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听力学及言语疾病杂志 2012年第6期20卷 582-583页

作者：张晓强张延平解放军第309医院耳鼻咽喉科北京100091

目的探索一种高效、简便的小体积组织RNA提取方法。方法取单只野生型BALB/c小鼠或GJB2条件敲除小鼠cCx26loxp/loxp-Pax2Cre/+(cCx26ko)P10、P18耳蜗膜迷路组织,采用与EP管底部体积、形状均相似的玻璃研磨棒在裂解液中进行组织破碎,提取... 详细信息

目的探索一种高效、简便的小体积组织RNA提取方法。方法取单只野生型BALB/c小鼠或GJB2条件敲除小鼠cCx26loxp/loxp-Pax2Cre/+(cCx26ko)P10、P18耳蜗膜迷路组织,采用与EP管底部体积、形状均相似的玻璃研磨棒在裂解液中进行组织破碎,提取RNA后用琼脂糖电泳、紫外分光光度计检测所提取RNA的质量和完整性及浓度。结果本实验单只小鼠耳蜗中获得的总RNA紫外光吸光值(260/280)均在1.9～2.1之间,电泳结果显示28S和18S的条带清晰度高,PCR产物扩增出的目的基因片断单一,说明其完整、质量高且纯度高。结论单只小鼠耳蜗总RNA的提取方法操作简便、成本低廉且相对安全和快速,提取效率较高,适合于小体积组织RNA的提取。

关键词：小鼠耳蜗 RNA提取

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耳聋左慈丸对老年性耳聋小鼠耳蜗组织cAMP含量及PKA表达的影响

耳聋左慈丸对老年性耳聋小鼠耳蜗组织cAMP含量及PKA表达的影响

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作者：武莹辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过观察耳聋左慈丸对老年性耳聋模型小鼠耳蜗组织中c AMP的含量及PKA表达的影响,探讨耳聋左慈丸对老年性耳聋的作用机制。材料与方法:选取75只耳廓反应灵敏的雄性清洁级昆明小鼠,随机抽取15只作为空白对照组,腹腔注射生理盐水。剩... 详细信息

目的:通过观察耳聋左慈丸对老年性耳聋模型小鼠耳蜗组织中c AMP的含量及PKA表达的影响,探讨耳聋左慈丸对老年性耳聋的作用机制。材料与方法:选取75只耳廓反应灵敏的雄性清洁级昆明小鼠,随机抽取15只作为空白对照组,腹腔注射生理盐水。剩余60只进行老年性耳聋小鼠造模,腹腔注射D-半乳糖(150mg/kg),每日1次,共60天。造模结束后,将剩余达标的模型小鼠随机分为模型组、耳聋左慈丸低、中、高剂量组。选用生理盐水灌服模型组和空白对照组,耳聋左慈丸低、中、高剂量组给予耳聋左慈丸(0.3、0.6、1.2g/kg)灌服,每日1次,连续14天。运用耳蜗基底膜铺片技术观察小鼠耳蜗毛细胞形态学变化;采用ELISA法检测耳蜗组织中c AMP含量;用免疫组织化学技术检测PKA的蛋白表达水平;用RT-PCR技术检测PKA m RNA表达水平。结果:1.小鼠一般情况的观察空白对照组小鼠:进食饮水正常,反应灵敏有活力,毛发浓密有光泽,经过长时间的饲养体重明显增加,二便正常。模型组小鼠:进食饮水量减少,衰老现象严重,D-半乳糖造模起明显作用,体质虚弱,体重减轻,宜静不宜动,毛发枯槁无光泽并有稀疏脱落现象,出现脊背隆起,精神状态欠佳等老年貌。易于抓取。耳聋左慈丸低、中、高剂量组小鼠:经过灌胃治疗后,与模型组比较各组小鼠上述情况均有不同程度改善,以高剂量组改善最为明显,小鼠情况更接近空白对照组。2.耳蜗形态学观察基底膜铺片空白对照组小鼠:耳蜗内、外毛细胞,清晰可见,细胞大小一致,排列层次分明,界线清晰均匀分布,各层细胞基本无缺失;与空白对照组相比模型组小鼠耳蜗铺片有显著差异,耳蜗内、外毛细胞排列不整齐,分布紊乱,形态大小不一,存在严重的缺失或脱落;与模型组相比耳聋左慈丸治疗各组小鼠耳蜗有所改善,内、外毛细胞排列较整齐,分布较均匀,毛细胞缺失不明显,其中高剂量组与模型组比较差异明显。各组小鼠耳蜗组织匀浆中c AMP含量检测结果:与空白对照组相比,模型组小鼠耳蜗组织匀浆中的c AMP含量显著降低(P耳蜗组织中c AMP含量;低剂量组小鼠耳蜗组织中c AMP含量升高不明显,与模型组比较无统计学差异。4.耳蜗组织PKA的蛋白表达水平各组小鼠耳蜗组织PKA蛋白表水平检测结果:与空白对照组相比,模型组小鼠耳蜗组织的PKA含量显著降低(P耳蜗组织PKA蛋白表达升高(P小鼠PKA的蛋白表达,且服用高剂量最为明显。5.耳蜗组织PKA m RNA表达水平各组小鼠耳蜗组织PKA m RNA表达水平检测结果:与空白对照组相比模型组小鼠耳蜗组织的PKA m RNA表达水平显著降低(P耳蜗组织PKA m RNA表达水平升高(P耳蜗组织中c AMP含量结论:在老年性耳聋发生过程中伴随着c AMP含量及PKA表达水平的变化。给予耳聋左慈丸药物干预后,其耳蜗组织中c AMP的含量及PKA的表达水平均明显升高,说明耳聋左慈丸治疗老年性耳聋可能是通过调节耳蜗组织中c AMP含量及PKA的表达水平实现的。

