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半枝莲多糖SBP-2A对小鼠肝癌h22细胞增殖的抑制作用

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中西医结合研究 2022年第6期14卷 373-377页

作者：付杨许晓义宋高臣牡丹江医学院基础医学院黑龙江牡丹江157011

目的探讨半枝莲多糖SBP-2A对小鼠肝癌h22细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养小鼠肝癌h22细胞分为阴性对照组(不加任何药物)、阳性对照组(黄芪多糖200μg/mL)、低剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A 50μg/mL)、中剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A... 详细信息

目的探讨半枝莲多糖SBP-2A对小鼠肝癌h22细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养小鼠肝癌h22细胞分为阴性对照组(不加任何药物)、阳性对照组(黄芪多糖200μg/mL)、低剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A 50μg/mL)、中剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A 100μg/mL)、高剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A 200μg/mL)。MTT比色法检测各组细胞增殖的抑制活性。hE染色观察各组细胞形态学变化。流式细胞术Annexin V/PI双染法检测各组细胞凋亡水平。蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测各组细胞B细胞淋巴瘤2基因(B cell lymphoma 2 gene,Bcl-2)、BCL2关联X蛋白(BCL2-associated X protein,Bax)的蛋白表达水平。结果低、中、高剂量治疗组细胞增殖抑制率明显增加。低、中、高剂量治疗组均较阴性对照组出现一定程度的凋亡形态特征,且高剂量治疗组最为明显。高剂量治疗组细胞凋亡率显著高于阴性对照组及低、中剂量治疗组(P小鼠肝癌h22细胞增殖,其作用机制可能与调控Bax、Bcl-2蛋白表达水平从而促进细胞凋亡有关。

关键词：半枝莲多糖SBP-2A 小鼠肝癌h22细胞细胞凋亡细胞增殖

化积益肝煎对小鼠肝癌h22细胞β-catenin和cyclin D1表达的影响

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云南中医中药杂志 2009年第5期30卷 58-59页

作者：吴滨张红霍达大连医科大学附属第二医院中医科辽宁大连116027 首都医科大学公共卫生与家庭医学学院北京100069

目的:观察化积益肝煎对小鼠肝癌h22细胞抑制作用,并探讨其对肝癌WNT信号传导通路上β-catenin和cyclin D1表达的影响。方法:将接种肝癌h22细胞的小鼠随机分为对照组、化积益肝煎(中药组)、环磷酰胺(西药组)、化积益肝煎+环磷酰胺(中西药... 详细信息

目的:观察化积益肝煎对小鼠肝癌h22细胞抑制作用,并探讨其对肝癌WNT信号传导通路上β-catenin和cyclin D1表达的影响。方法:将接种肝癌h22细胞的小鼠随机分为对照组、化积益肝煎(中药组)、环磷酰胺(西药组)、化积益肝煎+环磷酰胺(中西药组),连续给药15d后处死,剥离瘤组织称重;用免疫组化方法检测β-catenin和cyclin D1表达。结果:中药、西药、中西药合用可明显抑制小鼠肝癌的生长,抑瘤率分别为38.35%、55.48%、70.93%,具有统计学差异(P小鼠肝癌有抑制作用,并对化疗药物有一定的协同增效作用;化积益肝煎可通过影响小鼠肝癌细胞WNT传导通路信号的传导,从而抑制小鼠肝癌细胞的增殖。

关键词：化积益肝煎小鼠肝癌h22细胞 β-catenin cyclin D1

氨氯地平对小鼠肝癌h_(22)细胞的抑制作用及其机制

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中国生物制品学杂志 2010年第4期23卷 408-411页

作者：李卫平黄文静孙洋孙文娟重庆市生物化学与分子药理学重点实验室重庆医科大学药学院药理教研室重庆400016 吉林大学白求恩医学院免疫系长春130021

目的探讨氨氯地平对小鼠肝癌h22细胞的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测氨氯地平对小鼠肝癌h22细胞增殖的影响。建立肝癌h22荷瘤小鼠模型,观察氨氯地平对荷瘤小鼠肿瘤的抑瘤率;hE染色观察肿瘤组织的病理改变;免疫组织化学方法检测... 详细信息

