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TLS9a核酸适配体对小鼠肝癌细胞的靶向作用研究

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重庆医学 2017年第26期46卷 3623-3625,3628页

作者：魏莉平王镀津邹甜甜费安兴湖北省黄石市妇幼保健院团城山院区检验科 435000 湖北省黄石市中心医院检验科 435000

目的探讨TLS9a核酸适配体对小鼠肝癌细胞的靶向作用。方法制备马来酰亚胺修饰的装载阿霉素的脂质体(liposome),合成FITC荧光及巯基修饰的TLS9a核酸适配体,并将其耦联到脂质体表面。紫外分光光度法检测阿霉素包封率。动态光散射法(DLS)... 详细信息

目的探讨TLS9a核酸适配体对小鼠肝癌细胞的靶向作用。方法制备马来酰亚胺修饰的装载阿霉素的脂质体(liposome),合成FITC荧光及巯基修饰的TLS9a核酸适配体,并将其耦联到脂质体表面。紫外分光光度法检测阿霉素包封率。动态光散射法(DLS)测纳米粒子粒径大小及电位分布,倒置荧光显微镜观察小鼠肝癌细胞对阿霉素摄入及用流式细胞技术检测平均荧光强度,评估小鼠肝癌细胞对药物摄入量。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性。结果流式细胞术检测TLS9a核酸适配体与BNL.1ME.A.7R.1小鼠肝癌细胞结合率为54.1%,TLS9a耦联的脂质体平均粒径分布在(116.0±5.0)nm。TLS9aliposome/DOX在pH 5.0的环境中可以快速释放化疗药物DOX,72h药物释放量超过70%。TLS9a-liposome/DOX在体外能够有效抑制小鼠肝癌细胞BNL.1ME.A.7R.1生长。结论 TLS9a核酸适配体可以特异性与小鼠肝癌细胞BNL.1ME.A.7R.1结合,可用于检测小鼠肝癌细胞。

关键词：肝肿瘤核酸适配体 TLS9a 靶向治疗小鼠肝癌细胞

明日叶查尔酮对小鼠肝癌细胞PCNA和BCL-2蛋白表达的影响

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毒理学杂志 2011年第1期25卷 33-36页

作者：孙赫钟进义孟扬青岛大学医学院预防医学系山东青岛266021

目的研究明日叶(Angelica keiskei Koidz)查尔酮对小鼠肝癌细胞PCNA和BCL-2蛋白表达的影响。方法将50只皮下接种肝癌H22细胞株的小鼠随机分为5组,每组10只。高、中、低剂量组分别每日经口灌胃给予40、20和5 mg/kg的查尔酮,肿瘤对照组给... 详细信息

目的研究明日叶(Angelica keiskei Koidz)查尔酮对小鼠肝癌细胞PCNA和BCL-2蛋白表达的影响。方法将50只皮下接种肝癌H22细胞株的小鼠随机分为5组,每组10只。高、中、低剂量组分别每日经口灌胃给予40、20和5 mg/kg的查尔酮,肿瘤对照组给予等量生理盐水,连续10d,环磷酰胺组隔天腹腔注射环磷酰胺20 mg/kg。取肝癌组织用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测各组小鼠肝癌细胞增殖活性,免疫组化法检测各组肝癌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡相关蛋白BCL-2表达水平。结果高剂量查尔酮组和肿瘤对照组的肝癌细胞增殖活性分别为(0.716±0.018)和(1.135±0.032),差异有统计学意义(P小鼠肝癌细胞PCNA和BCL-2表达水平,对肝癌细胞增殖有一定抑制作用。

关键词：查尔酮小鼠肝癌细胞增殖活性 PCNA BCL-2

Caveolin-1在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中的稳定表达及其对细胞生长的影响

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Caveolin-1在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中的稳定表达及其对细胞生长的...

