检索结果-南通市图书馆

作者：寇正清华大学

学位级别：硕士

绿藻衣藻是一种被广泛研究的模式生物，可以用来作为研究脂质代谢的模型。本论文利用尼罗红为染料建立了一套针对衣藻特异染色并快速简便检测细胞中性脂的方法。尼罗红是一种脂质特异性的荧光染料，利用其对细胞中性脂染色并检测染色后... 详细信息

绿藻衣藻是一种被广泛研究的模式生物，可以用来作为研究脂质代谢的模型。本论文利用尼罗红为染料建立了一套针对衣藻特异染色并快速简便检测细胞中性脂的方法。尼罗红是一种脂质特异性的荧光染料，利用其对细胞中性脂染色并检测染色后的荧光强度的方法已被广泛应用于包括微藻在内的多种细胞中。本论文建立了针对衣藻细胞的尼罗红染色方法，并通过此染色方法检测细胞中中性脂含量并进行衣藻油脂突变体大规模的筛选。含脂滴的衣藻细胞生长在缺氮培养基中，利用96孔板和酶标仪检测染色后细胞的荧光强度对细胞中性脂质定量。通过对激发光谱和发射光谱的扫描，我们得到优化的最适激发波长和发射波长分别为528nm和576nm。尼罗红溶剂的种类和浓度、尼罗红浓度和染色时间等影响因素都进行了优化，得到尼罗红使用的溶剂为DMSO，其使用终浓度为5%，染色时间为5到15分钟，尼罗红的使用浓度为1μg/mL，此浓度可以对1×10～6cells/mL到8×10～6cells/mL的细胞进行染色。荧光检测法可以对衣藻细胞中性脂含量进行检测，尼罗红染色后被激发的荧光强度分别通过标准法和标准加入法估测细胞内的中性脂含量。三油酸甘油被用来作为中性脂定量的光谱法和总脂提取后薄层色谱时的标准物。光谱法和传统方法对中性脂的差异不明显。与此同时，我们利用尼罗红染色法建立了一个大通量筛选脂质含量异常突变体的方法。两个不同的模拟实验证实了利用染色细胞的荧光强度和吸光度进行突变体的筛选可行性，并筛选到多个与野生型细胞相比脂滴不同的突变体。综上所述，本论文利用尼罗红为衣藻细胞染色，对细胞内部中性脂定量并能进行突变体的筛选，其方法简便有效，为研究模式生物衣藻中生物脂质代谢的提供基础。

关键词：衣藻尼罗红生物柴油荧光强度脂质

增强型荧光探针的设计及在硫化氢和pH检测方面的应用

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增强型荧光探针的设计及在硫化氢和pH检测方面的应用

作者：李红玲辽宁大学

学位级别：硕士

近年来,由于荧光探针在检测和标记方面应用的日趋成熟,使其成为科学探究的重要手段,在很多领域都展示出了广阔的应用前景,如环保、化工、食品、生物学、医学等。目前绝大多数荧光探针具有提供定量检测信息的特征,但不具有特异的靶向性... 详细信息

近年来,由于荧光探针在检测和标记方面应用的日趋成熟,使其成为科学探究的重要手段,在很多领域都展示出了广阔的应用前景,如环保、化工、食品、生物学、医学等。目前绝大多数荧光探针具有提供定量检测信息的特征,但不具有特异的靶向性。这不能满足人们对某些生理过程进行深入观测的研究。所以,急需研发具有定位功能的荧光探针。本论文从尼罗红、荧光素两种发色团出发,通过引入其他的结构单元,对其结构自身进行修饰,发掘新特性的同时也能弥补一些自身的缺点。本文合成了种增强型荧光探针NRS,它能够在与硫化氢作用后,产生强烈荧光,并且能够定位于线粒体。基于光诱导电子转移(PET)机理,将吸电子的2,4-二硝基苯结构单元引入母体尼罗红衍生物9-Dimethylamino-2-hydroxy-5H-benzo[a] phenoxazin-5-one)上,构建了荧光探针NRS。探针NRS表现了优异的特性;NRS可以快速对硫化氢做出响应,在相同条件下,有其他阴阳离子、活性氧、活性氮等物种的存在干扰下,探针NRS依然能对硫化氢产生专一的响应,表明探针NRS对硫化氢的这种响应是具有很高的选择性的。通过对细胞进行染色实验,发现在细胞的线粒体里出现荧光,说明探针NRS能够进入到细胞内部,具有细胞膜的透过性。与Rh123进行共定位成像进一步说明探针NRS能够定位于细胞的线粒体。本文第二部分合成了一种线粒体靶向型pH荧光探针FDI。探针FDI能够快速的定位于线粒体中,且该探针具有较长的荧光发射光谱(650-750nm)、有pH响应范围宽、响应快速的特点。FDI对于pH值的响应,可以很直观的体现在颜色的变化上,不同pH下的探针FDI溶液颜色有明显差异。进行了光稳定性实验,结果表明,探针FDI光稳定性很好,光照下也不易分解。荧光共聚焦显微成像实验也说明探针FDI有较好的溶解性和生物兼容性,表明这类探针具有较好的细胞通透性。