目的探讨氨氯地平对小鼠肝癌h22细胞的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测氨氯地平对小鼠肝癌h22细胞增殖的影响。建立肝癌h22荷瘤小鼠模型,观察氨氯地平对荷瘤小鼠肿瘤的抑瘤率;hE染色观察肿瘤组织的病理改变;免疫组织化学方法检测肿瘤组织中bcl-2和bax蛋白的表达水平。结果氨氯地平作用48h可显著抑制小鼠肝癌h22细胞增殖,且呈剂量依赖性,其半数抑制浓度为5.6×10-3mg/ml。体内试验显示,氨氯地平(3和10mg/kg·d)灌胃给药10d能显著抑制h22荷瘤小鼠肿瘤生长;hE染色可见,氨氯地平给药组小鼠肿瘤细胞核染色变浅,细胞排列紧密;免疫组化显示,氨氯地平给药组小鼠肿瘤组织内bcl-2蛋白表达下调,而bax蛋白表达上调。结论氨氯地平具有明显的抑瘤作用,其抑瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡相关。

关键词：氨氯地平小鼠肝癌h22细胞抗肿瘤作用 bcl-2蛋白 bax蛋白

低强度超声对小鼠肝癌h_(22)细胞抑制效应的初步研究

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激光杂志 2009年第6期30卷 69-69,71页

作者：徐静许川山夏新蜀王昕娜王萍向君彦重庆医科大学超声影像学研究所重庆400010 重庆医科大学附属第二医院康复理疗中心重庆400010 重庆医科大学附属第一医院康复医学科重庆400016

目的:观察低强度超声对小鼠肝癌h22细胞体外生长的影响。方法:以低强度超声辐照小鼠肝癌h22细胞,采用倒置显微镜观察和MTT法检测观察超声对小鼠肝癌h22细胞的抑制作用。结果:低强度超声波能够显著抑制小鼠肝癌h22细胞的增殖,并且跟辐照... 详细信息

目的:观察低强度超声对小鼠肝癌h22细胞体外生长的影响。方法:以低强度超声辐照小鼠肝癌h22细胞,采用倒置显微镜观察和MTT法检测观察超声对小鼠肝癌h22细胞的抑制作用。结果:低强度超声波能够显著抑制小鼠肝癌h22细胞的增殖,并且跟辐照时间呈剂量依赖关系。辐照后24h其MTT光吸收值随着超声作用时间的延长而显著降低。结论:低频超声辐照对小鼠肝癌h22细胞体外生长具有明显的抑制作用。

关键词：低强度超声细胞抑制小鼠肝癌h22细胞

沙冬青提取物(JA1)对小鼠肝癌h_(22)细胞体外增殖和皮下移植生长的抑制

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中国兽医学报 2007年第5期27卷 710-714页

作者：贾宁方梅甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

采用噻唑蓝(MTT)还原法测定梯度浓度的沙冬青提取物(JA1)对体外培养小鼠肝癌细胞株h22增殖的影响;同时对皮下移植肿瘤h22小鼠灌服不同剂量的JA1以检测抑瘤率,进一步采用流式细胞术、光镜和透射电子显微镜技术,检测和观察JA1对小鼠移植... 详细信息

采用噻唑蓝(MTT)还原法测定梯度浓度的沙冬青提取物(JA1)对体外培养小鼠肝癌细胞株h22增殖的影响;同时对皮下移植肿瘤h22小鼠灌服不同剂量的JA1以检测抑瘤率,进一步采用流式细胞术、光镜和透射电子显微镜技术,检测和观察JA1对小鼠移植性肿瘤h22的诱导凋亡作用。结果显示,JA1可显著抑制体外培养小鼠肝癌h22细胞的增殖,并且这种抑制存在浓度和时间关系。同时,JA1对小鼠皮下移植性肿瘤h22也有明显的抑制作用。流式细胞分析表明,JA1灌胃试验组瘤组织细胞DNA直方图上见有明显的凋亡峰;在光镜和电镜下,JA1灌胃试验组也见有明显的瘤细胞凋亡,表明JA1对体内、外h22细胞的增殖抑制是以诱导凋亡为基础的。

关键词：沙冬青提取物(JA1) 抑制小鼠肝癌h22细胞凋亡

氨氯地平对小鼠肝癌h22体内外抗肿瘤作用研究

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氨氯地平对小鼠肝癌H22体内外抗肿瘤作用研究

作者：李卫平重庆医科大学

学位级别：硕士

钙离子作为细胞内的重要信使,参与细胞多种重要功能的调节。氨氯地平,属于二氢吡啶类选择性L型钙离子通道阻滞剂,大量研究表明,其通过阻断细胞膜上的L型钙通道,在心血管系统疾病的治疗方面具有良好疗效。近年来亦有研究发现氨氯地平在... 详细信息

