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橡胶树尖孢炭疽复合种新菌株的报道及生物学特性分析

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植物病理学报 2020年第5期50卷 531-542页

作者：江涛刘先宝李博勋冯艳丽郑肖兰黄贵修中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室/海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室海口571101

从云南省临沧市某开割橡胶林中分离到一类以YNLC510为代表的致病炭疽菌,经多基因序列分析结合形态比较后推测其为尖孢炭疽复合种下的一个新类群。基础生物学特性和致病性测定结果表明:YNLC510在28℃、pH 7.0~8.0、以果胶为碳源、大豆蛋... 详细信息

从云南省临沧市某开割橡胶林中分离到一类以YNLC510为代表的致病炭疽菌,经多基因序列分析结合形态比较后推测其为尖孢炭疽复合种下的一个新类群。基础生物学特性和致病性测定结果表明:YNLC510在28℃、pH 7.0~8.0、以果胶为碳源、大豆蛋白胨为氮源时最适合菌丝生长;在32℃、以果胶为碳源、天冬酰胺、大豆蛋白胨为氮源时产孢量最大;培养基水活度对菌丝生长和孢子形成具有极大影响,当水活度小于0.93 aw.菌丝几乎不再生长,而小于0.99 aw.即不再具备产孢能力;YNLC510对国内当前主栽或主推的橡胶品种均表现致病,对IAN873和GT1的致病性最强,对PB86、PB235和PR107相对较弱;且在无伤条件下能侵染番木瓜、芒果、辣椒和黄瓜的叶片,但不能侵染番石榴叶片和辣椒果实,在刺伤条件下对供试植物均可致病。这是关于该类炭疽的首次报道。当前报道的橡胶树尖孢炭疽复合种中已有3个种仅在云南省内分布,显示出该区域橡胶树上炭疽属真菌存在丰富的种群多样性。

关键词：橡胶炭疽病尖孢炭疽复合种种类鉴定生物学特性

国内橡胶树尖孢炭疽复合种种间分子系统发育及生物学特性分析

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热带作物学报 2020年第9期41卷 1856-1864页

作者：江涛刘先宝李博勋郑肖兰蔡吉苗冯艳丽黄贵修海南大学植物保护学院海南海口570228 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室/海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室海南海口571101

为明确国内橡胶树尖孢炭疽复合种内不同种的生物学特性及种间差异情况,评价了4个代表性菌株(Colletotrichum bannanense YNML52,*** YNJH17109,*** GX1655,YNJP162)对不同碳源、氮源的利用情况,以及在不同温度、pH、水活度下的生长情况... 详细信息

为明确国内橡胶树尖孢炭疽复合种内不同种的生物学特性及种间差异情况,评价了4个代表性菌株(Colletotrichum bannanense YNML52,*** YNJH17109,*** GX1655,YNJP162)对不同碳源、氮源的利用情况,以及在不同温度、pH、水活度下的生长情况,并评价了这些菌株对橡胶不同品种和不同作物的致病性。结果表明:供试菌株在碳源、氮源利用,适宜生长温度、致死温度、pH和水分活度等方面均存在显著差异;致病性分析表明,供试菌株的致病谱也存在显著差异,YNML52的寄主范围较窄,具有很强的寄主专化性。通过评价生态因子对橡胶树炭疽病病原菌生物学特性的影响,为深入了解橡胶病害发生规律和制定有效防控措施提供指导依据。

关键词：橡胶树尖孢炭疽复合种生物学特性致病性

甘肃省枸杞炭疽病菌对4种甾醇脱甲基抑制剂的敏感性

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农药学学报 2019年第4期21卷 424-430页

作者：张海英刘永刚李建军张新瑞甘肃省农业科学院植物保护研究所兰州730070 农业农村部天水作物有害生物科学观测实验站甘肃甘谷741299

为明确甘肃省枸杞炭疽病菌对甾醇脱甲基抑制剂类药剂(DMIs)的敏感性,采用菌丝生长速率法测定了采自甘肃省靖远县3个地区及景泰县3个地区共102株枸杞炭疽病菌对苯醚甲环唑、戊唑醇、丙环唑及氟硅唑的敏感性,分别就不同年份、不同地区间... 详细信息

