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山奈素与牛血清蛋白相互作用:Tachiya模型与Stern-Volmer方程的对比研究

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分析测试学报 2013年第2期32卷 186-192页

作者：陶慧林黎舒怀徐铭泽周素莲刘帅涛易忠胜桂林理工大学化学与生物工程学院广西桂林541004

在模拟人体生理条件下,利用荧光光谱、紫外吸收光谱研究了不同温度(298、304、310 K)时,山奈素(KF)与BSA之间的相互作用。分别使用Tachiya模型与Stern-Volmer方程探讨了KF-BSA之间的结合常数、结合位点数及结合距离。结果表明,使用Tach... 详细信息

在模拟人体生理条件下,利用荧光光谱、紫外吸收光谱研究了不同温度(298、304、310 K)时,山奈素(KF)与BSA之间的相互作用。分别使用Tachiya模型与Stern-Volmer方程探讨了KF-BSA之间的结合常数、结合位点数及结合距离。结果表明,使用Tachiya模型时,体系结合常数与结合距离均随温度的升高而增大,这种趋势与Stern-Volmer方程得到的结果变化趋势一致。由Stern-Volmer方程获得的结合位点数几乎不随着温度变化而变化,但由Tachiya模型得到的实际结合位点数则随温度的改变而变化很大。Tachiya模型得到的结果更符合小分子与生物大分子相互作用的实际情况。热力学数据表明KF与BSA之间主要依靠疏水作用力结合。并利用同步荧光光谱法研究了KF对BSA构象的影响。

关键词：山奈素牛血清蛋白 Tachiya模型 Stern—Volmer方程相互作用

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山奈素与蛋白质相互作用的电化学行为研究

电化学 2010年第2期16卷 233-236页

作者：林丽清林新华陈敬华黄丽英刘银环李光文福建医科大学药物分析系福建福州350004

应用循环伏安法研究山奈素在活化玻碳电极上的电化学行为及其与人血清白蛋白(HSA)的相互作用,建立差示脉冲伏安法测定HSA的新方法.在pH4.5的磷酸盐缓冲液(PBS)中,山奈素可与HSA形成超分子复合物,导致前者在0.468V处的氧化电流峰下降,其... 详细信息

应用循环伏安法研究山奈素在活化玻碳电极上的电化学行为及其与人血清白蛋白(HSA)的相互作用,建立差示脉冲伏安法测定HSA的新方法.在pH4.5的磷酸盐缓冲液(PBS)中,山奈素可与HSA形成超分子复合物,导致前者在0.468V处的氧化电流峰下降,其下降值与HSA浓度在0.05～0.25mg/L范围呈线性关系,检出限为0.008mg/L,可应用于血清样品测定.

关键词：山奈素蛋白质伏安法

前列倍喜片中槲皮素和山奈素HPLC检测方法的建立及其评价

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吉林大学学报（医学版） 2011年第1期37卷 168-170页

作者：侯宜尹建元姜志恒张莹孟庆雯李巍李艳艳孟勤吉林大学药学院组织工程学教研室吉林长春130021 吉林大学药学院天然药物化学教研室吉林长春130021 吉林大学药学院药学实验中心吉林长春130021 东北师范大学附属中学

目的:建立前列倍喜片中槲皮素和山奈素含量的高效液相色谱(HPLC)法测定方法,为工业生产的质量控制提供依据。方法:采用HPLC测定前列倍喜片中槲皮素和山奈素的含量,检测条件:Shimpack VP-ODSC18(150.0mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈... 详细信息

目的:建立前列倍喜片中槲皮素和山奈素含量的高效液相色谱(HPLC)法测定方法,为工业生产的质量控制提供依据。方法:采用HPLC测定前列倍喜片中槲皮素和山奈素的含量,检测条件:Shimpack VP-ODSC18(150.0mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(30∶70),检测波长为370nm,柱温为30℃。结果:槲皮素在0.042 6～0.639 0μg范围内有良好线性关系,回归方程为Y=-10 931+1 426 905X,r=0.999 8,平均回收率98.5%,RSD为2.61%(n=6);山奈素在0.045 4～0.726 4μg范围内有良好线性关系,回归方程为Y=-558 68+1 656 625X,r=0.999 2,平均回收率100.3%,RSD为2.28%(n=6);以精密度实验、稳定性实验和重复性实验考察的RSD分别为1.66%、2.11%和1.35%。经测试并结合生产实际情况限定前列倍喜片中槲皮素和山奈素的含量不少于0.7mg/粒。结论:HPLC测定前列倍喜片中槲皮素和山奈素含量的方法准确、简单可行,重复性好,为控制前列倍喜片的质量提供了科学依据。

