测定,结果显示短葶山麦冬药材中的短葶山麦冬皂苷C的平均含量为1.49mg/g;麦冬药材中的麦冬皂苷D的平均含量为0.20 mg/g;湖北麦冬药材中的山麦冬皂苷B的平均含量为0.3 mg/g。4、采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-MS/MS)法检测麦冬药材中多效唑的残留情况,选择多效唑特征离子峰作为检测离子对进行检测。结果显示,该方法检测的23批药材中检测出11批药材中残留多效唑,检出率高达48%;18批次不同剂型的中成药中2批检出多效唑残留,检出中成药分别为安神健脑液和生脉胶囊。

关键词：麦冬山麦冬多效唑中成药质量评价

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麦冬与山麦冬果实花青素合成差异性研究

麦冬与山麦冬果实花青素合成差异性研究

作者：干思宸浙江农林大学

学位级别：硕士

麦冬(Ophiopogon japonicus)和山麦冬(Liriope spicata)是百合科多年生植物,这两种植物在园林绿化中被广泛栽培于林下,但麦冬与山麦冬在栽培中常被混淆,果实颜色是区分两者的重要特征。麦冬果实幼果期为绿色,成熟时为蓝色;而山麦冬幼果... 详细信息

麦冬(Ophiopogon japonicus)和山麦冬(Liriope spicata)是百合科多年生植物,这两种植物在园林绿化中被广泛栽培于林下,但麦冬与山麦冬在栽培中常被混淆,果实颜色是区分两者的重要特征。麦冬果实幼果期为绿色,成熟时为蓝色;而山麦冬幼果期为绿色,成熟时为黑色。为探究两种植物果实花青素合成差异性,本研究分别对麦冬果实5个发育时期与山麦冬3个发育时期进行代谢组、转录组分析,在分别筛选麦冬与山麦冬转色关键花青素与关键基因后,比较两者差异点,阐述果实花青素生物合成的差异性机制。主要结果如下:(1)通过代谢组分析发现在麦冬5个发育阶段(S1-S5)有5种关键花青素对果实转色的影响较大,是Delphinidin 3-O-rutinoside、Delphinidin 3-O-glucoside、Petunidin3-O-rutinoside、Cyanidin 3-O-galactoside、Delphinidin 3-O-galactoside,特别是Delphinidin 3-O-rutinoside,在成熟期(S4)占代谢物总量67.6%以上。后通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)与代谢物-基因联合分析发现6个模块的基因群与花青素含量变化高度正相关(P山麦冬3个发育阶段(L1-L3)有8种关键花青素对果实转色的影响较大,是Delphinidin 3-O-glucoside、Peonidin 3-O-rutinoside、Delphinidin3-O-rutinoside、Petunidin 3-O-rutinoside、Malvidin 3-O-galactoside、Petunidin3-O-glucoside、Cyanidin 3-O-rutinoside、Cyanidin 3-O-glucoside,特别是Peonidin3-O-rutinoside、Delphinidin 3-O-glucoside的VIP值分别在L1-L2与L1-L3最高,是区分山麦冬绿果与黑果的主要代谢物。后通过WGCNA与代谢物-基因联合分析发现共有4个模块的基因群与花青素含量变化高度正相关(P麦冬与山麦冬果实成熟期(S4-L2)代谢物发现:花青素种类的比例是影响呈色的关键。蓝色系花青素类型在麦冬S4的占比极高,远超红色系花青素类型;相反,山麦冬L2的红色系花青素类型含量远高于麦冬S4的红色系花青素类型含量,特别是Peonidin。此外,山麦冬L2的红色系花青素类型占比与山麦冬蓝色系花青素类型占比相近。进一步通过多元统计分析发现Peonidin 3-O-rutinoside对两种果实成熟期呈色差异影响最大,其VIP值最高。(4)比较麦冬与山麦冬关键基因后发现:早期类黄酮合成基因4CL、F3H在山麦冬中更高表达;且山麦冬果实含有差异表达的IIIf亚族的b HLH,Lsb HLH具有与花青素合成相关的氨基酸残基K161、A163与基序H-E-R。但是,上述基因在两种果实的差异表达不能直接决定花青素种类的比例。F3'H与F3'5'H对底物二氢山柰酚的竞争才是两种果实花青素合成分流的关键。麦冬高表达的Oj F3'5'Hs,导致前体物质更容易流向二氢杨梅素分支;相反,山麦冬Ls F3'H4基因能调控积累大量3'-羟化的产物,且Ls F3'5'H2氨基酸能进行B环3',5'-羟基化反应,并积累二氢杨梅素。本研究基于山麦冬果实与麦冬果实的转录组与代谢组数据,首次筛选山麦冬果实与麦冬果实转色关键花青素、关键基因。同时,揭示了麦冬与山麦冬呈色差异的物质基础与分子调控差异。这些工作为后续关键酶基因活性位点验证奠定基础,具有一定的理论及实际意义。

关键词：麦冬山麦冬果实代谢组转录组飞燕草色素芍药色素

山麦冬总氨基酸对大鼠实验性心肌缺血的保护作用

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中国药理学通报 1993年第4期9卷 281-284页

作者：高广猷宋晓亮叶丽虹大连医学院药理教研室辽宁116023 长治医学院药理教研室山西046000

山麦冬总氨基酸(Tal5 mg·kg^(-1)iP)对垂体后叶索致大鼠心电图急性缺血性改变有明显的预防作用。在异丙肾上腺素引起的心肌损伤大鼠Tal10mg·kg^(-1),ip可对抗ST段升高,显著抑制心肌组织中磷酸肌酸激酶(CPK)的释放,降低血清CPK水平,保... 详细信息

山麦冬总氨基酸(Tal5 mg·kg^(-1)iP)对垂体后叶索致大鼠心电图急性缺血性改变有明显的预防作用。在异丙肾上腺素引起的心肌损伤大鼠Tal10mg·kg^(-1),ip可对抗ST段升高,显著抑制心肌组织中磷酸肌酸激酶(CPK)的释放,降低血清CPK水平,保护心肌组织超氧化物歧化酶活性,减少丙二醛生成。在结扎冠脉的心肌梗塞大鼠,Tal15 mg·kg^(-1),ip明显抑制血清CPK和乳酸脱氨酶升高,降低血清游离脂肪酸水平,缩小心肌梗塞范围。实验结果表明,Tat对实验性心肌缺血有明显的保护作用。

关键词：山麦冬氨基酸心肌缺血