作者：汪淑晶大连医科大学

学位级别：硕士

背景与目的胞膜窖(caveolae)是50～100 nm烧瓶状的细胞膜结构,和信号传导密切相关。窖蛋白-1(caveolin-1)是胞膜窖的主要结构成分,在细胞内吞、胆固醇运输、信号传导、肿瘤转化中发挥着重要的作用。研究表明,几乎所有正常细胞均有caveol... 详细信息

背景与目的胞膜窖(caveolae)是50～100 nm烧瓶状的细胞膜结构,和信号传导密切相关。窖蛋白-1(caveolin-1)是胞膜窖的主要结构成分,在细胞内吞、胆固醇运输、信号传导、肿瘤转化中发挥着重要的作用。研究表明,几乎所有正常细胞均有caveolin-1的表达,而在大多数肿瘤细胞如乳腺癌细胞和肺癌细胞中, caveolin-1表达下降或无表达,重新表达caveolin-1会抑制肿瘤细胞生长及肿瘤细胞集落的形成,反义核酸抑制caveolin-1表达则会增强细胞转化能力,提示caveolin-1可能具有抑瘤作用,因此caveolin-1基因被许多学者认为是候选的抑癌基因。然而近年研究表明,在前列腺癌细胞和膀胱癌细胞中caveolin-1高表达,而且表达水平与前列腺癌细胞和膀胱癌细胞细胞淋巴道转移潜能呈正相关;通过RNAi下调caveolin-1的表达能够抑制肿瘤细胞的生长、转化及转移能力,因此caveolin-1还被认为是淋巴道转移相关基因。所以,深入研究caveolin-1在不同肿瘤细胞中的作用有重要的意义。目前,有关caveolin-1和肝癌转移方面的报道很少。本课题组前期工作表明,在HCa-F(高淋巴道转移株)中caveolin-1表达量高于HCa-P(低淋巴道转移株)和Hepa 1-6 (无淋巴道转移),在Hepa 1-6细胞中没有检测到caveolin-1的表达,提示caveolin-1在小鼠肝癌细胞淋巴道转移中发挥作用。本文旨在通过克隆小鼠caveolin-1cDNA、构建其表达载体并将其稳定表达于小鼠肝癌细胞Hepa1-6中,观察Hepa1-6细胞生物学的变化,为进一步研究caveolin-1在小鼠肝癌细胞淋巴道转移中发挥作用提供实验基础。方法1.从小鼠肺组织中提取总RNA,利用caveolin-1特异性引物经

关键词： caveolin-1 小鼠肝癌细胞稳定表达肿瘤转移

窖蛋白Caveolin-1磷酸化对在小鼠肝癌细胞中CD147糖基化的影响

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窖蛋白Caveolin-1磷酸化对在小鼠肝癌细胞中CD147糖基化的影响

作者：汪晓敏大连医科大学

学位级别：硕士

目的:胞膜窖,又成为Caveolae,是细胞膜直径约50-100nm的微区域(microdomain),大量存在于内皮细胞,脂肪细胞,血管平滑肌细胞,纤维母细胞和肺上皮细胞,参与多种细胞生命活动,例如细胞内吞、胆固醇运输、细胞膜组装、信号传导和肿瘤生成等... 详细信息

