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脐血单个核细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠促红细胞生成素蛋白及少突胶质祖细胞的影响

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中国当代儿科杂志 2013年第9期15卷 775-778页

作者：季加芬张金萍王晓莉牟青杰范蒙蒙陈玉玺潍坊医学院临床学院儿科山东潍坊261031 寒亭区固堤街道泊子卫生院山东潍坊261107 潍坊医学院医学影像学系山东潍坊261053 潍坊医学院临床学院血液科山东潍坊261031

目的探讨脐血单个核细胞(UCBMC)移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑促红细胞生成素(EPO)蛋白及少突胶质祖细胞的影响。方法 7日龄健康Sprague-Dawley新生大鼠40只随机分为正常对照组、HI组、UCBMC对照组和HI+UCBMC组,每组10只。采... 详细信息

目的探讨脐血单个核细胞(UCBMC)移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑促红细胞生成素(EPO)蛋白及少突胶质祖细胞的影响。方法 7日龄健康Sprague-Dawley新生大鼠40只随机分为正常对照组、HI组、UCBMC对照组和HI+UCBMC组,每组10只。采用经典Rice法制成HIBD模型,造模24 h后,正常对照组和HI组经侧脑室注入2μL PBS,UCBMC对照组和HI+UCBMC组经侧脑室注入3×106UCBMC。移植后7d,采用EPO/DAPI与NG2/DAPI免疫荧光双标法观察损伤侧室管膜下区(SVZ)EPO蛋白及少突胶质祖细胞的变化,并进行相关性分析。结果移植后7 d,HI+UCBMC组NG2+DAPI+及EPO+DAPI+细胞数均显著高于UCBMC对照组(均P细胞数均显著高于正常对照组和HI组(均P细胞数显著高于HI组(P细胞数与EPO+DAPI+细胞数呈正相关(r=0.898)及直线回归(β=1.4604,P少突胶质祖细胞的表达,其机制与EPO蛋白的表达增加相关,从而修复脑白质损伤。

关键词：脐血单个核细胞缺氧缺血性脑损伤促红细胞生成素少突胶质祖细胞新生大鼠

过表达少突胶质细胞转录因子2加速小鼠胚胎干细胞分化为神经元-胶质细胞抗原2阳性少突胶质祖细胞样细胞

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解剖学杂志 2014年第4期37卷 480-481,486,F0004页

作者：曲学彬王贝罗梦娇郭瑞王会平张强于红丽姚瑞芹徐州医学院生物学教研室徐州221009

目的：观察少突胶质细胞转录因子2（O1ig2）过表达对小鼠胚胎干细胞（mESCs）向少突胶质祖细胞（OPCs）分化的影响.方法：将体外培养的mESCs分为空载体感染和Olig2-GFP慢病毒感染组,免疫荧光显色检测Olig2的表达.感染后9、14、21 d和28 ... 详细信息

目的：观察少突胶质细胞转录因子2（O1ig2）过表达对小鼠胚胎干细胞（mESCs）向少突胶质祖细胞（OPCs）分化的影响.方法：将体外培养的mESCs分为空载体感染和Olig2-GFP慢病毒感染组,免疫荧光显色检测Olig2的表达.感染后9、14、21 d和28 d神经元-胶质细胞抗原2（NG2）免疫荧光显色观察mESCs向OPCs的分化情况.结果：Olig2-GFP慢病毒感染组mESCs经筛选后均为Olig2＋/GFP＋,而空载体感染组mESCs无Olig2表达.感染后9d,两组细胞均无NG2表达;感染后14d,Olig2-GFP慢病毒感染组NG2高表达,空载体感染组仅有少数细胞为NG2弱阳性;感染后21d与14 d相比,两组均无明显变化;感染后28d,两组细胞均有较强的NG2表达,组间无差异.结论：过表达Olig2能够加速mESCs分化为NG2＋的OPCs样细胞.

关键词：少突胶质细胞转录因子2 基因过表达小鼠胚胎干细胞少突胶质祖细胞分化

骨形成蛋白对少突胶质祖细胞体外定向分化的影响

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广东医学 2014年第14期35卷 2164-2166页

作者：陈丽萍郭力马顺利张静李振飞姜红河北医科大学第二医院神经内科河北省神经病学实验室石家庄050000 河北省邢台市第三医院神经内一科 054000

目的观察体外培养的少突胶质祖细胞（OPCs）在不同定向分化培养基中骨形成蛋白（BMP）的表达,以及BMP的拮抗剂Noggin对OPCs定向分化的影响,进而探讨脱髓鞘疾病治疗的新靶点。方法选取新生1-2 d的SD大鼠,应用选择性分离程序,通过细胞选... 详细信息