关键词：荧光探针尼罗红荧光素硫化氢 pH

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利用微藻油脂制备生物柴油的研究

利用微藻油脂制备生物柴油的研究

作者：朱斌斌华中科技大学

学位级别：硕士

本研究旨在开发一种富含油脂的微藻资源来制备生物柴油。随着社会的高速发展,对能源的需求也越来越大。化石能源的大量使用还造成了对环境的巨大污染。生物柴油作为一种环保的可再生能源,是化石燃料的最佳替代品,由此,吸引了很多人对其... 详细信息

本研究旨在开发一种富含油脂的微藻资源来制备生物柴油。随着社会的高速发展,对能源的需求也越来越大。化石能源的大量使用还造成了对环境的巨大污染。生物柴油作为一种环保的可再生能源,是化石燃料的最佳替代品,由此,吸引了很多人对其的研究。微藻因其生长迅速,油脂含量高,被认为是制备生物柴油的理想原料。本文对武汉周边各个不同地点,不同季节进行了采样,并对其中自然状态下的藻类进行富集培养、分离与纯化。采用毛细管分离法、稀释平板分离法、平板划线分离法三种不同方法,最终分离纯化出36株单细胞藻类,其中有24种绿藻和12种硅藻。利用脂肪荧光染料尼罗红,对微藻细胞内的脂肪进行染色。用波长480nm的光激发,会发出波长在52080nm的黄绿光。为用荧光光谱仪快速判断出各种藻类的脂肪含量,提供了简单、有效的方法,也节省了大量的时间与工作。分析国内外现有的藻类大规模养殖方法和各种环境因素对微藻生长和脂肪含量的影响,在实验室中实施了对已有的一种硅藻的小规模养殖。并用索氏提取法对养殖所收集到得藻细胞进行脂肪的粗提,结合荧光方法,得到各种藻类的准确脂肪含量。最后,对实验的工作给予总结,并且分析研究所带来的成果和经验,对实验的前景做出分析。

关键词：生物柴油微藻油脂分离与纯化尼罗红

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富油微藻的筛选及其培养条件的优化研究

富油微藻的筛选及其培养条件的优化研究

作者：王俊彩中国海洋大学

学位级别：硕士

随着全球工业的快速发展，人们对能源的需求也持续增长。然而，由于化石能源的有限性，人们不得不寻找其他替代性能源。生物柴油是以生物体油脂为原料，通过水解、酯化而得到的脂肪酸甲酯或乙酯，是一种可以替代普通化石柴油的环保、可... 详细信息

