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尤溪金柑等柑橘类种质离体保存及其Fc-MLP2基因克隆与表达

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尤溪金柑等柑橘类种质离体保存及其Fc-MLP2基因克隆与表达

作者：金建涛福建农林大学

学位级别：硕士

本试验以尤溪金柑(金弹Fortunella crassifolia cv. Youxijingan)等柑橘类植物试管苗为材料，进行了尤溪金柑再生体系建立与优化、柑橘类植物种质资源保存、尤溪金柑Fc-MLP2基因的克隆表达、Fc-MLP2基因转化烟草及Fc-MLP2基因功能的初... 详细信息

本试验以尤溪金柑(金弹Fortunella crassifolia cv. Youxijingan)等柑橘类植物试管苗为材料，进行了尤溪金柑再生体系建立与优化、柑橘类植物种质资源保存、尤溪金柑Fc-MLP2基因的克隆表达、Fc-MLP2基因转化烟草及Fc-MLP2基因功能的初步鉴定等研究。主要结果如下： 1尤溪金柑再生体系建立及优化本试验优化筛选出了适合尤溪金柑试管苗增殖和生根的培养基。结果表明：KT对芽的增殖有促进作用;NAA和KT共同作用下，处理G2(MS+NAA0.05mg/L+KT1.5mg/L)的芽增殖系数显著高于其它处理;NAA和BA共同作用下，影响芽增殖的主次因素为BA> BA*NAA>NAA，芽增殖的最优培养基为：MS+6-BA1.2mg/L+NAA0.05mg/L，增殖系数最高，达到了10.60;影响生根的主次因素为NAA> IBA> NAA*IBA，生根最优培养基为：MS+NAA0.3mg/L+IBA0.2mg/L，生根率最高达到了83.33%，生根数均值达到了3.27个。 2尤溪金柑等柑橘类植物种质资源保存本试验以尤溪金柑为材料，研究了培养容器、培养基中的CaCl、甘露醇和PP等因素对柑橘种质资源缓慢生长保存的影响。结果表明：当CaCl的浓度为0.22g/L时，尤溪金柑试管苗的根冠比最大，比较适合柑橘种质资源缓慢生长保存;在CaCl、甘露醇和PP共同作用下，分别在保存6个月和12个月时统计试管苗成活率，结果表明：保存6个月和12个月时处理C4(MS+CaCl0.44g/L+甘露醇0g/L+PP1mg/L)中尤溪金柑试管苗的存活率均为最高，分别达到了100%和97.8%。本试验在原有保存3年的67份柑橘种质资源的基础上新收集了25份柑橘种质资源，并对所收集种质资源试管苗的生长状态进行观察记录。结果显示：柚类种质资源试管苗生长比较健壮，根系发达，叶片大而浓绿，但徒长严重，叶片较为稀疏;野生柑橘类试管苗长势普遍较弱，根系和茎杆都较弱，转接继代时还发现，该类试管苗生根能力也很弱;金柑类和宽皮柑橘类试管苗的长势介于柚类和野生柑橘试管苗之间。 3Fc-MLP2基因的克隆与生物信息学分析本试验采用RT-PCR结合RACE技术，第一次以尤溪金柑试管苗为材料，克隆得到尤溪金柑Fc-MLP2基因的全长cDNA序列，其在GenBank中的登录号为JX310276。Fc-MLP2基因全长908bp，含有一个669bp的开放阅读框，编码223个氨基酸。生物信息学分析表明：该蛋白是定位于细胞外的一种疏水性分泌蛋白，具有2个功能位点、13个磷酸化位点和信号肽，其二级结构由α螺旋、β折叠、β转角、无规则卷曲组成。系统进化树分析表明：尤溪金柑Fc-MLP2蛋白与粗皮柠檬RlemMLP2蛋白亲缘关系较近，聚为同一类。推测Fc-MLP2蛋白可能在植物抗虫、抗病原菌、抗饥饿和延缓植物衰老方面起到一定作用。 4尤溪金柑种质资源保存过程中Fc-MLP2基因的定量表达采用qRT-PCR技术，以18S rRNA基因为内参基因，对尤溪金柑试管苗不同保存阶段Fc-MLP2基因的mRNA转录表达进行研究，结果表明：Fc-MLP2基因在尤溪金柑保存过程中各时期都有表达，保存4个月时相对表达量最高;保存0个月和12个月时Fc-MLP2基因表达量很低，12个月时达到最低;保存8个月时Fc-MLP2基因的表达量与保存6个月时又有所增加，之后随着时间的延长Fc-MLP2基因相对表达量逐渐减少;尤溪金柑保存过程中Fc-MLP2基因的相对表达量与保存过程中尤溪金柑的生长状态密切相关，当尤溪金柑的生长活动较活跃、保存过程中有新叶发出时，Fc-MLP2基因的相对表达量较高。 5尤溪金柑Fc-MLP2转化烟草与功能验证本试验通过XbaⅠ和SalⅠ双酶切技术构建pCAMBIA1301-Fc-MLP2表达载体，并转化到农杆菌EHA105中。农杆菌介导法将Fc-MLP2基因导入烟草，潮霉素抗性筛选后对抗性植株进行PCR检测和GUS检测。结果显示：目的基因片段已成功转入到烟草中，转化率为62.22%。低温(4℃)和机械损伤处理转基因烟草，分别在处理后的0、3、6、12、24、48h时取样进行qRT-PCR扩增，检测不同时间段Fc-MLP2基因的表达量变化。结果显示;低温处理后转基因烟草中Fc-MLP2基因相对表达量均显著减少;转基因烟草在受到机械伤害12h后，Fc-MLP2基因相对表达量显著增加。可以推测，Fc-MLP2基因可起到抵御逆境的作用。