钙离子作为细胞内的重要信使,参与细胞多种重要功能的调节。氨氯地平,属于二氢吡啶类选择性L型钙离子通道阻滞剂,大量研究表明,其通过阻断细胞膜上的L型钙通道,在心血管系统疾病的治疗方面具有良好疗效。近年来亦有研究发现氨氯地平在抗肿瘤增殖以及影响肿瘤细胞增殖相关蛋白表达方面具有作用[1,2]。本实验通过研究氨氯地平对小鼠肝癌h22细胞的体内外抗肿瘤作用,进一步探讨氨氯地平在抗肿瘤方面的作用机制,为以氨氯地平为代表的钙拮抗药物在抗肿瘤方面的临床应用提供一定的实验依据。目的:探讨氨氯地平对小鼠肝癌h22的体内外抗肿瘤作用,并分析其可能的作用机制。方法:采用MTT法,设立氨氯地平(28×10、14×10、7×10、3.5×10、1.75×10mg/mL)五个浓度梯度组,分别作用24h、36h、48h,检测其对小鼠肝癌h22细胞不同作用时间和不同浓度下细胞增殖的影响;建立小鼠肝癌h22荷瘤小鼠模型,通过抽取腹水瘤小鼠体内肿瘤细胞接种至小鼠腋下的方式,将小鼠划分为四个不同药物作用小组(氨氯地平3 mg/kg.d组、氨氯地平10mg/kg.d组、5-FU 10 mg/kg.3d组、生理盐水0.1 ml/10g.d组),连续灌胃10 d处死小鼠,剥离肿瘤组织并称取瘤重,观察氨氯地平对小鼠体内肿瘤的抑制作用,并采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织切片中细胞凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白的表达水平;流式细胞仪(FCM)检测1/2IC氨氯地平组和IC氨氯地平组处理48h后的小鼠肝癌h22细胞周期的变化情况,观察氨氯地平对肿瘤细胞周期的阻滞作用;收集经不同浓度1/2IC氨氯地平浓度组,IC氨氯地平浓度组,空白组,5-FU 0.38μmol·L组,作用48h后的小鼠肝癌h22细胞,通过免疫组化和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测氨氯地平对小鼠肝癌h22细胞周期蛋白Cyclin B1、凋亡基因p53表达的影响。结果: MTT法检测发现,氨氯地平对小鼠肝癌h22具有抗增殖作用,并呈剂量和时间依赖性。经中效方程计算得氨氯地平对小鼠肝癌h22细胞的半数抑制浓度(IC)为13.4μmol·L。体内抗肿瘤实验研究发现,高剂量氨氯地平组(10mg/kg.d组)对小鼠肝癌h22有明显的抑制作用,以生理盐水组为对照,其抑瘤率高达40.5 %。免疫组化学方法研究发现,氨氯地平对细胞凋亡重要调控基因bcl-2、bax蛋白表达存在明显影响,其中小鼠肝癌h22细胞bcl-2蛋白存在表达下降,而bax蛋白存在高表达现象,bcl-2/bax比例也有明显的下调趋势。流式细胞仪检测发现,经氨氯地平作用48h,小鼠肝癌h22细胞被阻滞于细胞周期G2期,并剂量依赖性的发生凋亡。在此基础上通过免疫组化和RT-PCR方法检测发现,氨氯地平13.4μmol·L组可显著提高凋亡基因p53表达,降低细胞周期蛋白Cyclin B1的表达。结论:氨氯地平对小鼠肝癌h22细胞具有体内外抗增殖作用及促进细胞凋亡作用,此作用与上调凋亡相关基因和下调细胞周期相关蛋白表达有关。

关键词：氨氯地平抗肿瘤小鼠肝癌h22细胞细胞周期

猫人参注射液对两种肝癌细胞及正常肝细胞的体外作用观察

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辽宁中医杂志 2015年第6期42卷 1292-1293页

作者：沈旭波谢国群毛慧娟李柏俞超芹顾伟上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院上海200437 上海中医药大学上海201203 第二军医大学附属长海医院上海200433

目的:观察猫人参注射液体外对两种肝癌细胞株及正常肝细胞增殖的影响。方法:将人肝癌BEL-7402细胞株、小鼠肝癌h22细胞株和人正常肝细胞L-02细胞株进行体外培养,采用MTT法测定不同浓度、不同时间猫人参注射液的体外抑制作用。结果:猫人... 详细信息