为明确甘肃省枸杞炭疽病菌对甾醇脱甲基抑制剂类药剂(DMIs)的敏感性,采用菌丝生长速率法测定了采自甘肃省靖远县3个地区及景泰县3个地区共102株枸杞炭疽病菌对苯醚甲环唑、戊唑醇、丙环唑及氟硅唑的敏感性,分别就不同年份、不同地区间胶孢炭疽复合种和尖孢炭疽复合种对4种DMIs杀菌剂的敏感性差异进行了分析。结果表明:供试46株枸杞胶孢炭疽复合种整体上对苯醚甲环唑、戊唑醇、丙环唑和氟硅唑仍表现为敏感,EC50值分别在0.28~1.20、0.11~2.98、0.32~2.84和0.35~3.85μg/mL之间;而56株尖孢炭疽复合种对4种药剂的敏感性则出现了不同程度分化,部分菌株疑似已出现敏感性下降现象,其中,对苯醚甲环唑、戊唑醇、丙环唑和氟硅唑敏感性最低的菌株EC50值分别为1.63、3.80、6.21和4.74μg/mL。不同年份间采集的枸杞胶孢炭疽复合种和尖孢炭疽复合种对4种杀菌剂的敏感性均存在显著差异,2017年采集的菌株敏感性相对更低,4种杀菌剂对胶孢炭疽复合种的平均EC50值分别为(0.84±0.03)、(1.23±0.13)、(1.19±0.09)和(1.69±0.17)μg/mL,对尖孢炭疽复合种的平均EC50值分别为(1.06±0.03)、(2.25±0.15)、(2.43±0.20)和(2.85±0.19)μg/mL。不同地区枸杞炭疽病菌对4种杀菌剂的敏感性表现不同,其中靖远县五合镇的胶孢炭疽复合种对4种杀菌剂敏感性最低,平均EC50值分别为(0.79±0.12)、(1.28±0.87)、(1.39±1.05)和(1.74±1.04)μg/mL,景泰县草窝滩镇的胶孢炭疽复合种对苯醚甲环唑和丙环唑敏感性最高,平均EC50值为(0.28±0.10)和(0.46±0.10)μg/mL,对戊唑醇和氟硅唑敏感性最高的胶孢炭疽复合种来自景泰县寺滩乡,平均EC50值为(0.42±0.16)和(0.65±0.09)μg/mL;不同地区间采集的尖孢炭疽复合种对4种杀菌剂的敏感性则不存在显著差异。研究结果可为甘肃省枸杞炭疽病防治中杀菌剂的合理使用及延缓抗药性发展提供依据。

关键词：枸杞炭疽病菌胶孢炭疽复合种尖孢炭疽复合种甾醇脱甲基抑制剂苯醚甲环唑戊唑醇丙环唑氟硅唑敏感性

中国桃尖孢炭疽菌抗药性及优势种检测技术研究

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中国桃尖孢炭疽菌抗药性及优势种检测技术研究

作者：王京华中农业大学

学位级别：硕士

炭疽病不仅影响桃果产量,还会降低其品质,给桃产业带来巨大经济损失。使用化学杀菌剂是目前防治桃炭疽病的常用手段,但不同炭疽病病原菌对杀菌剂的敏感性存在差异,导致田间防控困难。本论文检测了桃尖孢炭疽菌复合种对常用杀菌剂的敏感... 详细信息