关键词：前列倍喜片槲皮素山奈素色谱法,高效液相

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山奈素分子印记聚合物的制备及识别性能研究

林产化学与工业 2011年第4期31卷 19-24页

作者：于兰哲曲丹贠延滨北京林业大学环境科学与工程学院北京100083

采用分子印记技术,以山奈素为模板分子,4-乙烯基吡啶(4-VP)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,偶氮二异丁氰(AIBN)为引发剂,在CHCl3-DMF(体积比3∶1)的溶剂体系中合成了含碱性功能基团的分子印记聚合物。通过红外光谱及扫... 详细信息

采用分子印记技术,以山奈素为模板分子,4-乙烯基吡啶(4-VP)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,偶氮二异丁氰(AIBN)为引发剂,在CHCl3-DMF(体积比3∶1)的溶剂体系中合成了含碱性功能基团的分子印记聚合物。通过红外光谱及扫描电镜(SEM)对聚合物进行表征,并研究印记聚合物对山奈素的吸附性能及机理。静态吸附实验结果表明:该分子印记聚合物对山奈素具备良好的吸附能力,经Scatchard模型分析印记聚合物存在对模板分子均一的结合位点,其最大表观吸附量(Qmax)为3 938μg/g,平衡解离常数(KD)9.074 mg/L。选择性实验表明,分子印记聚合物在山奈素-芦丁体系中的分离因子达到3.24。

关键词：分子印记聚合物山奈素特异识别吸附性能

山奈素对KG1a细胞增殖的抑制作用及机制研究

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中国实验血液学杂志 2023年第2期31卷 319-326页

作者：陈哲张灵袁小飞高炳华张斌王霞河北北方学院附属第一医院血液科河北张家口075061 河北北方学院附属第一医院检验科河北张家口075061

目的:探讨山奈素对急性髓系白血病(AML)KG1a细胞增殖抑制作用及其相关作用机制。方法:取对数生长期的人AML KG1a细胞,培养液中分别加入山奈素药液0、25、50、75、100μg/ml,溶剂对照组加入二甲基亚砜,干预24和48 h后,采用CCK-8法检测细... 详细信息

目的:探讨山奈素对急性髓系白血病(AML)KG1a细胞增殖抑制作用及其相关作用机制。方法:取对数生长期的人AML KG1a细胞,培养液中分别加入山奈素药液0、25、50、75、100μg/ml,溶剂对照组加入二甲基亚砜,干预24和48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖率;另设白细胞介素-6(IL-6)与山奈素联用组(加20μg/L的IL-6和75μg/ml的山奈素),给药培养48 h后,流式细胞术检测KG1a细胞周期及凋亡情况,线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1法)检测KG1a细胞MMP,蛋白免疫印迹法检测KG1a细胞JAK2/STAT3通路相关蛋白表达。结果:山奈素25、50、75、100μg/ml组细胞增殖率明显降低(P山奈素剂量的增大,细胞增殖率逐渐降低(r_(24h)=-0.990、r_(48h)=-0.999)(P山奈素干预48 h后对细胞增殖的抑制作用已达到半数有效剂量;与空白对照组相比,山奈素25、50、75μg/ml组细胞在G_(0)/G_(1)期的细胞比例、凋亡率依次升高,而S期的细胞比例、MMP、磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3蛋白表达依次降低,且呈一定的剂量依赖性(r=0.998、0.994、-0.996、-0.981、-0.997、-0.930);与山奈素75μg/ml组相比,IL-6与山奈素联用组细胞在G_(0)/G_(1)期的细胞比例、凋亡率明显降低,S期的细胞比例、MMP、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达明显升高(P山奈素可抑制KG1a细胞增殖,诱导KG1a细胞凋亡,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

关键词：山奈素急性髓系白血病增殖凋亡 Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3

高效液相色谱法评价贵州金钱草代谢产物槲皮素和山奈素的多样性

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中国医院药学杂志 2020年第3期40卷 279-283页

作者：杨正久代建忠梁大敏钱静董红梅遵义医药高等专科学校医学技术系贵州遵义563000

目的:建立金钱草中槲皮素和山奈素的HPLC测定方法,用以测定贵州省不同来源地的21份金钱草中槲皮素和山奈素的含量,并对其多样性进行分析。方法:采用Alltima C18柱(5μm,250 mm×4.6 mm),以甲醇-0.4%磷酸(50∶50,V/V)为流动相,柱温:25℃... 详细信息