目的:胞膜窖,又成为Caveolae,是细胞膜直径约50-100nm的微区域(microdomain),大量存在于内皮细胞,脂肪细胞,血管平滑肌细胞,纤维母细胞和肺上皮细胞,参与多种细胞生命活动,例如细胞内吞、胆固醇运输、细胞膜组装、信号传导和肿瘤生成等。窖蛋白Caveolin是Caveolae上的特征分子,可与细胞增殖相关的信号分子如H-Ras、c-Src、eNOS、G蛋白等相互作用,参与细胞内物质交换、细胞内外信号传递、组装和浓缩。Caveolin-1分子量22kDaa,由178个氨基酸组成, N端和C端游离在胞浆内,位于N端的第14酪氨酸残基( Try14)对结合和募集c- Src/Grb7复合物非常重要,这个残基在v- Src癌基因转化的细胞中持续性磷酸化,在生长因子刺激发生暂时性的磷酸化。磷酸化的Try14能结合Grb7并能增强锚定非依赖性的生长和EGF刺激的细胞迁移。因此,酪氨酸磷酸化的Caveolin- 1象一些生长因子受体一样能够招募SH2结构域的蛋白集中到胞膜发挥作用。研究表明,几乎正常细胞均有Caveolin-1的表达,而在乳腺癌细胞和肺癌细胞中, Caveolin-1表达下降或无表达,因此Caveolin-1基因被许多学者认为是候选的抑癌基因。然而近年研究表明,在前列腺癌细胞和膀胱癌细胞中Caveolin-1高表达,而且表达水平与前列腺癌细胞和膀胱癌细胞细胞淋巴道转移潜能呈正相关。所以,深入研究Caveolin-1在不同肿瘤细胞中的作用有重要意义,Caveolin-1已成为近来肿瘤研究的热点。单次跨膜糖蛋白CD147是免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily,IGSF)的一员,在许多恶性肿瘤细胞的表面富集,作为存在于肿瘤细胞表面的一种粘附分子,介导肿瘤细胞和基质之间的相互作用,诱导成纤维细胞和肿瘤细胞自身基质金属酶MMPs生成,加速肿瘤血管的生成,从而促进肿瘤转移。CD147细胞外2个免疫球蛋白区分别具有激活MMPs和结合Caveolin-1的活性胞外区还含有3个Asn糖基化位点。CD147分子糖基化的程度决定了其激活MMPs的能力,纯化的去糖基化的CD147分子不能诱导MMPs分泌。CD147分子可与MMPs在肿瘤细胞表面形成复合物,使得MMPs聚集在肿瘤细胞周围,有利于肿瘤细胞周围基质的降解,使其易于转移和扩散。目前,我们课题组已经发现,在HCa-F(高淋巴道转移株)中Caveolin-1表达量高于HCa-P(低淋巴道转移株),在Hepa 1-6(无淋巴道转移)无Caveolin-1的表达,提示Caveolin-1在小鼠肝癌细胞淋巴道转移中可能发挥作用。通过RNA干扰技术特异性使小鼠肝癌细胞株Hca-F中Caveolin-1表达下调,观察对CD147糖基化的影响。Westen Blot结果显示,Hca-F/RNAi细胞中Caveolin-1的蛋白表达与未给予RNA干扰处理的对照组及RNA干扰对照组相比明显下调;同时HG-CD147表达减少,LG-CD147表达增加;且MMPs-11蛋白表达随HG-CD147表达下降而下调。体外迁移、侵袭实验结果显示,与未给予RNA干扰处理的对照组及RNA干扰对照组相比,Hca-F/RNAi细胞迁移及穿过基质胶的侵袭能力下降。结果显示,下调Hca-F细胞中Caveolin-1表达,不但影响HG-CD147表达水平,而且下调MMPs-11蛋白质表达;同时下调的Caveolin-1抑制Hca-F/RNAi细胞体外迁移、侵袭能力。本文针对Caveolin-1﹑CD147糖基化的关系,通过克隆小鼠Caveolin-1cDNA,突变Caveolin-1磷酸化位点,构建其表达载体,将其稳定表达于小鼠肝癌细胞Hepa1-6中,观察稳定转染Caveolin-1磷酸化突变体的Hepa1-6细胞及稳定转染野生型Caveolin-1的Hepal-6细胞对CD147糖基化的影响,为进一步研究Caveolin- 1、CD147在小鼠肝癌细胞淋巴道转移中的作用提供基础。方法:1.突变Caveolin-1的磷酸化位点,克隆至PMD18-T simple vector,亚克隆至真核表达载体质粒pcDNA3.1,经转化、抗生素初步筛选、限制性核酸内切酶酶切和DNA测序获得重组质粒pcDNA3.1/Caveolin-1(Y14F)。2.将克隆至PMD18-T simple vector的Caveolin-1(wt),亚克隆至真核表达载体质粒pcDNA3.1,经转化、抗生素初步筛选、限制性核酸内切酶酶切和DNA测序获得重组质粒pcDNA3.1/Caveolin-1(wt)。3.利

关键词： Caveolin-1 小鼠肝癌细胞磷酸化糖基化 CD147

外泌体CXCR4横向转运促进小鼠肝癌细胞迁移、侵袭和淋巴管生成能力

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外泌体CXCR4横向转运促进小鼠肝癌细胞迁移、侵袭和淋巴管生成能力

作者：李敏大连医科大学

学位级别：硕士

研究背景:转移是造成大多数恶性肿瘤患者死亡的主要原因。迁移和侵袭是肿瘤细胞转移的先决条件,趋化因子受体及其配体之间的相互作用在肿瘤细胞迁移和侵袭过程中发挥十分重要的作用,靶器官特异性表达的趋化因子与肿瘤细胞表达的相应受... 详细信息