目的:观察猫人参注射液体外对两种肝癌细胞株及正常肝细胞增殖的影响。方法:将人肝癌BEL-7402细胞株、小鼠肝癌h22细胞株和人正常肝细胞L-02细胞株进行体外培养,采用MTT法测定不同浓度、不同时间猫人参注射液的体外抑制作用。结果:猫人参注射液对人肝癌BEL-7402细胞和小鼠肝癌h22细胞具有较强抑制作用,对L-02细胞在较低浓度下抑制作用不明显。结论:猫人参注射液在体外对人肝癌BEL-7402细胞和小鼠肝癌h22细胞具有较强的抑制作用,而在较低浓度下对于L-02细胞则无明显抑制作用。

关键词：人肝癌细胞小鼠肝癌h22细胞人正常肝细胞中药注射剂 MTT法

重组纤粘连蛋白多肽Ch50对小鼠h22肝癌移植瘤的治疗作用

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华中医学杂志 2006年第4期30卷 304-306页

作者：于智睿熊婷张书辰华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院过敏反应科

目的探讨尾静脉转染Ch50多肽真核表达载体pCh510对肿瘤的治疗作用及其可能的分子机制。方法尾静脉注射Ch50多肽真核表达载体pCh510，RT-PCR检测该质粒在BALB／c小鼠肌肉和肝脏中的表达，以h22肝癌细胞接种于小鼠右后腿肌肉内，建立小鼠... 详细信息

目的探讨尾静脉转染Ch50多肽真核表达载体pCh510对肿瘤的治疗作用及其可能的分子机制。方法尾静脉注射Ch50多肽真核表达载体pCh510，RT-PCR检测该质粒在BALB／c小鼠肌肉和肝脏中的表达，以h22肝癌细胞接种于小鼠右后腿肌肉内，建立小鼠肝癌移植瘤模型，将小鼠分成3组，经尾静脉分别注射pCh510（C组）、pcDNA3．1（P组）和生理盐水（S组），肿瘤接种后第2天开始，每隔2天对小鼠进行治疗。hE染色观察治疗后肿瘤生长、侵袭和血管形成的改变。RT-PCR比较经Ch50多肽处理的肿瘤细胞中口αv、β83和cdc2的mRNA表达。结果小鼠肌肉和肝脏内均可检测到Ch50多肽的表达，持续表达48-72h。治疗后C组的小鼠移植肿瘤湿重为（0．80±0．18）g，小于P组的（1．75±0．23）g，也小于S组的（2．02±0．38）g，均有显著性差异（P〈0．05），P、S组间无显著性差异。Ch50多肽治疗可抑制肿瘤细胞侵袭生长和肿瘤血管生成。Ch50多肽可下调h22细胞的αv、β3、cdc2基因的表达水平。结论非定向转染表达Ch50多肽有较好的肿瘤治疗作用，这可能与Ch50多肽干扰了αvβ3的功能有关。

关键词：肝肿瘤实验性 Ch50多肽小鼠肝癌h22细胞非定向转染整合素αvβ3

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氟尿嘧啶和长春瑞滨多靶点抗肿瘤作用研究

氟尿嘧啶和长春瑞滨多靶点抗肿瘤作用研究

作者：刘恩甫河北医科大学

学位级别：硕士

肿瘤已成为严重威胁人类健康的常见病、多发病,其死亡率在发达国家居第1位,在发展中国家居第2位,而且今年发病率仍呈上升趋势。因此,近40年来攻克肿瘤就一直是各国政府与科研、医疗机构的主要任务之一,其中化疗作为肿瘤四大常规治疗方... 详细信息