目的:建立金钱草中槲皮素和山奈素的HPLC测定方法,用以测定贵州省不同来源地的21份金钱草中槲皮素和山奈素的含量,并对其多样性进行分析。方法:采用Alltima C18柱(5μm,250 mm×4.6 mm),以甲醇-0.4%磷酸(50∶50,V/V)为流动相,柱温:25℃,流速:1.0 mL·min-1,检测波长为360 nm;用SPSS 19.0软件对不同来源地金钱草中槲皮素和山奈素进行聚类分析。结果:槲皮素和山奈素分别在0.0286~0.1965 mg(r=0.9997)和0.0477~0.3814 mg(r=0.9999)的定量范围内,色谱峰面积与进样量呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999。槲皮素和山奈素在精密度实验、重复性实验和稳定性试验中的RSD分别为0.24%和0.58%、0.95%和1.32%、1.02%和1.08%,RSD均小于1.40%,加样平均回收率为99.42%和98.36%。不同来源地的21份金钱草中槲皮素和山奈素含量差异较大。结论:用HPLC法测定金钱草中槲皮素和山奈素含量简单、精确、重复性高,贵州金钱草中槲皮素和山奈素含量差异较大,具有丰富的多样性及一定的地域性。

关键词：金钱草槲皮素山奈素高效液相色谱法多样性

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山奈素治疗糖尿病肾病的疗效及机制研究

山奈素治疗糖尿病肾病的疗效及机制研究

作者：戴雯妮中南大学

学位级别：硕士

研究背景:糖尿病肾病(Diabetic kidney disease,DKD)是临床常见病与多发病,在全世界范围内造成严重的健康问题和巨大的经济负担。临床上DKD的主要治疗手段包括控制血糖、降低血压、调节脂代谢等综合治疗,目前尚无有效延缓肾功能进展的... 详细信息

研究背景:糖尿病肾病(Diabetic kidney disease,DKD)是临床常见病与多发病,在全世界范围内造成严重的健康问题和巨大的经济负担。临床上DKD的主要治疗手段包括控制血糖、降低血压、调节脂代谢等综合治疗,目前尚无有效延缓肾功能进展的治疗方法。鉴于糖尿病肾病患病人数和社会成本不断上升,预防和治疗DKD的新策略和新思路有待进一步发掘。化合物库是按照特殊的研究目的来研制的大量化合物集合,应用于高通量药物筛选,可帮助找到新药研发的先导化合物。化合物库是药物筛选的重要工具,可以根据需要定制化合物库,因此,我们可以利用定制化合物库寻找治疗DKD的新化合物。目的:(1)利用定制化合物库筛选出在高糖高脂状态下能保护肾小管上皮细胞的化合物(通过筛选和初步验证,我们选择的化合物为山奈素)。(2)研究在糖尿病状态下,山奈素(Kaempferide,Kae)是否能保护肾小管上皮细胞;(3)利用肾脏转录组学测序获得山奈素治疗糖尿病肾病的潜在靶点,该部分我们选择的靶点为羟甲基戊二酸单酰辅酶A合酶2(3-hydroxy-3-methylglutaryl-Co A synthase 2,Hmgcs2);(4)探究山奈素是否能通过调控HMGCS2表达水平、减少肾脏酮体的蓄积从而减轻肾小管上皮细胞损伤。方法:(1)体外实验:(1)建立人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤模型:采用高糖高脂(HGPA,30 m M的高糖+200μM的棕榈酸)诱导HK-2细胞损伤,使用CCK-8法检测HGPA对HK-2细胞活力的影响。(2)利用化合物库筛选化合物:将HK-2细胞种在96孔板中,孵育24 h,分别用NG(normal glucose,正常糖)、HGPA以及HGPA+不同化合物的培养基干预36 h后检测各组的细胞活力。(3)用不同浓度山奈素(10μM、20μM和40μM)干预HGPA孵育的HK-2细胞,测定不同浓度山奈素对细胞活力的影响;高浓度山奈素(40μM)对细胞形态变化和HMGCS2表达的影响。(4)在HK-2细胞中转染***或***2,再予以HGPA或HGPA+山奈素(40μM)干预36 h,检测各组细胞纤维化指标如纤连蛋白(FN)、生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达。(2)体内实验:构建2型糖尿病小鼠模型,造模成功后,将DM小鼠随机分为5组:模型组(DKD组)、山奈素低剂量组(DKD+Kae L组,DKD+Kae组)、山奈素中剂量组(DKD+Kae M组)、山奈素高剂量组(DKD+Kae H组)和罗格列酮组(DKD+Rog组,阳性药物对照组),每组5只;另取5只C57BL/6J小鼠作为正常对照组(NC组)。山奈素低、中、高剂量组分别给予10 mg/kg/d、50 mg/kg/d和100 mg/kg/d山奈素混悬液,罗格列酮组给予10 mg/kg/d罗格列酮混悬液,正常对照组和模型组给予同等体积羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na,CMC-Na为山奈素和罗格列酮的溶剂),每日固定时间灌胃1次,给药体积均为200μL,连续给药12 w。到达实验终点,收集各组小鼠的血、尿和肾脏标本;取NC组、DKD组和山奈素低剂量组小鼠的肾脏皮质做转录组学;HE染色、PAS染色观察各组肾脏病理变化;Masson染色观察各组肾间质纤维化程度;RT-PCR、Western blot或组织化学染色检测各组肾小管损伤指标(KIM-1和FABP1)、纤维化指标(FN、TGF-β1和CTGF)、炎症指标(F4/80,Tnf-α和Vcam1)以及酮体代谢指标(HMGCS2和OXCT1)的表达;检测各组肾脏酮体的水平。结果:(1)从化合物库中筛选出对肾小管上皮细胞有保护作用的化合物为山奈素。(2)山奈素可以减轻糖尿病肾病小鼠的肾小管损伤、改善肾间质纤维化。(3)转录组学发现Hmgcs2在糖尿病肾病小鼠肾脏中表达明显升高。(4)HMGCS2主要表达在糖尿病肾病小鼠肾脏的肾小管上皮细胞中,山奈素可以抑制其表达并减少肾脏酮体的产生。(5)过表达HMGCS2,能增加HGPA孵育下的HK-2细胞纤维化指标的表达,山奈素可以通过HMGCS2抑制HK-2细胞纤维化。结论:山奈素可以减轻糖尿病小鼠肾脏损害,可能是通过抑制肾小管上皮细胞HMGCS2的过度表达,减少肾小管的酮体蓄积来减轻肾间质纤维化。图11幅,表7个,参考文献63篇