研究背景:转移是造成大多数恶性肿瘤患者死亡的主要原因。迁移和侵袭是肿瘤细胞转移的先决条件,趋化因子受体及其配体之间的相互作用在肿瘤细胞迁移和侵袭过程中发挥十分重要的作用,靶器官特异性表达的趋化因子与肿瘤细胞表达的相应受体参与转移器官的选择。关于趋化因子受体CXCR4(CXC chemokine recepter-4)及其配体SDF-1a(stromal cell-derived factor-1a)在肿瘤转移中的作用已在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌和肝癌等多种肿瘤中被报道。外泌体是最近发现的纳米级(直径30-150 nm)双层脂质膜性小囊泡,内含脂质、核酸(DNA、m RNA、非编码RNA)和蛋白质等成分。外泌体可被受体细胞摄取,通过转移其内容物而影响受体细胞生物学行为。研究表明肿瘤细胞分泌的外泌体可在肿瘤细胞增殖、血管生成和肿瘤侵袭转移等过程中发挥重要作用。Hca-F和Hca-P是一对来源于同一亲本细胞、具有不同淋巴道转移能力的小鼠腹水型肝癌细胞株,接种于615小鼠足垫后Hca-F细胞的淋巴道转移力高于70%,而Hca-P细胞的淋巴结转移率则低于30%,但其发生机制尚不清楚。我们此前的研究表明,Hca-F和Hca-P细胞表面表达的CXCR4可与615小鼠淋巴结匀浆中的SDF-1a结合,诱导Hca-F和Hca-P细胞分泌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2),从而促进细胞的迁移和侵袭能力,而且Hca-F细胞表达的CXCR4水平明显高于Hca-P细胞,产生的MMP-9和MMP-2也更多。但外泌体源性CXCR4在小鼠肝癌细胞侵袭转移方面的作用和机制尚未见报道。目的:(1)探讨高转移力Hca-F细胞来源外泌体促进低转移力Hca-P细胞迁移和侵袭能力与趋化因子受体CXCR4的关系;(2)探讨Hca-F细胞来源的外泌体促进淋巴内皮细胞增殖和淋巴管形成能力与CXCR4的关系。方法:(1)无外泌体血清培养Hca-F和Hca-P细胞,通过超速离心(100000g/分钟)提取外泌体(分别标记为F-Exo和P-Exo),应用透射电子显微观察细胞外囊泡的直径和形态,Western blot检测外泌体特有膜表面分子CD63和HSP70蛋白表达,验证提取外泌体的可靠性。(2)利用荧光染料PKH26将F-Exo染成红色,与受体细胞Hca-P(事先用DAPI染核呈蓝色)共孵育,激光共聚焦显微镜下观察受体细胞中带有红色荧光的外泌体摄取情况。(3)利用脂质体Lipofectamine2000转染CXCR4的小干扰RNA(si RNA)(si CXCR4组),以si RNA无关序列(NC组)和Hca-F细胞本身(Control组)作为阴性对照。(4)常规Transwell小室(8.0mm孔径)迁移和侵袭实验分别检测外泌体CXCR4、SDF-1a和淋巴内皮细胞(LEC)孵育对小鼠肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。(5)使用外泌体形成和释放抑制剂GW4869处理Hca-F细胞后,通过Transwell小室(含0.4mm孔径薄膜,可阻止大于外泌体的颗粒通过)与Hca-P细胞共孵育,检测抑制外泌体分泌对小鼠肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。(6)应用淋巴管形成实验和CCK-8细胞增殖实验检测外泌体对淋巴内皮细胞增殖和形成淋巴管能力的影响。(7)细胞中和外泌体中CXCR4 m RNA和蛋白表达水平分别通过SYBR Green染料法q RT-PCR和Western blot检测;Western blot检测与转移相关的蛋白MMP-9、MMP-2和VEGF-C的表达水平。结果:(1)透射电子显微镜下可见所提取的囊泡呈球状,直径约30-100 nm,含双层膜,符合外泌体的形态特征;Western blot结果显示外泌体的标记物CD63、HSP70在提取的囊泡中表达明显,b-tubulin则在细胞中表达明显,表明外泌体提取成功。(2)激光共聚焦显微镜下可见细胞核被蓝色荧光染料DAPI标记的Hca-P细胞的胞浆内含有红色荧光染料PKH26标记的外泌体,表明F-Exo可被Hca-P细胞摄取。(3)Transwell小室迁移实验(无基质胶包被)结果显示与Hca-F细胞外泌体共孵育的Hca-P细胞(Hca-P+F-Exo组)穿膜细胞数(400±2.6)显著多于Hca-P细胞本身(228±9.3),差别显著(P细胞数(229±3.8)显著多于Hca-P组(98±5.1),差异具有统计学意义(P细胞(Hca-P+F-Exo组)中CXCR4蛋白表