关键词：柑橘尤溪金柑离体保存 Fc-MLP2基因 qPCR 遗传转化

福建尤溪金柑RAPD分析及柑桔类种质资源的离体保存研究

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福建尤溪金柑RAPD分析及柑桔类种质资源的离体保存研究

作者：董艳福建农林大学

学位级别：硕士

柑桔属于芸香科(Rutaceae)柑桔亚科(Acrantioideae)柑桔族(Citreae)柑桔亚族(Citrinae)植物,是具有重要经济价值的热带水果。我国是世界柑桔起源中心之一,且有4000年的栽培历史。经过数千年的进化发展,形成了种类繁多、形态复杂而又丰... 详细信息

柑桔属于芸香科(Rutaceae)柑桔亚科(Acrantioideae)柑桔族(Citreae)柑桔亚族(Citrinae)植物,是具有重要经济价值的热带水果。我国是世界柑桔起源中心之一,且有4000年的栽培历史。经过数千年的进化发展,形成了种类繁多、形态复杂而又丰富的柑桔种质资源。福建柑桔种质资源非常丰富,其中国家地理标识产品尤溪金柑,已有370多年的栽培历史,长期以来一直实生繁殖,变异大,资源丰富。鉴于此,本试验首先采用RAPD分子标记对尤溪金柑进行遗传多样性分析,进一步对尤溪金柑资源及福建的主要柑桔种质资源进行离体保存研究,并克隆了早熟金柑试管苗的Mn-SOD基因,为研究柑桔试管苗保存过程中SOD的作用机制奠定基础。主要研究结果如下:1.福建尤溪金柑遗传多样性的RAPD分析本试验采集了122份尤溪金柑的叶片,这122份金柑中包括本实验室与尤溪县良种繁育场合作研究筛选出的20个优株单株及其周围对照株5株(编号为1-120号);另外还有两个母株优株编号分别为121和122号。对这122份金柑资源进行RAPD遗传多样性分析。结果显示,供试材料两两间的相似系数较高,平均高达0.947。这说明供试的122份金柑资源亲缘关系较近。所有材料在Ⅰ(D1=13.5)处可以明显的划分为2组,第一组含有102个单株,第二组含有20个单株。第二组在Ⅱ(D2=10.5)处又可分为两个亚组,第一亚组包括19个单株(在Ⅲ(D3=8.5)处可分为两小组,第一小组包括3个单株,第二小组包括16个单株);第二亚组只分出一个母株。第一组在Ⅳ(D4=4.5)处又可以分为四个小组,第一小组有94个单株,第二和三小组各有两个单株,第四小组包含6个单株。在D1=13.5处划分的第2组中的20个单株均为早熟株系,可知本试验中所选引物可以清楚的区分出金柑的早熟和非早熟性状。在D2=10.5处又可把早熟金柑划分为滑皮和非滑皮两种。总体来看,周围的五株与其母株对比均有大小不等的变异。与周围五株基本无差异的母株编号为97号、91号、1号、49号。与周围五株有微小差异的母株编号为55号、61号、67号、85号、37号、43号、31号和7号。与周围五株有差异较大的母株编号为103号、19号、13号、25号、109号、115号和79号。