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利用尿液细胞建立脓毒症脑损伤患者来源的多能干细胞株实验

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中华危重病急救医学 2019年第12期31卷 1445-1450页

作者：邱欣良潘烨赵宁钱克俭詹以安南昌大学第一附属医院重症医学科 330006

目的将脓毒症脑损伤(SE)患者中的尿液细胞重组编程为诱导性多能干细胞(iPSC)株,为探讨SE患者的神经细胞损害机制及治疗方法提供特异性的细胞模型.方法分离SE患者晨间尿液细胞进行原代培养后,通过Millipore公司的慢病毒重编程试剂盒(STEM... 详细信息

目的将脓毒症脑损伤(SE)患者中的尿液细胞重组编程为诱导性多能干细胞(iPSC)株,为探讨SE患者的神经细胞损害机制及治疗方法提供特异性的细胞模型.方法分离SE患者晨间尿液细胞进行原代培养后,通过Millipore公司的慢病毒重编程试剂盒(STEMCCA^TM试剂盒)进行慢病毒重编程,把含有OCT4、Klf4、Sox2、c-Myc 4个转录因子组合(OKSM)的慢病毒载体转染至SE患者尿液细胞中,获得SE患者来源的iPSC.使用碱性磷酸酶(AKP)染色和免疫荧光染色、裂解细胞提取后实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)、畸胎瘤成瘤等方法判定尿液细胞来源iPSC的全能性,抑制转化生长因子β(TGF-β)信号通路,诱导iPSC转化为神经细胞.结果镜下观察iPSC呈扁平椭圆或圆形、分界及边缘清晰、排列紧凑的类人胚胎干细胞样集落群生长,AKP染色呈紫红色,荧光染色显示,干细胞多能性分子标志物OCT4、阶段性特异性胚胎抗原SSEA4、胚胎干细胞标志物TRA1-81呈高度表达;iPSC的胚胎干细胞相关因子NANOG、REX1、OCT4和Sox2的mRNA表达水平显著高于初始尿液细胞的表达量,差异有统计学意义〔NANOG mRNA(2^-ΔΔCt):1.153±0.142比0.126±0.024,t=-10.688;REX1 mRNA(2-ΔΔCt):1.419±0.206比0.103±0.066,t=-14.245;OCT4 mRNA(2^-ΔΔCt):1.233±0.176比0.201±0.022,t=-9.028;Sox2 mRNA(2^-ΔΔCt):1.334±0.119比0.159±0.017,t=-12.653,均P尿液细胞源性的iPSC具备同样的全能性,并能诱导分化为神经细胞.结论诱导分化出的SE患者尿液细胞来源的iPSC株具有多能干细胞特性,可成功诱导为人体的神经细胞,为SE的发病机制研究和探索临床治疗方法提供了理想的细胞模型.

关键词：脓毒症脑损伤尿液细胞诱导性多能干细胞

尿沉渣定量分析仪与干化学检测尿液细胞的临床应用

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中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生 2023年第5期 0036-0038页

作者：王新芳宁远县人民医检验科湖南永州425600

研究尿沉渣定量分析仪与干化学检测尿液细胞的临床应用效果。方法于我院2020年10月-2022年10月间尿液标本中随机抽取396例为检测标本,依照黑白小球法划入两组,即试验组和常规组各198例。试验组作尿沉渣定量分析仪检测,常规组作干化学... 详细信息

研究尿沉渣定量分析仪与干化学检测尿液细胞的临床应用效果。方法于我院2020年10月-2022年10月间尿液标本中随机抽取396例为检测标本,依照黑白小球法划入两组,即试验组和常规组各198例。试验组作尿沉渣定量分析仪检测,常规组作干化学分析法检测,且两组均作尿沉渣离心镜检法,以镜检结果作为金标准,比较两组检测结果。结果红、白细胞阳性率中,尿沉渣定量法为22.73%、21.21%,离心镜检法为22.22%、19.70%,(P>0.05)。干化学分析法的红、白细胞阳性率为21.21%、19.19%,离心镜检法为21.72%、20.20%,(P>0.05)。红、白细胞阳性率中,尿沉渣定量法为22.73%、21.21%,干化学法为21.21%、19.19%,(P>0.05)。结论尿液细胞检测中,应用尿沉渣定量分析仪或干化学分析法,试验所取得的结果不存在明显差异。实际应用中,可结合患者情况应用,各有优缺点,也可联合应用,提高检测准确率。

关键词：尿沉渣定量分析仪检测效果尿液细胞干化学分析法

MELAS综合征患者尿液细胞中线粒体基因突变的研究进展

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中华医学杂志 2012年第38期92卷 2730-2732页

