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沈阳医学院学报 2023年第5期25卷 458-462页

作者：肖梓豪王雅洁曹玉涵皖南医学院弋矶山医院肾内科安徽芜湖241001 皖南医学院麻醉学实验实训中心

目的:筛选诊断IgA肾病肾纤维化的新型无创生物标志物。方法:建立IgA肾病靶向实时荧光聚合酶链式扩增反应芯片,检测74例IgA肾病患者和31例健康对照的尿液mrna,筛选差异表达基因建立联合生物标志物预测肾纤维化模型。结果:50种尿液mrna在... 详细信息

目的:筛选诊断IgA肾病肾纤维化的新型无创生物标志物。方法:建立IgA肾病靶向实时荧光聚合酶链式扩增反应芯片,检测74例IgA肾病患者和31例健康对照的尿液mrna,筛选差异表达基因建立联合生物标志物预测肾纤维化模型。结果:50种尿液mrna在IgA肾病组和对照组之间差异表达(Pmrna与血肌酐和肾小球滤过率相关(Pmrna水平与肾纤维化的严重程度相关,并且能区分中-重度纤维化和无-轻度纤维化(P尿液mrna组成的无创生物标志物具备诊断IgA肾病肾纤维化的潜力。

关键词： IgA肾病荧光定量PCR芯片肾纤维化尿液mrna 无创生物标志物

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尿液中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mrna表达量与IgA肾病患者肾脏纤维化的相关性研究

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皖南医学院学报 2020年第3期39卷 217-221页

作者：汪裕伟曹玉涵皖南医学院第一附属医院弋矶山医院肾脏内科安徽芜湖241001

目的:建立诊断IgA肾病和肾脏纤维化的无创性检测方法,筛选IgA肾病和肾脏纤维化的生物标志物。方法:选择98例肾脏穿刺活检证实的IgA肾病患者和42例健康对照。RT-PCR检测尿液中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达,并分析其与临床和病理资... 详细信息

目的:建立诊断IgA肾病和肾脏纤维化的无创性检测方法,筛选IgA肾病和肾脏纤维化的生物标志物。方法:选择98例肾脏穿刺活检证实的IgA肾病患者和42例健康对照。RT-PCR检测尿液中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达,并分析其与临床和病理资料的相关性。ROC曲线分析尿液mTOR表达量对IgA肾病和肾脏纤维化的诊断价值。结果:IgA肾病患者尿液中mTOR表达量降低(P尿液中mTOR表达量较无-轻度纤维化患者降低(P尿液mTOR表达量可诊断IgA肾病,其灵敏度为86.7%,特异度为88.1%;尿液mTOR表达量可进一步区分IgA肾病不同纤维化程度,灵敏度和特异度分别为86.4%和94.4%。结论:尿液mTOR表达量可作为IgA肾病和肾脏纤维化的生物标志物。

关键词： IgA肾病肾脏纤维化尿液mrna 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白生物标志物

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基于Taqman探针的CKD相关基因检测荧光定量一步法试剂盒的构建及...

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作者：邱申东南大学

学位级别：硕士

研究背景:慢性肾脏疾病(CKD)是世界上影响人类健康的慢性病之一,目前对慢性肾脏病的诊断仍缺乏有效手段。近年来研究表明,尿液信使RNA(messenger RNA,mrna)检测可能成为CKD早期无创诊断的有效手段。我们通过生物信息学和基因表达芯片的... 详细信息

研究背景:慢性肾脏疾病(CKD)是世界上影响人类健康的慢性病之一,目前对慢性肾脏病的诊断仍缺乏有效手段。近年来研究表明,尿液信使RNA(messenger RNA,mrna)检测可能成为CKD早期无创诊断的有效手段。我们通过生物信息学和基因表达芯片的筛查,发现了一系列可能的CKD相关尿液mrna诊断标志物。然而,既往基于SYBR两步PCR检测尿液mrna的方法耗时耗力,限制了对候选标志物大样本的临床验证。本研究旨在构建一种基于Taqman探针荧光定量PCR一步试剂盒,提高尿液mrna标志物的检测效率、敏感性、特异性,并通过临床样本验证和性能评价,构建CKD尿液mrna一步法检测试剂盒,发现CKD新型诊断标志物。方法:应用生物信息学技术筛选CKD患者差异表达mrna,从中选取三个mrna基因,分别是PODXL、IL1RL1和CCL2。根据目的基因ID,在NCBI上下载PODXL、IL1RL1、CCL2、以及B2M(内参基因)基因全序列,并构建基于Taqman探针的CKD相关基因检测荧光定量一步法试剂盒,对试剂盒进行敏感性及重复性检验以检测试剂盒性能。筛选符合条件的受试者,收集受试者尿液样本,应用所建试剂盒检测受试者尿液PODXL、IL1RL1及CCL2 mrna水平并评估标志物的诊断效能。结果:通过对基因组平台大数据库的综合分析,我们构建了常见慢性肾脏病如糖尿病肾病、高血压肾病、局灶节段性肾小球硬化、膜性肾病和IgA肾病等的转录组学表达谱,发现了176个肾小球相关慢性肾脏病差异表达基因、50个肾小管相关差异表达基因。通过对PCR实验中各体系组分及反应条件优化,我们构建的TaqMan探针一步法荧光定量试剂盒可实现尿液中PODXL、IL1RL1和CCL2以及B2M(内参基因)四种mrna有效扩增及定量检测。经过一系列的重复性及敏感性验证,发现本试剂盒的变异系数小于0.5%,检测性能较稳定,可从0.5ng/10ul体系的尿沉渣mrna中检测相应mrna表达水平,灵敏度较好。整个扩增定量全过程在一小时内完成,与传统的两步法PCR方法相比减少了检测时间。应用构建的Taqman探针一步法试剂盒对既往所筛选的差异基因进行临床验证,发现DKD患者的尿液PODXL mrna、IL1RL1 mrna和CCL2 mrna水平高于正常对照组(HC)。GN(慢性肾小球肾炎)患者三种基因表达水平和正常组相比无差异。HC组和DKD III期、IV期组尿液PODXL mrna、IL1RL1 mrna表达水平有显著差异。而HC组和DKD各期间CCL2 mrna表达水平无差异。DKD患者的尿液PODXL mrna、IL1RL1 mrna和CCL2 mrna表达水平和eGFR、血肌酐无相关性,和24小时尿蛋白、ACR呈显著的正相关。PODXL区分DKD和对照组的ROC曲线下面积AUC为0.7879(p尿液基因表达检测具有较好的敏感性、特异性和可重复性;该试剂盒用于CKD尿液mrna标志物大样本检测,发现尿液PODXL、IL1RL1和CCL2 mrna可能成为DKD新型诊断标志物。

关键词：生物信息学尿液mrna 慢性肾脏病基因芯片荧光定量PCR Taqman探针

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