炭疽病不仅影响桃果产量,还会降低其品质,给桃产业带来巨大经济损失。使用化学杀菌剂是目前防治桃炭疽病的常用手段,但不同炭疽病病原菌对杀菌剂的敏感性存在差异,导致田间防控困难。本论文检测了桃尖孢炭疽菌复合种对常用杀菌剂的敏感性,调查了苯基吡咯类杀菌剂咯菌腈对桃尖孢炭疽菌复合种的防治效果,并对咯菌腈抗性机理进行初步探索。针对我国桃尖孢炭疽复合种的优势种Colletotrichum nymphaeae开发了一种适用于田间的早期检测技术。具体研究结果如下:(1)使用菌丝生长抑制法测定了采自中国5个省份的113株尖孢炭疽复合种病菌对8种杀菌剂的敏感性。各种杀菌剂对供试菌株的EC平均值从低到高依次为咯菌腈,咪鲜胺,苯醚甲环唑,戊唑醇,嘧菌酯,丙环唑,粉唑醇,异菌脲。EC值相关性分析显示,DMI类杀菌剂间呈现极强的正相关,嘧菌酯与戊唑醇之间存在一定程度的相关性,相关系数为0.36,咯菌腈与供试杀菌剂都不存在相关性,异菌脲与除咯菌腈外的其他杀菌剂均呈现强烈的负相关。另外,***、***和***对咪鲜胺、戊唑醇、丙环唑和咯菌腈的敏感性均存在显著的种间差异。(2)咯菌腈对桃尖孢炭疽复合种病菌有显著影响。在0.05μg/m L处理下,菌丝皱缩弯曲。咯菌腈对病原菌产孢具有抑制作用,但对孢子萌发的抑制不明显。同时发现***种内菌株出现分化,除已报道的两个亚群外,本研究建立的系统进化树中,GZTR 2-1、GZTR 2-2、GZTR 5-1、GZTR 5-2、GZTR 6-1、GZTR 6-2、GZTR 7-1和GZTR 7-2菌株单独归为一簇,低浓度咯菌腈处理对该簇菌株的菌丝生长抑制率高于高浓度处理。在室内防效测定中,咯菌腈可以有效控制***和***引起的炭疽病,防治效果达100%,但对***效果不佳,在500μg/m L药液处理下果实上仍有小病斑。(3)通过药剂驯化得到8株抗性稳定的咯菌腈抗性突变体。与亲本菌株相比,抗性突变体对Na Cl敏感性显著提高,致病力略有降低。咯菌腈与嘧菌酯、苯醚甲环唑都不存在交互抗性,两种药剂可有效防治咯菌腈抗性菌株。***敏感菌株FJNP 11-1-2、抗性突变体FJNP 1-1-2R和FJNP 20-1-2R的基因组重测序分析发现,突变体FJNP 1-1-2R的Cn Os1基因发生移码突变(A-AT),突变体FJNP 20-1-2R的Cn Os1基因终止密码子提前(CAG-TAG)。表明Cn Os1基因的突变是导致***对咯菌腈产生抗性的主要原因。(4)基于RPA/Cas12a方法,研发了***的田间快速检测技术。本研究以***特异性引物组PCNF/PCNR扩增的202 bp基因片段为靶标,设计了3对RPA扩增引物,发现引物对Cn RPA F3/Cn RPA R3能特异性扩增靶标序列,为理想的RPA扩增引物。基于***靶标序列独有的PAM位点设计1条crRNA。由于Cas12a的附属切割ss DNA活性,在CRISPR/Cas12a反应体系中加入FQ-reporter探针,阳性结果在微型紫外手电筒照射下呈现绿色荧光,实现可视化。对反应体系各参数进行优化后,进行特异性试验,结果显示该技术能够在近缘种和其他桃树病害病原菌中特异性识别***。该技术具有通用性,不同省份的***菌株均可被准确检测。该技术的检测极限为5 pg/μL样品DNA,低于常规PCR灵敏度。最后,通过室内人工接种孢子悬浮液模拟桃果实田间发病,使用简单的水煮法提取病斑处样品DNA,用于RPA/Cas12a检测,结果表明只有接种***的果实显示阳性结果,且从提取DNA到检测完成,仅需1 h 30 min。

关键词：桃炭疽病尖孢炭疽复合种 C.nymphaeae 杀菌剂抗药性咯菌腈 RPA/Cas12a检测