关键词：外泌体 SDF-1a/CXCR4 淋巴结转移小鼠肝癌细胞

核桃楸皮粗多糖抑制小鼠肝癌细胞H_(22)研究

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实验室科学 2014年第3期17卷 30-31,34页

作者：雷涛潘艳明孟繁钦吴宜艳牡丹江医学院药学院黑龙江牡丹江157011

目标:研究核桃楸皮粗多糖体外抑制小鼠肝癌细胞的能力。方法:以1.5mL离心管为细胞培养容器,用MTT法在492nm检测抑制效果。结果:核桃楸皮粗多糖有较强的抑制H22增值的能力,IC50=0.04932mg/mL(粗多糖);IC50=0.035273mg/mL(5-Fu)(IC50半数... 详细信息

目标:研究核桃楸皮粗多糖体外抑制小鼠肝癌细胞的能力。方法:以1.5mL离心管为细胞培养容器,用MTT法在492nm检测抑制效果。结果:核桃楸皮粗多糖有较强的抑制H22增值的能力,IC50=0.04932mg/mL(粗多糖);IC50=0.035273mg/mL(5-Fu)(IC50半数抑制剂的浓度)。

关键词：核桃楸皮粗多糖 MTT 小鼠肝癌细胞

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乙醇诱导小鼠肝癌细胞凋亡的方法研究

中外医疗 2008年第22期27卷 166-页

作者：于明燕高立芬山东大学医学院免疫学研究所

目的研究乙醇诱导小鼠肝癌细胞凋亡的方法。方法不同浓度的乙醇与小鼠肝癌细胞共培养6h后观察细胞凋亡率。结果乙醇与小鼠肝癌细胞共培养6h后,12%的乙醇诱导凋亡的百分率最大。结论乙醇可诱导小鼠肝癌细胞凋亡。

关键词：凋亡小鼠肝癌细胞乙醇

Caveolin-1突变体在小鼠肝癌Hepa1-6细胞中的表达、定位及功能分析

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Caveolin-1突变体在小鼠肝癌Hepa1-6细胞中的表达、定位及功能分析

作者：师伟大连医科大学

学位级别：硕士

背景与目的:Caveolae（胞膜窖）是细胞质膜向内凹陷的一种结构,于1953年由***首次通过电子显微镜在毛细血管内皮中发现。胞膜窖能够介导胞吞、胞饮、胆固醇转运和信号转导。胞膜窖的标志性蛋白是窖蛋白家族（Caveolins）,包括Caveolin-... 详细信息