随着全球工业的快速发展，人们对能源的需求也持续增长。然而，由于化石能源的有限性，人们不得不寻找其他替代性能源。生物柴油是以生物体油脂为原料，通过水解、酯化而得到的脂肪酸甲酯或乙酯，是一种可以替代普通化石柴油的环保、可再生能源。本研究从筛选富油微藻出发，从海水中筛选出1株小球藻和1株盒形藻两种富油微藻，以f/2培养基为基础，分别探讨两种微藻在单一因素改变的条件下(即pH、N、Si、Mg、Fe或Zn改变，其他营养元素按f/2培养基添加)，微藻生长及油脂含量变化情况;并采用尼罗红(NileRed)荧光染色法对各环境因子条件下小球藻细胞内油脂积累状况进行动态监测，进而确定其最优培养条件。在pH值6.5.5的范围内，小球藻的生长及油脂含量变化不明显。在NO浓度为3.0mmol/L时，小球藻生物量最高;在NO浓度为0.6mmol/L的培养条件下，小球藻油脂积累比其他条件更具优势。在Mg浓度为0.6.8mmol/L的范围内，对小球藻的生长影响较小。Fe对小球藻的生长及油脂积累都有较大的影响，高浓度的Fe能促进小球藻的生长及油脂含量的积累。在一定范围内，较高的Zn浓度能够显著抑制小球藻的生长和油脂的积累，而低浓度(2.4μmol/L)的Zn则促进小球藻的生长和体内油脂的积累。在NO浓度为4.8mmol/L时，盒形藻体内油脂含量较高。NO浓度为0.3mmol/L时，盒形藻在培养的第12天油脂含量达到最高值。在pH值为8时，盒形藻的生长达到最佳状态。pH值为6时，盒形藻体内的油脂积累达到最佳状态。较高的Fe浓度可以促进盒形藻的生长。在Fe浓度为0.01～100μmol/L的范围内，同一生长时期的盒形藻油脂含量相差不大。在Mg浓度为3.0mmol/L的条件下，盒形藻的生长状况最好。不同Mg浓度对盒形藻体内的油脂含量影响较小。在Zn浓度为1.74μmol/L的条件下，盒形藻的生长状况和油脂积累状况最佳。在Si浓度0～0.56mmol/L的范围内，盒形藻的生长状况随着Si浓度的增加而变差。在培养的第11～13天，Si0.07mmol/L的浓度梯度下的盒形藻油脂积累达到最佳状态。通过正交试验，分别选取硝氮、Fe和Zn以及pH值、Si和Fe的浓度三个影响因子分别对小球藻和盒形藻产油条件进行优化。研究表明，小球藻的最优培养条件为：Mg浓度为0.9mmol/L，Fe浓度为12μmol/L，Zn浓度为7.2μmol/L，NO浓度为0.3mmol/L，培养基初始pH值为8.5。盒形藻的最优培养条件为：Si浓度为0.07mmol/L，Mg浓度为0.5mmol/L，Fe浓度为100μmol/L，Zn浓度为1.74μmol/L，NO浓度为0.3mmol/L，培养基初始pH值为9。

关键词：生物柴油富油微藻环境因子尼罗红正交试验

海洋富油微藻球等鞭金藻（Isochrysis galbana）CCMM5001的优化培养

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海洋富油微藻球等鞭金藻（Isochrysis galbana）CCMM5001的优化培...

作者：张帆中国海洋大学

学位级别：硕士

为了应对日益严峻的能源和环境问题,生物柴油越来越受到各国研究者的关注。微藻油脂的主要成分为甘油三酸酯,是一种理想的生物柴油原料。由于微藻具有不争耕地与淡水资源,不影响粮食安全,生长迅速且不受季节影响等优势而倍受青睐。然而... 详细信息