差异最大的为73号和周围五株。尤溪金柑的遗传多样性是其种质资源多样性的基础,这点充分说明了尤溪金柑的育种潜力巨大。2.柑桔类种质资源试管苗的离体保存研究以柑桔珠心胚为主试材料,接种在未添加任何激素的MS培养基上,光照强度1000Lx,温度25±1℃,光照时间12h/d。详细观察了16种不同材料的生长情况,观察了28份柑桔离体保存试管苗的保存情况。16种试管苗材料在18个月的保存过程中,对于叶片,芦柑从1个月到18个月的叶片数目始终最多;胡柚的叶片数目最少,但是由于苏柑在保存10个月后,叶片有脱落的现象,使得苏柑在保存到第12个月时及之后成为叶片数目最少的一种。总体来看,芦柑、桔类、瓯柑的叶片比较多,金柑类和胡柚的叶片较少。对于主根长,沙糖桔在保存过程中,主根始终最长,芦柑的主根长仅次于沙糖桔;其余各材料在不同阶段根的生长速度有所波动;早熟金柑2号在保存2个月到18个月的时间里主根长度始终最短。总体看,金柑类的主根长度相比其他材料的短。从18个月存活率分析,试管苗的叶片数目与主根长度似乎与存活率没有因果关系。保存最好的为早熟金柑1号、早熟金柑2号和胡柚,18个月的存活率分别为58.3%、61.6%、57.6%,其中苏柑的存活率最差,在15个月时存活率仅为11.9%,18个月时仅为9.8%,看来MS培养基不适合苏柑的保存。很多柑桔品种都能在MS培养基中、不转接不继代的条件下保存很长的时间。如保存至今的广东阳春桔、福州血橙、福桔、重庆红桔这4种材料的保存时间长达51个月,其次为四季桔50个月,福寿桔49个月,而且这些柑桔试管苗仍有继续保存下去的可能。3.早熟金柑试管苗Mn-SOD基因克隆以常温离体保存的早熟金柑试管苗幼嫩叶片为材料,获得早熟金柑试管苗Mn-SOD基因cDNA全长序列(全长共1097bp),并且在GenBank上登录,登录号为:GU233744.1。该Mn-SOD cDNA中5'UTR为66bp,3'UTR为347bp,3′端还含有13个poly(A)尾。与不同物种间Mn-SOD基因同源性比较,同源性都比较高。其开放阅读框(ORF)共有684个碱基组成,编码228个氨基酸,ATG为起始密码子、TAA为终止密码子。蛋白理化性质预测结果显示:早熟金柑试管苗Mn-SOD蛋白的分子量是25159.7Da;理论

关键词：柑桔尤溪金柑 RAPD 离体保存 SOD 基因克隆

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三种不同栽培模式下尤溪金柑的经营效益研究

三种不同栽培模式下尤溪金柑的经营效益研究

作者：陈勋富福建农林大学

学位级别：硕士

金柑,作为我国传统的特产水果,至今已有4000余年的栽培历史。其果实既可鲜食也可加工,果、叶更兼具观赏价值,具有较大的经济效益。福建三明尤溪作为国内金柑的主要产地之一,地理、气候、土壤等资源丰饶、环境优越,其产品目前在国内外市... 详细信息