背景与目的:Caveolae（胞膜窖）是细胞质膜向内凹陷的一种结构,于1953年由***首次通过电子显微镜在毛细血管内皮中发现。胞膜窖能够介导胞吞、胞饮、胆固醇转运和信号转导。胞膜窖的标志性蛋白是窖蛋白家族（Caveolins）,包括Caveolin-1（α,β）,Caveolin-2 （α,β,γ）,Caveolin-3。其中Caveolin-1广泛的存在于组织细胞中,Caveolin-2与Caveolin-1的分布基本相同,Caveolin3主要位于肌细胞中。研究表明Caveolin-1是细胞内许多信号分子相互作用的枢纽,它可通过影响多种信号通路进而影响细胞的增殖、转化、迁移和转移、细胞生存与死亡等细胞行为。目前发现Cav-1具有磷酸化位点,棕榈酰化位点[6],跨膜区,脚手架区（CSD）等功能域,它们在细胞生物学行为中发挥着各自不同的作用。例如:Cav-1可通过CSD区域与相关蛋白作用,进而影响相关蛋白的活性。Cav-1的表达对caveolae形成形态学上的结构起着必要的作用,且在caveolin-1存在的条件下,caveolae通过调节细胞对信号分子的摄取及信号的持续时间进一步影响其下游分子[11]。CD147分子是一种糖基化的（glucosylated）免疫球蛋白超家族（immunoglobulin Superfamily,IGSF）成员,是具有单次跨膜结构的糖蛋白。CD147为N-连接糖蛋白,其糖基化形式主要两种,低糖基化（LG-CD147）和高糖基化（HG-CD147,2kDa）,糖基化形式与肿瘤恶性程度及淋巴道转移潜能有关。CD147又称为基质金属蛋白酶诱导因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN）,能够诱导基质金属蛋白酶（MMPs）在间质和肿瘤细胞内表达并分泌出来。大部分MMPs几乎能够降解细胞外基质和基底膜的全部成分,在肿瘤侵袭和肿瘤转移中发挥着重要的促进作用[12,13]。目前认为HG-CD147在促进MMPs分泌和表达方面比LG-CD147具有更积极的作用。本课题组研究结果表明,在小鼠肝癌细胞HCa-F（高淋巴道转移）中Cav-1表达量高于HCa-P（低淋巴道转移）,而在Hepa 1-6（无淋巴道转移）中无Cav-1的表达,提示Cav-1在小鼠肝癌细胞淋巴道转移中可能发挥作用。进一步通过RNA干扰下调Hca-F细胞中Cav-1的表达时,与对照相比,HG-CD147表达减少,LG-CD147表达增多;同时,MMPs-11表达下调,细胞体外迁移及侵袭能力下降。本文旨构建Cav-1的不同功能域突变体重组真核表达载体,研究其在Hepa1-6细胞中表达、细胞内的定位及对CD147糖基化的影响。方法:1.突变Cav-1的14位磷酸化位点（记为Y14F）,133,143和156位棕榈酰化位点（记为C133A,C143A,C156A）,删除133-178位氨基酸（记为△133-178）,删除跨膜区102-134位氨基酸（记为△TMD）,并将突变体分别与pMD18-T simple vector进行连接,记为T/Cav-1（Y14F）, T/Cav-1（C133A）, T/Cav-1（C143A）, T/Cav-1（C156A）, T/Cav-1（△133-178）, T/Cav-1（△TMD）。再经转化、抗生素初步筛选、限制性核酸内切酶酶切和DNA测序获得初步重组质粒,再经过限制性核酸内切酶酶切、琼脂糖凝胶电泳、DNA纯化,将纯化的DNA产物与真核表达载体pcDNA3.1连接,获得Caveolin-1突变体重组质粒分别记为pcDNA3.1/Cav-1（Y14F）, pcDNA3.1/Cav-1（C133A）,pcDNA3.1/Cav-1（C143A）,pcDNA3.1/Cav-1（C156A）,pcDNA3.1/Cav-1（△133-178）,pcDNA3.1/Cav-1（△TMD）,进行DNA序列分析。2.利用脂质体转染的方法,将以上Caveolin-1突变体重组真核表达载体分别转染至小鼠肝癌细胞Hepa1-6中,记为Hepa1-6/Cav-1（Y14F）, Hepa1-6/Cav-1（C133A） Hepa1-6/Cav-1（C143A）, Hepa1-6/Cav-1（C156A）, Hepa1-6/Cav-1（△TMD） , Hepa1-6/Cav-1（△133-178）,以转染空载体pcDNA3.1的Hepa1-6细胞（记为Hepa1-6/mock）与Hepa1-6细胞作对照。*** blotting检测瞬时

关键词： Caveolin-1 CD147 小鼠肝癌细胞磷酸化棕榈酰化

重组HBsAg真核表达载体的构建及其稳定转染H22细胞的筛选

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中国实验诊断学 2011年第1期15卷 14-16页

作者：周晓晶万敏卫红飞王丽颖吴秀丽吉林大学白求恩医学院分子生物学教研室吉林长春130021 长春中医药大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

目的构建乙肝表面抗原(HBsAg)基因(678bp)的真核表达质粒(pcDNA3-HBsAg),转染小鼠乳肝癌细胞(H22),获得其稳定表达细胞株(H22/HBsAg)。方法用PCR方法从含乙肝病毒(HBV)基因的PUC18-HBV质粒上扩增HBsAg基因序列;经酶切、连接构建pcDNA3-H... 详细信息

目的构建乙肝表面抗原(HBsAg)基因(678bp)的真核表达质粒(pcDNA3-HBsAg),转染小鼠乳肝癌细胞(H22),获得其稳定表达细胞株(H22/HBsAg)。方法用PCR方法从含乙肝病毒(HBV)基因的PUC18-HBV质粒上扩增HBsAg基因序列;经酶切、连接构建pcDNA3-HBsAg;利用改良的阳离子脂质体介导法将其转染入H22细胞,经G418筛选获得阳性克隆细胞株,用RT-PCR法检测阳性细胞株的HBsAg mRNA。结果成功构建了重组HBsAg真核表达载体,并获得了稳定表达HBsAg的细胞株,为进一步的实验研究奠定了基础。

关键词： HBsAg 小鼠肝癌细胞转染