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农业现代化研究 2012年第6期33卷 741-744页

作者：唐宇龙何流琴 C.M.NYACHOTI 印遇龙中国科学院亚热带农业生态研究所中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室湖南省畜禽健康养殖工程技术中心农业部中南动物营养与饲料科学观测实验站湖南长沙410125 中国科学院研究生院北京100039 Department of Animal Science University of ManitobaWinnipeg

小肠灌注(Small Intestinal Segment Perfusion)技术是通过建立仔猪的原位模型,在病原菌的感染下,检测小肠的净流量和电解质浓度,从而鉴定不同益生物质在腹泻上的作用;尤斯灌流(Ussing chamber)技术通过微电极检测整个肠道细胞膜离子通... 详细信息

小肠灌注(Small Intestinal Segment Perfusion)技术是通过建立仔猪的原位模型,在病原菌的感染下,检测小肠的净流量和电解质浓度,从而鉴定不同益生物质在腹泻上的作用;尤斯灌流(Ussing chamber)技术通过微电极检测整个肠道细胞膜离子通道变化的电流信号,研究其药物吸收、通透性和分泌情况的变化。本文就这两种技术的发明,主要步骤和在肠道上的应用进行详细的介绍。

关键词：小肠灌注技术尤斯灌流技术肠道研究

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黄芩苷-小檗碱纳米晶口服吸收特性的研究

黄芩苷-小檗碱纳米晶口服吸收特性的研究

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作者：王继林天津中医药大学

学位级别：硕士

实现中药多组分的高效口服递送,提高生物利用度发挥疗效,是现代中药制剂研究中的关键问题。药物纳米晶技术是改善中药难溶性成分口服递送系统的重要途径,但设计中药难溶性多成分同时递送的纳米晶较为困难,其吸收机制和体内命运研究仍有... 详细信息

实现中药多组分的高效口服递送,提高生物利用度发挥疗效,是现代中药制剂研究中的关键问题。药物纳米晶技术是改善中药难溶性成分口服递送系统的重要途径,但设计中药难溶性多成分同时递送的纳米晶较为困难,其吸收机制和体内命运研究仍有待深入。黄芩和黄连是常用药对,常见于黄连解毒汤、葛根芩连汤等方剂,在煎煮过程中黄芩苷(BA)和小檗碱(BBR)具有自沉淀现象,BA中羧酸阴离子与BBR中季铵阳离子之间易发生相互作用复合成盐。本文以纳米化后的黄芩黄连自组装产物——BA-BBR纳米晶为研究对象,利用Caco-2细胞单层模型、环境响应型荧光探针、Ussing Chamber技术以及小动物活体成像技术,从细胞、组织、动物三个角度研究BA-BBR纳米晶的口服吸收特性。本文通过聚集诱导发射原理(AIE)制备了BA-BBR-TPE复合物,通过高压均质法制备BA-BBR-TPE纳米晶。考察溶解率与荧光强度的关系,验证了BA-BBR-TPE纳米晶具有AIE效应。利用激光共聚焦成像显微镜观察BA-BBR-TPE纳米晶在Caco-2细胞上的吸收特性。摄取实验显示BA-BBR-TPE纳米晶可以被内化到细胞中,在5-7 h达到顶峰,并且纳米晶组在5-7 h具有的荧光强度高于复合物组。7 h后BA-BBR-TPE复合物及纳米晶的荧光强度减弱,且10 h时纳米晶组的荧光弱于复合物组。结果表明,BA-BBR纳米晶在细胞层面表现出更好的溶解度和吸收性,更有利于细胞内吞作用,并且具有“整体转运”的特性,以整体形式被细胞内吞。采用Caco-2细胞单层模型,测定BA-BBR复合物及纳米晶从肠腔内侧到基底侧转运的渗透系数变化,评价BA-BBR复合物及纳米晶的跨膜转运特性,并探讨P-gp外排对BA-BBR复合物及纳米晶跨膜转运的影响。结果显示,与物理混合物相比,复合物中BA和BBR的P值均显著降低;与复合物相比,纳米晶中BA和BBR的P值分别显著提升1.3倍和2.3倍。加入维拉帕米后,BA-BBR复合物中BA和BBR的P值分别显著提升1.5倍和2.0倍。纳米晶中BA和BBR在维拉帕米的影响下P值有增加趋势,无显著性。结果表明,BA-BBR复合物不同于单纯的物理混合物,具有自身的吸收特性,表现为低渗透性并且受P-gp外排影响,纳米晶技术可以显著增加BA-BBR复合物在Caco-2细胞单层膜的渗透性,同时减弱外排影响。利用Ussing Chamber技术,评价BA-BBR复合物及纳米晶在大鼠不同肠段的吸收特性。结果显示,与复合物相比,纳米晶BBR的K值在十二指肠、空肠和回肠段分别显著提升1.4倍、1.9倍和1.9倍,P值分别显著提高1.3倍、1.3倍和2.4倍。纳米晶BA的K值在十二指肠、空肠和回肠段分别显著提升2.2倍、2.4倍和1.8倍;P值分别显著提高2.6倍、3.2倍和2.1倍。且不同于复合物,纳米晶中BA和BBR表现出在回肠吸收较好的特点。结果表明,纳米晶能够有效提高BA、BBR两种成分在离体肠粘膜的渗透性,显著提高肠吸收,同时也可以改善药物在肠道的吸收部位,促进药物均衡释放。利用荧光共振能量转移效应(FRET)和小动物活体成像仪研究BA-BBR复合物及纳米晶在大鼠体内转运特性。大鼠活体成像实验结果显示,纳米晶在小肠的荧光强度高于复合物。离体胃肠道成像结果显示,纳米晶在胃部的滞留时间、入肠和吸收速度均优于复合物。组织分布结果表明,大部分时间点未在组织上发现复合物及纳米晶的荧光强度。研究结果表明,纳米晶在胃肠道仍以“整体粒子”的形式存在,但随着在体内的吸收转运,药物晶体结构垮塌,纳米晶无法以整体微粒的形式到达各个组织器官。本文初步阐明了BA-BBR纳米晶通过整体跨膜转运和均衡释放促进口服吸收这一过程,为进一步揭示“复方水煎自沉淀”的体内过程,从中药制剂角度阐释中药药对的物质基础和药效作用特点提供重要依据。