为了应对日益严峻的能源和环境问题,生物柴油越来越受到各国研究者的关注。微藻油脂的主要成分为甘油三酸酯,是一种理想的生物柴油原料。由于微藻具有不争耕地与淡水资源,不影响粮食安全,生长迅速且不受季节影响等优势而倍受青睐。然而由于成本的居高不下,微藻生物柴油一直没能进行大规模商业化生产。在制备微藻生物柴油过程中,富油微藻的培养是最为基础的一个环节,选育含油量高、生物量产量大、培养成本低的富油微藻是目前研究的热点问题。本文选择一株富油微藻,球等鞭金藻（Isochrysis galbana）CCMM5001,对其异养生长的条件和可行性,粗脂含量的快速测定方法以及生长过程中环境因子的影响等作了一系列研究。首先研究了四种不同碳源葡萄糖、果糖、乙酸钠和甘油对球等鞭金藻CCMM5001异养生长的影响。结果表明,球等鞭金藻CCMM5001对碳源具有选择性,果糖对其异养生长促进效果最好,其次为葡萄糖,再者乙酸钠,甘油最差。果糖在50mM浓度时促进异养生长的效果好于5mM浓度时;葡萄糖、乙酸钠和甘油则相反。综合考虑异养效果和经济因素,研究不同浓度的葡萄糖、光照强度以及通气水平对球等鞭金藻CCMM5001异养生长的影响。结果表明,球等鞭金藻CCMM5001利用葡萄糖异养生长的最佳浓度为2g/L,低于或高于2g/L时,最高细胞密度均有所下降;生长能力正常光照下高于弱光条件,非通气培养高于通气培养,其异养生长能力低于光合自养生长能力。分析了粗脂含量和尼罗红染色荧光强度的关系。球等鞭金藻CCMM5001细胞中累积的脂类物质为中性脂,被尼罗红染色后发金黄色荧光,在480nm激发波长时,脂的发射峰为575nm,其荧光强度与总脂含量线性相关。根据线性相关曲线,建立了利用尼罗红染色配合荧光分光光度计快速测定球等鞭金藻CCMM5001细胞粗脂含量的方法。分析了球等鞭金藻CCMM5001细胞密度与TD-700叶绿素荧光仪测定的活体荧光值之间的关系,确定两者的线性相关曲线。建立通过测定活体荧光值快速测定细胞密度的方法,以表示其生长情况。设计不同的温度、盐度、光照强度和初始pH梯度,并以温度和盐度、光照强度和初始pH分别作为双因子进行正交试验。结果表明,球等鞭金藻CCMM5001生长的适宜温度为18～36℃,最适温度为24℃;适宜盐度为12～38,最适盐度为24;适光范围为2000lux000lux,饱和光强为3500lux;适宜初始pH范围4.8～8.8,最适pH范围6.8～7.8。在温度24℃,盐度24,光照强度3500lux,初始pH7.8的条件下培养,第15天可以得到最高细胞密度值7.24×10～6 cells/ml,为基础培养条件下细胞密度的1.08倍,培养周期缩短14天。其中,温度和盐度的双因子正交试验进一步表明,球等鞭金藻CCMM5001对高温高盐条件有一定耐受力,随着温度上升,高盐组的生长逐渐占优势。在温度为36℃,盐度为38时,最高细胞密度可达到3.90×10～6 cells/ml,高于相同温度下其他盐度组。

关键词：富油微藻球等鞭金藻异养培养尼罗红环境因子

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生物硫醇荧光探针的设计、合成及生物学评价

生物硫醇荧光探针的设计、合成及生物学评价

作者：荣向华南理工大学

学位级别：硕士

生物硫醇和小分子HS对人体的生理过程有着重要的影响,如果它们在人体内的浓度异常,会导致多种疾病。荧光探针方法在检测生物活性硫醇和小分子HS方面具有简便快捷,实时跟踪等优点,是分析检测生物活性硫醇和小分子HS的重要方法。本论文在... 详细信息

生物硫醇和小分子HS对人体的生理过程有着重要的影响,如果它们在人体内的浓度异常,会导致多种疾病。荧光探针方法在检测生物活性硫醇和小分子HS方面具有简便快捷,实时跟踪等优点,是分析检测生物活性硫醇和小分子HS的重要方法。本论文在课题组前期合成的化合物以及调研的文献基础上,设计合成了4个用于相应生物硫醇和小分子HS的荧光探针,并对探针进行光学性质的研究和生物学评价:(1)通过对二腈基异氟尔酮的结构进行修饰改造,设计合成了中间体DM和生物硫醇荧光探针DM-SH。考察了两个化合物结构与光谱性质的关系,探针DM-SH本身无荧光,当与生物硫醇或HS结构中的巯基发生亲核取代反应后,生成的中间体DM在近红外区发射出红色荧光,其发射波长为665 nm。另外,利用高分辨质谱和理论计算验证了探针与硫醇响应的机理。该探针对生物硫醇检出限低,能在模拟的生理环境中有效地检测出生物硫醇。探针DM-SH细胞毒性较小,通过细胞成像实验表明,该探针能够实时检测细胞内的生物硫醇。(2)基于二腈基异氟尔酮的结构,设计合成了互为同分异构体的中间体TH-3和TH-4以及互为同分异构体的生物硫醇荧光探针TH-1和TH-2,并对其进行了光谱性质研究。中间体TH-3和TH-4在中性和碱性p H环境下表现出双荧光发射,而探针TH-1和TH-2在模拟生理条件中与Cys/Hcy反应后既表现出比率型变化(绿光区),又表现出增强型变化(近红外光区),属于新型双波段荧光探针。探针TH-1和TH-2对Cys/Hcy有高选择性和高灵敏性,可以作为检测Cys/Hcy的分析工具。(3)通过对尼罗红染料的结构进行修饰改造,设计合成了中间体NR和荧光探针NR-SH。探针NR-SH本身几乎不产生荧光,当遇到生物硫醇和HS时,探针产生显著的长波长荧光。探针NR-SH对硫醇的响应速度不同,同等条件下探针能够快速识别HS,而生物硫醇测需要孵育较长时间。通过细胞成像实验表明,探针NR-SH可以实时检测细胞内的硫醇,为机体内硫醇的检测提供了参考。