目的观察体外培养的少突胶质祖细胞（OPCs）在不同定向分化培养基中骨形成蛋白（BMP）的表达,以及BMP的拮抗剂Noggin对OPCs定向分化的影响,进而探讨脱髓鞘疾病治疗的新靶点。方法选取新生1-2 d的SD大鼠,应用选择性分离程序,通过细胞选择性贴壁培养和不同频率的振荡,分离纯化OPCs,分别用无血清和有血清的定向分化培养基培养,并在定向分化培养基中给予Noggin干预。应用免疫荧光法进行细胞鉴定,观察细胞分化状况。用实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测定向分化细胞的BMP2、BMP4 mRNA的表达。结果纯化后的OPCs细胞达95%。在无血清的情况下,OPCs定向分化为少突胶质细胞;在有血清的情况下,定向分化为2-型星形胶质细胞,并且细胞BMP2/4 mRNA表达增加。Noggin抑制OPCs向星形胶质细胞的分化。结论 OPCs具有增殖和双向分化的潜能。BMP2/4参与了OPCs定向分化的调控。

关键词：少突胶质祖细胞定向分化少突胶质细胞星形胶质细胞骨形成蛋白多发性硬化

少突胶质祖细胞移植对新生鼠缺氧缺血脑损伤学习记忆功能的影响

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解剖学研究 2009年第5期31卷 334-337,F0004页

作者：徐明杰王玮福建医科大学神经生物学研究中心福建福州350004 福建医科大学人体解剖与组织胚胎学系

目的探讨原代少突胶质祖细胞(O2A)的培养方法,并移植入缺氧缺血新生鼠脑内,为细胞干预早产儿白质软化病的研究提供细胞学基础。方法根据O2A的生长时间、生长方式及细胞对培养层粘附等特性的差异,采用两次恒温摇床振荡分离纯化法和条件... 详细信息

目的探讨原代少突胶质祖细胞(O2A)的培养方法,并移植入缺氧缺血新生鼠脑内,为细胞干预早产儿白质软化病的研究提供细胞学基础。方法根据O2A的生长时间、生长方式及细胞对培养层粘附等特性的差异,采用两次恒温摇床振荡分离纯化法和条件限定培养基培养,获得高纯度的O2A,经脑室移植入缺氧缺血性脑白质损伤的新生鼠脑内。结果体外培养24h后,细胞成堆聚集形成克隆球;第2～3天,细胞呈圆形或椭圆形,多数具有双极突起。实验新生鼠由脑室移植O2A后,测定平均逃避潜伏期:PVL+O2A移植组为(7.33±1.41)s,PVL+PBS组为(16.24±1.63)s,PVL组为(11.75±1.50)s;PVL+O2A移植组的平均逃避潜伏期比PVL+PBS组和PVL组缩短,与PVL+PBS组、PVL组比较差异均有统计学意义(P少突胶质细胞,使轴突重新髓鞘化,促进脑功能的修复。

关键词：少突胶质祖细胞缺氧缺血白质软化病移植

经脑室少突胶质祖细胞移植对脑室周围白质软化大鼠髓鞘修复的研究

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经脑室少突胶质祖细胞移植对脑室周围白质软化大鼠髓鞘修复的研究

作者：徐明杰福建医科大学

学位级别：硕士

【目的】通过荧光标记的体外培养获得少突胶质细胞∕Ⅱ型星形胶质祖细胞(oligodendrocyte∕typeⅡastrocyte, O2A祖细胞,也称少突胶质祖细胞),经侧脑室移植到新生大鼠脑室周围白质软化模型(periventricular lerkomalacia, PVL)上。通过... 详细信息