关键词：黄芩苷-小檗碱复合物纳米晶 Caco-2细胞尤斯灌流技术活体成像 AIE FRET

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日粮不同磷水平和钙磷比对蛋鸡生产性能及磷吸收的影响

日粮不同磷水平和钙磷比对蛋鸡生产性能及磷吸收的影响

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作者：孙飞湖南农业大学

学位级别：硕士

家禽日粮中植物性饲料原料仅30%左右的磷是可供家禽可以直接利用的非植酸磷,为了满足动物生产和产蛋等需求,家禽日粮中必须额外添加无机磷,但是这些添加的磷并不能完全被吸收利用,多余的磷以粪、尿磷的形式排出体外,造成环境污染,提高... 详细信息

家禽日粮中植物性饲料原料仅30%左右的磷是可供家禽可以直接利用的非植酸磷,为了满足动物生产和产蛋等需求,家禽日粮中必须额外添加无机磷,但是这些添加的磷并不能完全被吸收利用,多余的磷以粪、尿磷的形式排出体外,造成环境污染,提高养殖成本。一方面我国磷资源紧缺,另一方面磷利用不充分、过量排泄导致磷浪费现象严重。因此准确评定动物对磷的需要量、提高日粮植酸磷利用率成为磷营养研究的热点。本试验通过饲养试验测定不同磷水平及钙磷比对蛋鸡生产性能、血液生化指标及骨骼发育情况的影响,应用尤斯灌流技术离体培养蛋鸡小肠测定磷在小肠的吸收转运情况,再结合实时荧光定量测定小肠各部位Na/Pi-IIb基因mRNA的表达量,旨在为产蛋高峰期蛋鸡日粮中适宜磷水平和钙磷比的确定提供试验依据,并研究磷在产蛋高峰期蛋鸡小肠的吸收机理。试验一：不同磷水平和钙磷比对产蛋鸡生产性能、血清生化指标及骨骼性状的影响本试验旨在研究不同磷水平和钙磷比对产蛋鸡生产性能、血清生化指标及骨骼性状的影响。采用2×3因子完全随机分组试验设计,每个因子3个水平,共9个组,每个组5个重复,每个重复9只鸡。日粮两个因子分别为日粮有效磷(AP)水平和钙磷比,3个有效磷水平为0.25%、0.30%和0.35%,钙磷比的3个水平分别为8：1、10：1和12：1。结果表明：当日粮中有效磷水平为0.35%,Ca:AP=10:1时,高产蛋鸡可以获得较高的生产性能、更加优异的蛋品质和胫骨性能。试验二：不同磷水平和pH值对蛋鸡离体小肠磷吸收的影响本研究采用两个单子试验设计,分别探讨培养液磷水平和pH值对蛋鸡离体小肠磷吸收的影响,旨在为应用Ussing chamber评定饲料有效磷时选择适宜培养液磷浓度和pH值提供参考依据。每个因子3个处理,分别为磷水平0.25%、0.30%和0.35%,pH值6.4、7.4和8.4。选取24只30周龄体重相近的罗曼蛋鸡,随机分配到6个处理中,每个处理4个重复,每个重复1只鸡,取十二指肠、空肠和回肠,用Ussing chamber系统培养60min。结果表明：相同磷水平,不同肠段之间磷吸收率并无显著差异(P>0.05),但十二指肠磷吸收率较空肠、回肠稍高。pH 7.4组十二指肠、空肠和回场磷吸收率均显著高于pH6.4和pH8.4组(P技术评定饲料有效磷时,培养液适宜pH为7.4;有效磷含量以0.3%左右为宜。试验三：不同磷水平和钙磷比对蛋鸡小肠Na/Pi-IIb基因mRNA表达量的影响研究不同磷水平和钙磷比对高产蛋鸡小肠Na/Pi-IIb基因mRNA表达量的影响。以试验一中蛋鸡肠道为试验材料,采用RT-PCR对各肠段Na/Pi-IIb mRNA表达量进行测定。结果表明：(1)日粮中AP水平和Ca:AP对蛋鸡小肠Na/Pi-IIb mRNA表达量具有显著影响,0.25%AP组日粮肠道中Na/Pi-IIb mRNA表达量高于0.30%和0.35%组。(2)十二指肠和空肠Na/Pi-IIb mRNA表达量随着Ca:AP的提高而增加。小肠各肠段Na/Pi-IIb mRNA表达量为十二指肠>空肠>回场。综上所述可以得出：(1)以蛋鸡为动物模型用Ussing chamber技术评定饲料有效磷时,培养液适宜pH为7.4,有效磷含量以0.3%左右为宜。(2)日粮中AP水平0.35%,C：AP=10：1时高产蛋鸡可以获得较高的生产性能,优异的蛋品质及胫骨性能。(3)0.25%AP组日粮肠道中Na/Pi-IIb mRNA表达量高于0.30%和0.35%组。十二指肠和空肠Na/Pi-IIb mRNA表达量随着Ca:AP的提高而增加;小肠各肠段Na/Pi-IIbmRNA表达量为十二指肠>空肠>回肠。

关键词：蛋鸡磷 Na/Pi-Ⅱb 尤斯灌流技术钙磷比

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