肿瘤已成为严重威胁人类健康的常见病、多发病,其死亡率在发达国家居第1位,在发展中国家居第2位,而且今年发病率仍呈上升趋势。因此,近40年来攻克肿瘤就一直是各国政府与科研、医疗机构的主要任务之一,其中化疗作为肿瘤四大常规治疗方法之一,已成为肿瘤治疗不可缺的手段。肿瘤化疗的根本目的是在保证患者安全的情况下以药物消灭肿瘤细胞,但是,由于恶性肿瘤细胞与正常细胞间缺少根本性的代谢差异,故目前临床上所有的抗肿瘤化疗药都不能完全避免对正常组织的损害,而且在多数情况下造成病人不得不因为这些损害而被迫停药。因此,如何提高肿瘤组织对化疗的敏感性,保护正常组织免受化疗的损害从而减轻毒副作用,是目前恶性肿瘤综合治疗研究的一个重要课题。近年分子肿瘤学、分子药理学、癌症细胞生物学的研究进展表明,癌症是一种至少由2种以上癌基因经多阶段变化所致的多基因疾病。这不仅为癌症的防治提供了不少新靶点、新领域,也使抗肿瘤药物研究从寻找传统的细胞毒性药物,逐渐转向针对肿瘤发病机制不同环节,寻找可具有多环节作用的新型抗肿瘤药物。因为目前认为,实体瘤的信号传导是一个复杂的、多因素的蛋白网络系统,抑制单一信号传导往往不足以遏制肿瘤的发展。而且多项临床试验也显示,多靶点抑制剂在治疗方面优于单靶点抑制剂,如ZD6474和COX2抑制剂可通过影响数个分子靶点而发挥防治肿瘤作用;COX2抑制剂与传统化疗药联用也可增强抗癌效果。既然多靶点抑制剂在治疗方面优于单靶点抑制剂,既然不同作用机制的化疗药联用可增强疗效也在于使它们各自的单靶点抑制形成了多靶点抑制,那末,我们就可以将疗效肯定、机制明确的常用化疗药,通过正交设计进行适当的配伍,并找到既可使它们通过作用于肿瘤信号传导的不同靶点而发挥协同抗肿瘤作用,又不表现各自的毒性的剂量,从而制备出新型多靶点复方抗肿瘤药物。这要比寻找新型多靶点作用的抗肿瘤药物容易得多。因此,有理由相信多靶点肿瘤信号传导抑制剂将在肿瘤治疗中扮演越来越重要的角色,两种或两种以上的化疗药物联合应用也将成为临床上越来越常用的化疗方案。多靶点联合阻断信号传导是肿瘤治疗和药物开发的发展方向。本研究拟采用MTT法分别测定氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、吉西他滨(GEM)和长春瑞滨(VRB)四种已知化疗药物抑制小鼠肝癌h细胞生长的量效关系曲线,选取各药对h细胞抑制率小于30%的剂量进行不同的配伍,观察5-FU、DDP、GEM和VRB不同药物和剂量配伍对小鼠肝癌h细胞生长的抑制作用,以确定由以上四药组成新型多靶点复方抗肿瘤药物的最佳配伍,并对其进行进一步的体内、外抗肿瘤作用和机制的分析。一、氟尿嘧啶、顺铂、长春瑞滨和吉西他滨抗肿瘤最佳剂量及配伍筛选目的:寻找5-FU、DDP、GEM、VRB最佳组合方案。方法:(1)MTT法测定5-FU、DDP、GEM和VRB各药抑制h细胞生长的剂量-效应曲线,从中选出抑制率低于30%的剂量点。(2)以确定的剂量的5-FU、DDP、GEM和VRB不同配伍组合,MTT法检测各组合对h细胞生长的抑制作用,选出最佳组合。结果: 1各药单用对肝癌h细胞的生长抑制作用 5-FU、DDP、GEM和VRB抑制h细胞生长的IC50分别为490.79,10.01,0.021,16.49μmol/L。而各药低于抑制h细胞生长IC30的剂量:5-FU为0.00128、0.0064、0.032、0.16、0.8μmol/L,DDP为0.15625、0.3125、0.625、1.25、2.5、5μmol/L,GEM为0.000128、0.00064、0.0032μmol/L,VRB为5×10-7、5×10-6、5×10-5、5×10-4、5×10-3μmol/L。 2联合用药对肝癌h细胞生长的抑制作用在各药物的两两组合、三三及四四组合中,以5-FU(0.8μmol/L)+VRB(0.005μmol/L)和5-FU(0.8μmol/L)+DDP(5μmol/L)+VRB(0.005μmol/L)组合对h细胞生长的抑制最为明显。5-FU(0.8μmol/L)+VRB(0.005μmol/L)对h细胞生长的抑制率为40.84%±6.17%,显著高于5-FU(21.34%±4.26%)或VRB(21.1%±11.44%)单独应用(Ph细胞生长的抑制率为41.06%±3.78%,与5-FU+VRB组合比较无明显差异。因而药物最佳作用的组合为5-FU(0.8μmol/L)+VRB(0.005μmol/L)。结论:5-FU(0.8μmol/L)和VRB(0.005μmol/L)低剂量联合应用对h细胞的生长抑制具有显著协同作用,有望成为以上四种作用机制不同的

关键词：氟尿嘧啶长春瑞滨 MTT 乳酸脱氢酶凋亡小鼠肝癌h22细胞 h22荷瘤小鼠