【目的】通过荧光标记的体外培养获得少突胶质细胞∕Ⅱ型星形胶质祖细胞(oligodendrocyte∕typeⅡastrocyte, O2A祖细胞,也称少突胶质祖细胞),经侧脑室移植到新生大鼠脑室周围白质软化模型(periventricular lerkomalacia, PVL)上。通过Western blot技术、实验动物认知评价对经侧脑室移植O2A祖细胞的PVL模型大鼠进行评估。为干细胞移植治疗少突胶质细胞损伤后髓鞘形成障碍或脱髓鞘疾病的研究提供实验依据。【方法】 1.采用两次恒温摇床振荡分离纯化法和条件限定培养基培养,获取大鼠少突胶质祖细胞。免疫荧光染色法鉴定细胞类型并判断纯度。 2.通过对3日龄新生SD大鼠进行双侧颈总动脉结扎的方法,建立脑室周围白质软化新生大鼠动物模型。并用组织病理学,少突胶质前体细胞凋亡检测,实验动物生长发育及神经行为学等方法对动物模型评价。 3.体外培养获得O2A祖细,并在成功创建了新生大鼠脑室周围白质软化模型的基础上,对建模后72h的PVL新生大鼠进行经侧脑室O2A祖细胞移植治疗。通过Western blot技术、实验动物认知评价对经侧脑室移植O2A祖细胞的PVL模型大鼠进行评估。【结果】 1.从新生SD大鼠皮层分离的O2A祖细胞胞体呈圆形,常有单极或双极突起,形成克隆球,A2B5标记阳性,免疫荧光鉴定细胞纯度可达95%。体外培养时O2A细胞具有双向分化的能力,在不同诱导条件下可分化为星型胶质细胞或少突胶质细胞。 2.对3日龄新生SD大鼠进行双侧颈总动脉结扎后,模型组与对照组大鼠相比,模型组大鼠生长缓慢,睁眼时间延迟,悬崖逃避能力及双臂悬吊能力均降低,差异有统计学意义。在水迷宫实验中,模型组大鼠在水中寻找站台的游泳速度减慢、寻找站台的所用的时间延长(即模型组的平均逃避潜伏期比对照组延长)、撤去平台后在平台所在象限停留时间缩短(即模型组第三象限停留时间比对照组缩短)。 3.脑组织HE染色,模型组术后24小时、48小时可见弥散性皮质下和脑室周白质疏松水肿。术后1周模型组脑白质水肿明显减轻,但脑白质疏松,组织结构层次与对照组相比不清晰。术后3周时模型组脑白质胶质细胞增生形成胶质结节。术后4周时模型组脑白质胶质细胞消失,形成网格状的软化灶。 4.激光共聚焦扫描显微镜观察,模型组术后侧脑室周O4和TUNEL双阳性。结果说明模型所致脑白质损伤主要以O4阳性的少突胶质前体细胞为主。 5. O2A祖细胞移植后水迷宫实验显示PVL+O2A祖细胞移植组大鼠水中寻找平台的游泳速度较快、寻找平台的所用的时间比PVL+PBS组、PVL组缩短缩短,撤去平台后在平台所在象限停留时间比PVL+PBS组、PVL组延长。 6. Western blot半定量技术检测PVL+O2A祖细胞移植组、PVL+PBS组PVL组三组鼠脑白质MBP表达量,显示PVL组和PVL+PBS组在移植后7、14、28天即P13、P20、P34大鼠脑白质MBP表达量均低于同龄PVL+O2A祖细胞移植组。PVL组与PVL+PBS组在移植后7、14、28天即P13、P20、P34大鼠脑白质MBP表达量相比无差异。【结论】 1.采用两次恒温摇床振荡分离纯化法和条件限定培养基培养,可获取高纯度的大鼠少突胶质祖细胞。 2.通过对3日龄新生SD大鼠进行双侧颈总动脉结扎的方法,可建立与人类早产儿脑室周围白质软化病理相似的脑室周围白质软化动物模型。 3.移植的O2A祖细胞可以促进损伤髓鞘的修复。间接提示移植的O2A祖细胞可分化为成熟的能够形成髓鞘的少突胶质细胞,并且表达髓鞘碱性蛋白,整合在髓鞘形成区域。PVL模型大鼠受损的学习能力也得到了恢复,说明O2A祖细胞移植治疗可达到限制神经退变进程和替代受损内源性少突胶质细胞的作用。

关键词：少突胶质祖细胞脑室周围白质软化侧脑室移植髓鞘修复

microRNA let-7促进脑白质损伤中少突胶质祖细胞迁移的体外研究

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microRNA let-7促进脑白质损伤中少突胶质祖细胞迁移的体外研究

作者：李婕浙江大学

学位级别：硕士

早产儿脑白质损伤（preterm white matter injury,PWMI）是早产儿出生后并发症中脑损伤的主要类型。早产儿出生后由于反复缺血缺氧和炎症反应的发生,少突胶质祖细胞（oligodendrocyte precursor cells,OPCs）在迁移和发育等方面受到严... 详细信息