关键词：荧光探针生物硫醇异氟尔酮尼罗红理论计算

基于SiO2纳米粒的指纹显现及对指纹中DNA STR分型的影响

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基于SiO2纳米粒的指纹显现及对指纹中DNA STR分型的影响

作者：王文静天津大学

学位级别：硕士

指纹形貌不仅具有极强的个体识别特异性,其中所含有的DNA也是当今刑事侦查领域最重要的物证之一,因此刑事现场或物证上的指纹显现与DNA提取一直是刑事侦查领域亟待解决的重要课题。不同的物证基材具有不同的指纹显现困难,其中热敏纸是... 详细信息

指纹形貌不仅具有极强的个体识别特异性,其中所含有的DNA也是当今刑事侦查领域最重要的物证之一,因此刑事现场或物证上的指纹显现与DNA提取一直是刑事侦查领域亟待解决的重要课题。不同的物证基材具有不同的指纹显现困难,其中热敏纸是一种生活中经常遇到的特殊用纸,特别是被水浸泡过的热敏纸经常成为刑事物证,因此其上负载的指纹图案的良好显现具有重要的意义。本课题制备了介孔二氧化硅纳米颗粒(Mesoporous silica nanoparticles,MSNs)负载亲脂性染料尼罗红并制成稳定的悬液,考察了该悬液对热敏纸潜指纹的显现效果,结果表明该方法不仅对热敏纸潜指纹显现效果良好。而且对于不同类型的基质材料及不同的志愿者指纹均可清晰显现。此外,经与现有的尼罗红和油红甲醇水溶液方法相比,不仅指纹形貌显现效果更好,而且还能完好地保留热敏纸上的文字信息。指纹形貌与DNA的同步获取是目前一线刑侦人员的技术难点,日常工作中经常顾此失彼。本课题开发了一种可以同时进行指纹转移显现及DNA采集的方法,即利用胶带对指纹进行粘取,同时也将可能存在于指纹中的DNA粘取固定于胶带上,再利用SiO纳米粒悬浮液对指纹进行显现,然后将该显影后的胶带用于DNA提取、STR分型研究。实验证明该方法显现的胶带指纹形貌清晰,显现后对DNA的提取纯化没有显著影响,依然可以得到较好的STR分型结果。在不同基质材料及不平整表面的指纹提取中均得到了较好的结果。该方法操作材料廉价易得,操作流程简单,具有良好的应用前景。

关键词： SiO2纳米粒指纹热敏纸尼罗红 DNA采集

流式细胞仪在测定废纸浆中微细胶黏物含量的应用研究

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流式细胞仪在测定废纸浆中微细胶黏物含量的应用研究

作者：张新莉天津科技大学

学位级别：硕士

废纸作为一种非常重要的制浆造纸纤维原料,其再生与利用有很多优点。但是通常废纸再生利用过程中不可避免地会遇到胶黏物问题。由于胶黏物来源广泛,成分复杂,用一般的手段很难检测出其组成及性质,目前存在的大部分测定微细胶黏物的方法... 详细信息