关键词：糖尿病肾病山奈素 HMGCS2 酮体代谢纤维化

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HPLC法测定四季青片中山奈素的含量

药物分析杂志 2010年第11期30卷 2178-2181页

作者：李宏霞韦志疆覃忠于广西河池食品药品检验所河池547000

目的:建立测定四季青片中山奈素含量的方法。方法:采用HPLC法,CAPCELL PAK C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(65∶35),流速1.0mL·min-1,检测波长为366nm。结果:山奈素在0～0.3752μg范围内线性关系良好,r=0.999... 详细信息

目的:建立测定四季青片中山奈素含量的方法。方法:采用HPLC法,CAPCELL PAK C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(65∶35),流速1.0mL·min-1,检测波长为366nm。结果:山奈素在0～0.3752μg范围内线性关系良好,r=0.9999(n=8);平均回收率为98.48%,RSD为2.66%(n=6)。结论:方法准确、操作简便,重复性好,可用于四季青片的质量控制。

关键词：四季青片山奈素含量测定 HPLC

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槐角提取物中山奈素纯化工艺研究

中药材 2011年第9期34卷 1446-1449页

作者：雷晓青陈震何珺何军贵州大学/贵州省生化工程中心贵州贵阳550025 贵州师范学院贵州贵阳550018

目的:以槐角粗提物为原料,用酸水解,再利用苷元在水解液中溶解性低而沉淀的方法纯化山奈素,并筛选出最佳工艺参数。方法:对工艺中水解时间、水解温度、料液比、冷却沉淀时间及山奈素结晶工艺参数进行研究。结果:确定了槐角粗提物中山奈... 详细信息

目的:以槐角粗提物为原料,用酸水解,再利用苷元在水解液中溶解性低而沉淀的方法纯化山奈素,并筛选出最佳工艺参数。方法:对工艺中水解时间、水解温度、料液比、冷却沉淀时间及山奈素结晶工艺参数进行研究。结果:确定了槐角粗提物中山奈素水解沉淀纯化工艺为:水解液为甲醇-水-盐酸(5∶3.5∶1.5)溶液,水解时间3h,水解温度70℃,料液比1 g∶5 mL,水解液最佳冷沉时间为1～2 h,可得55%粗晶体,甲醇溶解重结晶可得95%山奈素黄色晶体。结论:通过该工艺可从含12%～14%山奈素的槐角黄酮粗提物中分离纯化得到95%山奈素纯品,可为山奈素的工业化生产提供参考。

关键词：槐角山奈素纯化工艺