作者：吴海荣马祎楠戚豫刘红刚首都医科大学附属北京同仁医院病理科 100730 北京大学第一医院中心实验室

线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作（MELAS）综合征是由于线粒体结构或功能异常导致呼吸链乃至整个能量代谢过程紊乱的临床异源性多系统疾病，以脑组织和肌肉受累最严重。本病系母系遗传，亦见散发，临床表现复杂多变，误诊率极高。

关键词： MELAS综合征线粒体基因突变尿液细胞患者线粒体脑肌病临床表现多系统疾病线粒体结构

定向诱导人尿液细胞源性多能干细胞向多巴胺能神经元的分化

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解剖学研究 2020年第2期42卷 103-111页

作者：谢海航梁宁苏中强吴玉兰蔡皓然徐丽萍龙大宏广州医科大学基础学院广东广州511436

目的探讨定向诱导人尿液来源诱导性多能干细胞(U-iPS)向多巴胺(DA)能神经元分化。方法单层贴壁法体外培养U-iPS,通过时向性添加TGF-β及BMP信号通路抑制剂,SHH细胞因子,GSK3β抑制剂Chir99021将U-iPS诱导为DA能神经前体细胞(NPCs),通过... 详细信息

目的探讨定向诱导人尿液来源诱导性多能干细胞(U-iPS)向多巴胺(DA)能神经元分化。方法单层贴壁法体外培养U-iPS,通过时向性添加TGF-β及BMP信号通路抑制剂,SHH细胞因子,GSK3β抑制剂Chir99021将U-iPS诱导为DA能神经前体细胞(NPCs),通过添加BDNF/GDNF等细胞因子将其进一步分化为DA能神经元。在诱导分化的4个时间点(第0天、7天、14天及25天)采用RT-qPCR和免疫荧光检测多能干细胞标志物Oct4与Nanog的表达;NPCs标志物Nestin、Pax6和Foxa2的表达;DA神经前体细胞标志物Lmx1a和En1的表达;神经元标志物Tuj1的表达以及DA能神经元标志物TH的表达情况。以人皮肤成纤维细胞来源的iPS(F-iPS)向DA能神经元的诱导分化作为对照进行分化效率的比较。结果U-iPS在第0天表达多能干标志物Oct4和Nanog;诱导第7天能转化为Nestin、Pax6及Foxa2阳性的NPCs;第14天转化为Lmx1a和En1阳性的DA能神经前体细胞;第25天分化得到的神经元样细胞表达神经元标志物Tuj1,其中部分细胞表达DA能神经元标志物TH。各时间点神经类细胞标志物的表达与F-iPS诱导分化得到的神经类细胞标志物的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论U-iPS细胞具有向DA能神经元分化的潜力,能在体外经过诱导分化得到TH阳性的DA能神经元,且与F-iPS向DA能神经元分化的效率无明显差异。

关键词：人诱导性多能干细胞尿液细胞诱导分化多巴胺能神经元帕金森病

利用尿液细胞诱导血友病A患者特异性iPS细胞的研究

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利用尿液细胞诱导血友病A患者特异性iPS细胞的研究

作者：胡旭昀中南大学

学位级别：硕士

血友病A （Hemophilia A,HA）是一种X连锁隐性遗传病,男性患者具有一条含突变基因的X染色体,导致所产生的FⅧ分子结构缺陷或致FⅧ含量减少,临床表现为程度不同的出血。鉴于本疾病的特殊性,在获取细胞用于iPS诱导时应尽量减少创伤性。本... 详细信息

血友病A （Hemophilia A,HA）是一种X连锁隐性遗传病,男性患者具有一条含突变基因的X染色体,导致所产生的FⅧ分子结构缺陷或致FⅧ含量减少,临床表现为程度不同的出血。鉴于本疾病的特殊性,在获取细胞用于iPS诱导时应尽量减少创伤性。本研究成功以尿液中的尿液细胞为起始细胞诱导出HA病人特异性iPS细胞,此iPS细胞能定向分化为内皮细胞,为以后的细胞及基因治疗提供了一定基础。除此之外,本研究还对非病毒方法诱导iPS细胞进行了初步探索,以提高基因治疗安全性。第一部分：血友病A病人特异性iPS细胞的诱导及鉴定目的;通过逆转录病毒的方法诱导一株1号内含子倒位和一株14号外显子点突变的HA病人特异性iPS细胞以及其内皮细胞分化潜力的验证。方法：（1）从血友病A患者的尿液中分离培养尿液细胞;（2）使用携带四种转录因子Oct4,Sox2,c-Myc和K1f4的逆转录病毒感染HA患者尿液细胞中,最终诱导出HA患者特异性的iPS细胞;（3）通过细胞形态学、碱性磷酸酶染色、干细胞表面多潜能标志物染色、细胞核型检测以及畸胎瘤体内三胚层分化对所得到的iPS细胞进行鉴定;（4）通过与小鼠OP9细胞共培养的方法将iPS细胞定向分化为内皮细胞。结果：（1）成功从患者尿液中分离出尿液细胞,并可以传代培养;（2）成功诱导出两株HA病人特异性iPS细胞并证明诱导出的iPS细胞能够表达干细胞表面多潜能标志物,并可以在裸鼠体内以形成畸胎瘤的形式向三胚层分化;（3）成功将iPS细胞诱导为内皮细胞,为以后HA的细胞治疗提供基础。结论：血友病A病人特异性iPS细胞可以由尿液细胞重编程而得到,并且可以定向分化为内皮细胞。第二部分：非病毒方法诱导iPS细胞的初步探索目的：尝试建立通过核转游离型载体的方式从尿液细胞中诱导iPS细胞的方法。方法：（1）从HA患者的尿液中分离培养尿液细胞;（2）利用核转的方法将含有编码多种因子的oriP/EBNA1游离型载体的不同组合导入尿液细胞中,观察细胞变化;（3）对诱导出来的细胞进行鉴定。结果：（1）初步筛选出了核转时最优的游离型质粒组合、最佳核转程序以及最佳培养基;（2）在诱导过程中出现了形态极其类似iPS细胞的克隆,但在后续的培养过程中发生了分化;（3）分化的细胞表现出神经细胞系样,经免疫荧光鉴定为神经细胞。结论：用过核转oriP/EBNA1游离型载体的方法可以诱导尿液细胞产生重编程,但是很容易分化成神经细胞。