废纸作为一种非常重要的制浆造纸纤维原料,其再生与利用有很多优点。但是通常废纸再生利用过程中不可避免地会遇到胶黏物问题。由于胶黏物来源广泛,成分复杂,用一般的手段很难检测出其组成及性质,目前存在的大部分测定微细胶黏物的方法如抽提法、沉积法、密度法、筛选法、吸附法等,普遍耗时偏长,操作过程复杂,因此不能很好地适应实际的生产。近几年,流式细胞仪作为一种快速高效的检测手段逐渐应用于胶黏物检测领域。本文结合已有的研究成果,探究了流式细胞仪检测废纸中胶黏物所用到的染色剂的选择吸附性及其吸附机理,并就实际情况提出了一些注意事项和解决方案;通过流式细胞仪建立废纸浆白水中微细胶黏物的粒径分布,并探究公式以计算白水中微细胶黏物的质量;结合实际胶黏物控制手段验证公式的准确性。首先,通过用Nile Red染色剂分别对废纸浆白水、自来水(模拟造纸用水)、苯醇抽提后漂白浆的白水、酶处理之后的白水进行染色,随后用流式细胞仪检测分析,探究Nile Red染色剂的选择吸附性,通过电导滴定和颗粒电荷测定仪研究其反应机理。结果表明:Nile Red对除胶黏物以外的其他物质也有染色效果。Nile Red的染色机理为,由于Nile Red结构中含有二乙胺基,二乙胺基的N原子含有一对孤对电子,结合水电离出的H+形成带正电荷的状态,从而能够与带负电的物质结合。而胶黏物酯键中的羰基是一种吸电子基团,呈现较大的电负性,因此二者可通过正负电荷间的静电引力作用吸附而染色。自来水中由于存在硫酸根和硝酸根等负离子,也可以与Nile Red由于静电引力作用而吸附染色。细小纤维由于其表面羧基电离形成表面负电荷,也可与Nile Red由于静电引力作用而吸附染色。得到实验室检测微细胶黏物颗粒浓度的结果校正系数为85%。其次,通过使用标准微球来确定颗粒粒径与流式细胞仪中FSC光强的关系,得到粒径与光强的标准曲线和粒径分布,探究公式计算白水中微细胶黏物的质量。结果表明:粒径与FSC光强的标准曲线为y=0.0013x+2.2132,R2为0.9922。白水中胶黏物质量(默认胶黏物为球形)为M=m*n=4/3πaρR3n。通过计算得到实验室制备的OCC和ONP的白水中微细胶黏物含量为0.350 g/L和0.264 g/L。最后,通过现在工厂常用的胶黏物控制方法,验证流式细胞仪检测微细胶黏物控制效果的准确性。结果表明:通过流式细胞仪检测与CD值、浊度和粒径检测结果一致。检测三种分散剂控制微细胶黏物,其中分散剂3号效果最好。

关键词：流式细胞仪尼罗红微细胶黏物吸附机理

海南微藻种质资源收集、鉴定及高含油量微藻的筛选

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海南微藻种质资源收集、鉴定及高含油量微藻的筛选

作者：马帅海南大学

学位级别：硕士

随着矿物能源消耗和全球气候问题的日益严重,研究、开发和利用可再生能源是人类社会、经济发展的大势所趋。生物质能作为可再生能源的重要组成部分,越来越受到世界各国的重视。微藻是一种具有光合作用效率高、环境适应能力强、油脂含量... 详细信息