金柑,作为我国传统的特产水果,至今已有4000余年的栽培历史。其果实既可鲜食也可加工,果、叶更兼具观赏价值,具有较大的经济效益。福建三明尤溪作为国内金柑的主要产地之一,地理、气候、土壤等资源丰饶、环境优越,其产品目前在国内外市场享有美誉。本研究以尤溪金柑为研究对象,通过查阅尤溪县金柑档案资料、调研当地多个金柑栽培合作社、走访当地多名金柑栽培大户,统计金柑传统露地栽培模式、覆膜栽培模式与大棚栽培模式所需的人工成本、资料成本等,对比分析采收金柑果实的品质指标,总结三种栽培模式的效益,旨在运用现代化设施农业技术突破尤溪金柑的栽培瓶颈,完善绿色无公害栽培体系,推动尤溪县金柑产业变革,提高尤溪金柑的质量和产量,促进果农增收,优化尤溪县金柑产业,实现尤溪金柑成为高产、高效、优质、持续的农业样板,带动其他产业的发展,推动尤溪社会经济的综合开发进程。主要研究结果有:（1）尤溪金柑现有三种栽培模式:露地栽培、覆膜栽培、大棚栽培,主要栽培技术包括苗木培育、园地选择、树冠管理、水肥管理、保（疏）花果、修剪更新、防治虫害7个方面。尤溪金柑栽培过程中主要存在的问题有:缺乏产业长远规划、劳动力成本不断提高、配套设施有待强化、栽培技术落后、园区管理不到位、基础建设薄弱、市场有待开拓、业态有待拓展、品牌有待突破。（2）通过统计尤溪金柑三种栽培模式所需投入的农药、肥料、雇工等成本,分析雨害、冻害、旱害对产量的影响,总结金柑错峰上市、不同栽培模式对产值的影响,研究不同栽培模式可能带来的其他附加效益,得出:大棚栽培模式的投入成本虽高于其他两种栽培模式,但大棚栽培在防范雨害和冻害方面具有明显优势,保证高产稳产,实现树上保鲜、错峰上市,有效避免价格战;并且可以采用标准化建设来提升金柑品质及销售价格,从而增加金柑产值;还可以探索发展金柑文化旅游,增加额外经济效益。总的来说,采用大棚栽培将更有利于尤溪金柑产业的发展。（3）深入分析研究金柑大棚栽培模式现状及存在建设成本高、果农认识不足,地理条件差、全面推广受限,管理水平低、效益难以突破的问题,并有针对性地提出强化宣传引导、增强政策扶持和强化果农培训的推广对策。（4）推进尤溪金柑产业健康发展的建议有:调整优化栽培结构和产业布局、建立规范栽培管理和品质保障、策划推进品牌宣传和市场营销。

关键词：尤溪金柑栽培模式大棚栽培效益分析

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尤溪金柑高产优质栽培技术

南方农业 2010年第4期4卷 11-13页

作者：张宏梓郑生洲王守吉詹桂尧陈翾福建省尤溪县林业科技推广中心 365114 福建省尤溪县林业局 365100

通过金柑产区多年的试验研究,提出金柑高产优质栽培技术模式,推广选用金柑良种,合理密植,要加强肥水土的管理,及时补充树体的营养和树势的修剪,注重金柑花果的管理,加强病虫害的综合防治,提出改善果实品质和果品防冻防裂的技术措施,全... 详细信息

通过金柑产区多年的试验研究,提出金柑高产优质栽培技术模式,推广选用金柑良种,合理密植,要加强肥水土的管理,及时补充树体的营养和树势的修剪,注重金柑花果的管理,加强病虫害的综合防治,提出改善果实品质和果品防冻防裂的技术措施,全面提高金柑果品品质。

关键词：尤溪金柑栽培良种高产优质

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尤溪金柑营销策略研究

三明学院学报 2010年第3期27卷 242-244页

作者：谈弢李军龙三明学院经济管理系福建三明365004

农产品营销对于加快农业产业化、标准市场化进程,促进农业增效、农民增收、加快海峡西岸现代农业和新农村建设等方面都具有重要的意义。尤溪发展金柑产业不仅存在着优势和机会,也存在着劣势和威胁。加快推动尤溪金柑产业的发展,要实行... 详细信息

农产品营销对于加快农业产业化、标准市场化进程,促进农业增效、农民增收、加快海峡西岸现代农业和新农村建设等方面都具有重要的意义。尤溪发展金柑产业不仅存在着优势和机会,也存在着劣势和威胁。加快推动尤溪金柑产业的发展,要实行产业化生产经营;加强市场监督;改进产品生产技术;扩大宣传,创建名优品牌;不断开拓市场,开展网络营销等营销策略。