关键词：尿液细胞血友病A 诱导多潜能干细胞内皮细胞分化非病毒方法诱导基因治疗安全性

MELAS综合征的尿液细胞呼吸链酶染色改变一例

同方学位论文库评论

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同方学位论文库

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中华医学杂志 2011年第14期91卷 1007-1008页

作者：吴海荣马祎楠戚豫北京大学第一医院中心实验室 100034

患儿男,12岁,身高130 cm,体重25 kg.因间断无热抽搐1个月于2010年10月收入我院.抽搐均于白天清醒时出现.表现为双眼斜视、吐沫、左侧肢体发直抽动.呼之不应,持续5～10 min,缓解之后疲乏,醒后反应停,其中1次伴尿失禁.一般情况：平时精神... 详细信息

患儿男,12岁,身高130 cm,体重25 kg.因间断无热抽搐1个月于2010年10月收入我院.抽搐均于白天清醒时出现.表现为双眼斜视、吐沫、左侧肢体发直抽动.呼之不应,持续5～10 min,缓解之后疲乏,醒后反应停,其中1次伴尿失禁.一般情况：平时精神反应尚好,易疲劳,不爱活动.新生儿状况：足月顺产,生后无窒息,新生儿期体健.发育状况：2个月可抬头,6个月可独坐,从小发育正常.

关键词： MELAS综合征尿液细胞酶染色呼吸链发育状况新生儿期精神反应足月顺产

尿沉渣定量分析仪与干化学检测尿液细胞的临床应用评价

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中外医学研究 2017年第6期15卷 45-47页

作者：何林璞余喜然刘丽娜三明市第一医院福建三明365000

目的:回顾性分析尿沉渣定量分析仪与干化学检测法在尿液细胞检测中的应用效能。方法:选取笔者所在医院2015年1月-2016年4月收集的600份尿液样本作为本文检测标本,分别采用尿沉渣定量分析仪和干化学分析法检测尿液标本中的白细胞和红细胞... 详细信息

目的:回顾性分析尿沉渣定量分析仪与干化学检测法在尿液细胞检测中的应用效能。方法:选取笔者所在医院2015年1月-2016年4月收集的600份尿液样本作为本文检测标本,分别采用尿沉渣定量分析仪和干化学分析法检测尿液标本中的白细胞和红细胞,以尿沉渣离心镜检法结果作为金标准,统计分析两种不同检测方法的准确度、灵敏度、检测阳性率和特异性。结果:尿沉渣定量分析法和干化学分析法检测尿液标本中白细胞和红细胞的阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。尿沉渣定量分析法和干化学分析法的准确度、灵敏度和特异性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两种检测方法联合应用准确度、特异性及灵敏度均高于两种方法单独检测(P尿液细胞两种不同检测方法各有优缺点,两者联合应用可提高检测准确度和灵敏度,减少检测误差和提高检测效率。

关键词：尿沉渣定量分析仪干化学分析法尿液细胞应用

尿沉渣定量分析仪联合尿干化学分析仪在尿液细胞检测中应用研究

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中国实用医药 2017年第12期12卷 29-31页

作者：王鸿雁北京门头沟区中医医院 102300

目的探讨尿沉渣定量分析仪联合尿干化学分析仪在尿液细胞检测中的应用价值。方法 500例住院患者,采用sysmex UF-500i、AX4030和离心沉渣镜检对尿液标本进行检测,以沉渣镜检结果为金标准,分析sysmex UF-500i、AX4030在尿液细胞检测中的... 详细信息