早产儿脑白质损伤（preterm white matter injury,PWMI）是早产儿出生后并发症中脑损伤的主要类型。早产儿出生后由于反复缺血缺氧和炎症反应的发生,少突胶质祖细胞（oligodendrocyte precursor cells,OPCs）在迁移和发育等方面受到严重干扰,进一步造成髓鞘形成障碍,最终导致早产儿脑白质损伤。OPCs迁移受阻是已知许多脱髓鞘疾病的主要原因之一,因此确定早产儿脑白质损伤过程中的分子机制显得尤为重要。小RNA（micro RNA）是内源性非编码小RNA,长度约为18–25个核苷酸,其在进化中高度保守,在组织中高度特异,小RNA通过转录后调控在细胞迁移和代谢中发挥着重要的调控作用。OPCs的发育是一个高度协调的过程,受多种内源因素和外源因素（如生长因子、递质受体和表观遗传）的调控,但对于调控OPCs迁移的分子机制的研究仍不明确。本文中,我们优化了早产儿脑白质损伤小鼠模型中的OPCs体外培养流程,通过RNA测序和RT-PCR检测,我们发现在PWMI模型中,micro RNA let-7家族表达水平下降,在体外过表达let-7可促进OPCs的迁移。RNA测序结果提示,Itgav、Nrg1、Nexn和Sulf1可能为let-7在PWMI中潜在的靶基因。此外,人源少突胶质细胞祖细胞的单细胞测序显示人源OPCs属于高度同质性的细胞群,表明这些细胞在临床应用中可能具有治疗脱髓鞘疾病的潜在价值。

关键词：早产儿脑白质损伤少突胶质祖细胞 microRNA let-7 细胞迁移

少突胶质祖细胞移植成功治疗小鼠异染性脑白质营养不良

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中华医学杂志 2006年第22期86卷 1557-1557页

作者：曹贵方清华大学第一附属医院(北京华信医院)神经内科 100016

异染性脑白质营养不良(metachromatic leukodystrophy,MLD)是一种影响酰基硫酸酯酶A(ARSA)表达的遗传性疾病,特征为少突胶质细胞(oligodendrocyte, OL)功能障碍、硫酸脑苷脂的聚集、髓鞘脱失和进行性神经退行性变。

关键词：异染性脑白质营养不良少突胶质细胞祖细胞移植移植治疗小鼠模型造血干细胞移植少突胶质祖细胞神经退行性变中枢神经系统硫酸酯酶

IGF-1诱导脐血间充质干细胞向少突胶质祖细胞分化的研究

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解剖学研究 2012年第6期34卷 428-431页

作者：林凌王玮郭胜斌福建医科大学基础医学院神经生物学研究中心福建福州350004 福建省妇幼保健院福建福州350001

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对脐血间充质干细胞(MSCs)诱导分化的影响。方法第3代纯化的脐血MSCs在含有或无IGF-1的培养基条件下贴壁培养10 d,免疫荧光显色,观察分化为少突胶质祖细胞(O2A)的数量。结果脐血MSCs在不含IGF-1培养... 详细信息

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对脐血间充质干细胞(MSCs)诱导分化的影响。方法第3代纯化的脐血MSCs在含有或无IGF-1的培养基条件下贴壁培养10 d,免疫荧光显色,观察分化为少突胶质祖细胞(O2A)的数量。结果脐血MSCs在不含IGF-1培养基的条件下分化为少突胶质祖细胞的数量较少,而在含有IGF-1的培养基的条件下分化为少突胶质祖细胞的数量明显增加。结论IGF-1可以诱导脐血MSCs向少突胶质祖细胞分化。

关键词：脐血间充质干细胞少突胶质祖细胞胰岛素样生长因子1

bHLH Olig基因在少突胶质细胞形成过程中的作用及与脑室周围白质软化症的关系

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中国实验诊断学 2009年第10期13卷 1479-1481页

作者：张晓璐王宏芳浦昀徐坤李娟吉林大学公共卫生学院卫生检验教研室吉林长春130021

少突胶质细胞是中枢神经系统中形成髓鞘的细胞,是由神经发育过程中的神经上皮细胞亚区产生的神经胶质细胞祖细胞发育而来的.少突胶质细胞因子(Oligodendrocyte lineage gene,Olig)家族属于碱性螺旋-环-螺旋结构(Basic-helix-loop-helix,... 详细信息

少突胶质细胞是中枢神经系统中形成髓鞘的细胞,是由神经发育过程中的神经上皮细胞亚区产生的神经胶质细胞祖细胞发育而来的.少突胶质细胞因子(Oligodendrocyte lineage gene,Olig)家族属于碱性螺旋-环-螺旋结构(Basic-helix-loop-helix,bHLH)转录因子,其碱性区域与DNA相结合,HLH结构区域参与形成二聚体.Olig基因参与少突胶质祖细胞的分化.在人类脑肿瘤和脱髓鞘损伤修复的研究中表明Olig在多种神经系统疾病中都可能发挥作用,本综述着重介绍Olig基因和脑室周围白质软化症(Periventricular leukomalacia,PVL)的关系.

关键词：少突胶质细胞脑室周围白质软化症 bHLH 细胞形成 ig基因中枢神经系统少突胶质祖细胞神经胶质细胞