关键词：尤溪金柑 SWOT分析营销策略

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尤溪金柑新品种金秋早的ISSR鉴定

园艺与种苗 2013年第4期33卷 36-40页

作者：金建涛赖钟雄陈登云卓春宣郑运绪福建农林大学园艺植物生物工程研究所福建福州350002 福建省尤溪县科技局福建尤溪365100 福建省尤溪县管前镇农业服务中心福建尤溪365116

[目的]为金秋早金柑的品种鉴定提供科学依据。[方法]通过ISSR分子标记技术对金秋早金柑母株、嫁接子代及对照等10份尤溪金柑株系样品基因组DNA进行分析鉴定。[结果]从48条引物中共筛选出10条能扩增出清晰度高、多态性好条带的引物。10... 详细信息

[目的]为金秋早金柑的品种鉴定提供科学依据。[方法]通过ISSR分子标记技术对金秋早金柑母株、嫁接子代及对照等10份尤溪金柑株系样品基因组DNA进行分析鉴定。[结果]从48条引物中共筛选出10条能扩增出清晰度高、多态性好条带的引物。10条引物共扩增出84个条带,其中多态性条带38条,多态性百分率为47.50%。金秋早母株与嫁接子代植株之间的DNA扩增图谱几乎没有差异,而母株、嫁接子代与其他尤溪金柑的DNA扩增图谱则有明显的不同,说明高接后该品种遗传性状稳定;金秋早与普通尤溪金柑在DNA水平上存在差异,为不同品种;进一步的UPGMA聚类分析结果也支持这一观点。[结论]ISSR分子标记技术可以作为尤溪金柑新品种鉴定手段之一。

关键词：尤溪金柑金秋早金柑 ISSR 分子鉴定

尤溪金柑主产区土壤有机质和碱解氮含量的空间变异分析

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福建果树 2011年第4期29卷 17-20页

作者：卓春宣林盛洪福建省尤溪县管前镇农业服务中心福建尤溪365116 福建省尤溪县农业局

利用2007年采集的尤溪金柑主产区197个土样数据,以对金柑生长作用较为密切的土壤有机质和碱解氮为研究对象,采用ArcGIS软件地统计分析模块中的反距离加权插值法进行插值处理。结果表明,金柑园土壤有机质和碱解氮含量空间分布格局基本一... 详细信息

利用2007年采集的尤溪金柑主产区197个土样数据,以对金柑生长作用较为密切的土壤有机质和碱解氮为研究对象,采用ArcGIS软件地统计分析模块中的反距离加权插值法进行插值处理。结果表明,金柑园土壤有机质和碱解氮含量空间分布格局基本一致,大部分区域在适宜范围,局部存在缺乏区块。并据此提出果园土壤管理改进措施。

关键词：尤溪金柑土壤养分地统计学反距离加权插值

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尤溪金柑主要病虫害综合防治技术

南方农业 2010年第1期4卷 19-21页

作者：陈翾张宏梓詹桂尧王守吉卢秀贞福建省尤溪县林业局八字桥林业站 365114 福建省尤溪县林业科技推广中心 365114 福建省尤溪县林业局 365114

介绍尤溪金柑主要病虫害的种类和为害特征,提出了相应的病虫害综合防治技术。

关键词：尤溪金柑病虫害综合防治

试论金柑水果的品牌建设——以福建尤溪金柑品牌建设为例

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三明学院学报 2011年第4期28卷 67-70页

作者：曾祥添三明学院经济管理学院福建三明365004

由于水果有很强的同质性,随着消费需求的快速变化,水果市场的竞争越来越激烈,面对众多的竞争对手,作为传统水果行业,应该如何形成自己的特色,发挥品牌竞争优势,将是未来水果行业发展的关键所在。品牌作为一种竞争性资产,在竞争上的优势... 详细信息

由于水果有很强的同质性,随着消费需求的快速变化,水果市场的竞争越来越激烈,面对众多的竞争对手,作为传统水果行业,应该如何形成自己的特色,发挥品牌竞争优势,将是未来水果行业发展的关键所在。品牌作为一种竞争性资产,在竞争上的优势突出表现为经济、管理和战略三个方面,品牌已成为水果市场竞争的重要手段之一。因此,对于水果市场品牌建设显得尤为重,特别是根据水果市场的特点,通过有效措施,推进水果品牌的建设,提高水果的市场占有率,促进水果产业的持续发展。

关键词：尤溪金柑品牌建设策略