目的探讨尿沉渣定量分析仪联合尿干化学分析仪在尿液细胞检测中的应用价值。方法 500例住院患者,采用sysmex UF-500i、AX4030和离心沉渣镜检对尿液标本进行检测,以沉渣镜检结果为金标准,分析sysmex UF-500i、AX4030在尿液细胞检测中的诊断价值。结果三种检测方法阳性检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。sysmex UF-500i检测白细胞(WBC)的特异度、敏感度和准确度分别为86.96%、80.65%和85.00%;AX4030检测WBC的特异度、敏感度和准确度分别为87.25%、80.00%和85.00%;sysmex UF-500i检测红细胞(RBC)的特异度、敏感度和准确度分别为91.78%、79.59%和88.20%;AX4030检测RBC的特异度、敏感度和准确度分别为92.07%、80.27%和88.60%;sysmex UF-500i+AX4030检测WBC的特异度、敏感度和准确度分别为95.65%、90.32%和94.00%;sysmex UF-500i+AX4030检测RBC的特异度、敏感度和准确度分别为97.17%、93.20%和96.00%。sysmex UF-500i和AX4030联合检测的特异度、敏感度和准确度明显高于单一sysmex UF-500i或AX4030检测,差异有统计学意义(P尿液细胞检测中能显著提高特异度、敏感度和准确度,为临床诊断和治疗提供可靠的依据。

关键词：尿沉渣定量分析仪尿干化学分析仪尿液细胞

苯丙酮尿症尿液来源非整合诱导多能干细胞建系及拟胚体成骨分化

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苯丙酮尿症尿液来源非整合诱导多能干细胞建系及拟胚体成骨分化

作者：齐自娟济南大学

学位级别：硕士

背景:诱导多能干细胞的生物特性为疾病研究开启了新的思路和方法。该细胞具有强大自我更新能力,生长迅速,能定向分化为特定组织,可以提供不同分化阶段细胞,为研究疾病不同程度、不同阶段提供研究目标。经由患者体细胞重编程的iPSCs,具... 详细信息

背景:诱导多能干细胞的生物特性为疾病研究开启了新的思路和方法。该细胞具有强大自我更新能力,生长迅速,能定向分化为特定组织,可以提供不同分化阶段细胞,为研究疾病不同程度、不同阶段提供研究目标。经由患者体细胞重编程的iPSCs,具有个体特异性。因为能完全携带相关疾病的致病基因和个体特定遗传背景,对于对于苯丙酮尿症,特纳综合征等罕见疾病筛选疾病不同亚型药物和研究疾病致病机制等具有重要意义。目的:建立尿源诱导多能干细胞获得与鉴定方法;获取苯丙酮尿症患者尿源诱导多能干细胞并鉴定其多能性;建立诱导多能干细胞拟胚体成骨诱导模型;比较特纳综合征患者与正常人诱导多能干细胞成骨成骨差异。方法:获取正常人与苯丙酮尿症患者尿液细胞,培养扩增后通过电转将含有转录因子的非整合质粒导入细胞中诱导培养,纯化获取诱导多能干细胞;通过碱性磷酸酶染色,实时定量检测多能性基因表达,外源基因插入鉴定,核型鉴定,启动子甲基化,流式细胞术等多个实验分别鉴定正常组与疾病组患者iPSCs的多能性;通过将iPSCs诱导成为拟胚体,加入成骨培养基诱导成骨并初步比较特纳综合征患者与正常人诱导多能干细胞二者成骨差异。结果:获取到正常人与苯丙酮尿症患者尿液细胞电转并纯化多株诱导多能干细胞;通过碱性磷酸酶染色,实时定量检测多能性基因表达,核型鉴定等多个实验证明正常组与疾病组患者iPSCs具有多能性;通过将iPSCs诱导成骨,茜素红染色显示有大量矿化结节产生,实时定量显示成骨基因高表达;将特纳综合征患者与正常人诱导多能干细胞成骨诱导后进行茜素红染色,实时定量初步比较,显示二者成骨表达无差异。结论:掌握了获取尿源诱导多能干细胞非整合、无血清、无饲养层细胞重编程培养方法;获取了正常人和苯丙酮尿症患者尿源非整合诱导多能干细胞,为后续疾病研究提供了研究材料,推动苯丙酮尿症药物靶点和致病机制研究;建立了通过诱导拟胚体来获得成骨细胞的方法,比较特纳综合征患者与正常人诱导多能干细胞成骨诱导,证明特纳综合征患者成骨无异常,骨质疏松,关节炎等并发症可能由于破骨异常或者激素水平等引起。

关键词：尿液细胞诱导多能干细胞苯丙酮尿症干细胞成骨诱导