随着矿物能源消耗和全球气候问题的日益严重,研究、开发和利用可再生能源是人类社会、经济发展的大势所趋。生物质能作为可再生能源的重要组成部分,越来越受到世界各国的重视。微藻是一种具有光合作用效率高、环境适应能力强、油脂含量高、生物量大、生长周期短、易培养等众多优点的新型生物质能源。海南省全年暖热,雨量充沛,水域资源丰富,海域广阔,藻类资源极为丰富,具有很大的潜在价值。本研究旨在通过试验,收集得到一些海南特有的藻类资源,以丰富我国的藻类资源,建立一套筛选有较大研究价值、经济价值微藻的有效方法,并筛选高生物量、含油量藻株,建立能源微藻核心种质资源。为藻类的开发利用、生物质能源的深入研究奠定基础。采用水滴法、稀释法、平板法等3种微藻的分离方法,对11个采样点的样品进行藻株的分离、纯化,得到87株微藻,其中海水藻34株,淡水藻53株。并对分离得到的部分微藻进行细胞形态学鉴定,初步鉴定了盘星藻(Pediastrum biraditum)、二形栅藻(Scenedesmus dimorphus)、小空星藻(Coelastrum microporum)等10余个不同的藻种。对编号DWZ-8的藻株进行了较深入的研究,发现DWZ-8以似亲孢子生殖方式繁殖,叶绿体分裂方式属于独特的劈裂式分裂,仅有一个1.4-2.1μm的蛋白核,类囊体呈管状,方向多样,有平行与切面的也有垂直与切面的。采用分子生物学的方法对其进行鉴定发现DWZ-8核编码的18S rDNA长2500个碱基对,含有两个GI内含子,其叶绿体编码的16S rDNA长1488 bp,无内含子;与亲缘关系较近的藻种进行比较,差异均较大。综合分析DWZ-8各方面的鉴定指标均与海南橡胶藻(Heveochlorella hainangensis)最为接近,笔者初步认为DWZ-8为橡胶藻属的一个新种(Heveochlorella species)。本试验通过对与微藻材料Hhw中中性脂尼罗红染色的荧光强度测定相关的各项指标进行梯度试验。得到尼罗红荧光分光光度法测脂的最优条件为：EX 485nm、微藻细胞密度OD690=0.858、DMSO的加入量250μl／ml、染色2min、NR=1.2μg／ml。采用该优化条件对其他微藻进行染色测定其中性脂含量均可行。通过试验比较得到了一种适合实验室使用的从微藻中快速提取粗脂肪的方法,即改良的酸水解法。同时建立了利用尼罗红染色显微观察与直接提取法相结合的筛选高含油量微藻的平台,并筛选得到一些含油量较高的藻株。对2个藻株的脂肪酸成分进行分析发现,橡胶藻脂肪酸较为单纯,主要由亚油酸、油酸、硬脂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、亚麻酸等6种组成。其中不饱和脂肪酸50.4%,16-18碳脂肪酸占脂肪酸总量的96%,适于加工生物柴油;Hhw的脂肪酸主要由亚油酸、油酸、硬脂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、亚麻酸、花生四烯酸、EPA等9种脂肪酸组成不饱和脂肪酸40.58%,16-18碳脂肪酸占脂肪酸总量的86.27%,适于加工生物柴油。

关键词：微藻海南种质资源分离鉴定尼罗红粗脂肪提取脂肪酸成分

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小球藻培养密度与代谢物提取方法的研究

小球藻培养密度与代谢物提取方法的研究

作者：赵旭天津大学

学位级别：硕士

本课题研究了不同接种密度对小球藻生长状况以及细胞形态造成的差异,对小球藻的生长状态进行了测定,同时测定了小球藻中脂肪酸含量及脂肪酸种类随接种密度的变化。并采用气质联用技术,建立了以GC/MS技术为基础的,高通量、高灵敏度的小... 详细信息

本课题研究了不同接种密度对小球藻生长状况以及细胞形态造成的差异,对小球藻的生长状态进行了测定,同时测定了小球藻中脂肪酸含量及脂肪酸种类随接种密度的变化。并采用气质联用技术,建立了以GC/MS技术为基础的,高通量、高灵敏度的小球藻代谢物的分析方法。主要研究成果为:(1)测定了不同接种密度对小球藻生长速度的影响。对文献中常见的浊度法和细胞计数法进行比较,最终确定了采用细胞计数法测定小球藻生长状况,为以后进一步的研究打下了基础。(2)通过正交试验,对尼罗红染色快速检测小球藻脂肪酸含量的方法进行了优化,最终确定尼罗红染色条件为以丙酮为溶剂,在25℃条件下黑暗孵育10min,在550nm下激发,605nm下散射。(3)通过GC/MS对小球藻中脂肪酸的组成进行了分析,发现小球藻中脂肪酸具有高度不饱和性,且单位重量的细胞总脂肪酸含量随着接种密度的升高而先升高后降低。(4)建立了基于GC/MS为基础的,高灵敏高通量的小球藻代谢物提取方法通过比较发现,需要综合考虑几种提取方法加以比较才能最终确定方法,并没有一种提取方法适合小球藻中所有的小分子代谢物。

关键词：小球藻代谢物脂肪酸 GC/MS 尼罗红