关键词：耳聋左慈丸老年性耳聋 cAMP PKA 小鼠耳蜗

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小鼠耳蜗核因子-κB P50的表达

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标记免疫分析与临床 2006年第3期13卷 157-159,164,194页

作者：孙建和杨伟炎沙淑花 Jochen Schacht 解放军总医院耳鼻咽喉科研究所北京100853 美国密歇根大学Kresge听力研究所

核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NFκ-B)是许多细胞对各种刺激反应起重要作用的转录因子之一,NF-κB P50是其家族成员。为了显示NF-κB P50在耳蜗的表达,给实验组小鼠皮下注射卡那霉素(kanamycin,KA),或鼓室注射脂多糖(lipopolysacc... 详细信息

核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NFκ-B)是许多细胞对各种刺激反应起重要作用的转录因子之一,NF-κB P50是其家族成员。为了显示NF-κB P50在耳蜗的表达,给实验组小鼠皮下注射卡那霉素(kanamycin,KA),或鼓室注射脂多糖(lipopolysaccharides,LPS),对照组小鼠注射等量生理盐水,用NFκ-B P50兔多克隆抗体(PcAb)免疫组化染色(DAB显色),观察NFκ-B P50在小鼠耳蜗的表达。结果显示:在小鼠耳蜗各圈螺旋韧带、盖膜(TM)、螺旋突、螺旋神经节和神经纤维可观察到较强的表达;Corti器的内毛细胞(inner hair cells,IHC)、外毛细胞(outer hair cells,OHC),内柱细胞(inner pillar cell,IP)、外柱细胞(outer pillar cell,OP)、Deiter细胞(DC)、Hensen细胞(HC)和Claudious细胞的细胞质也有NF-κB P50的表达;IHC、OHC和上述细胞的核及基底膜(B)和对照组均未见表达。注射LPS和KA处理的小鼠耳蜗NFκ-B P50的表达,都比对照小鼠明显增强。注射LPS和KA后3d和7d的小鼠,NF-κB P50的表达没有显著性差别。注射LPS和KA可使NFκ-B P50在小鼠耳蜗产生急性免疫反应。

关键词：转录因子核因子NF-κB P50 小鼠耳蜗免疫组化脂多糖

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小鼠耳蜗核因子-kB P65免疫组化定位

小鼠耳蜗核因子-kB P65免疫组化定位

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第六届全国生物医学体视学学术会议暨第九届全军军事病理学学术会议、第五届全军定量病理学学术会议

作者：孙建和杨伟炎沙淑花 Jochen Schacht 解放军总医院耳鼻咽喉科研究所耳鼻咽喉-头颈外科美国密歇根大学Kresge听力研究所

目的核因子-kB(Nuclear factor-kappa B,NF-KB)是许多细胞对各种刺激反应起重要作用的转移因子之一,为了显示NF-kB 在耳蜗的表达。方法给小鼠皮下注射卡那霉素(kanamycin,KA),鼓室注射粘多糖(LipopolysaccharidesLPS),并注射等量生理盐... 详细信息

目的核因子-kB(Nuclear factor-kappa B,NF-KB)是许多细胞对各种刺激反应起重要作用的转移因子之一,为了显示NF-kB 在耳蜗的表达。方法给小鼠皮下注射卡那霉素(kanamycin,KA),鼓室注射粘多糖(LipopolysaccharidesLPS),并注射等量生理盐水作为对照,用多克隆兔抗体NF-kBp65免疫组化染色,观察NF-kBp65在小鼠耳蜗的表达。结果NF-kBp65主要定位在耳蜗的螺旋缘、盖膜、血管纹、螺旋韧带、螺旋神经节和神经纤维。整个耳蜗各圈均可观察到免疫反应,而螺旋韧带、盖膜、螺旋突、螺旋神经节和神经纤维均可观察到较强的免疫反应,Corti 器的免疫反应比上述结构要弱一些。Corti 器的内、外毛细胞,内、外柱细胞,Deiter 细胞和Claudious 细胞均可观察到NF-kBp65的免疫反应,这些免疫反应在内沟细胞、Hensen 细胞和Claudious 细胞显示较弱,而在螺旋神经节可观察到较强的免疫反应,内、外毛细胞核未见免疫反应。省去NF-kBp65抗体染色未观察到NF-kBp65的阳性反应。结论用脂多糖和卡那霉素处理的小鼠耳蜗NF-kBp65的免疫反应与注射正常生理盐水的小鼠耳蜗可见有显著性差异,而注射脂多糖和卡那霉素3d 和7d NF-rBp65的免疫反应没有显著性差异,注射脂多糖和卡那霉素可使NF-kBp65在耳蜗产生急性反应。

关键词：转录因子核因子 NF-kBp65 小鼠耳蜗免疫组化脂多糖

来源： cnki会议评论

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高脂血症小鼠模型耳蜗中核因子-κB p65的表达

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2010年第7期24卷 289-292页

作者：杜政德余青松向一华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科武汉430022 华中科技大学同济医学院药学院

目的:探讨高脂血症对小鼠耳蜗的影响。方法:20只昆明种小鼠随机平均分为2组,其中1组建立高脂血症模型,另1组作为对照,6周后用多克隆兔抗NF-κB p65免疫组织化学染色,观察NF-κB p65在高脂血症小鼠耳蜗中的表达,并检测小鼠ABR反应阈。结... 详细信息

目的:探讨高脂血症对小鼠耳蜗的影响。方法:20只昆明种小鼠随机平均分为2组,其中1组建立高脂血症模型,另1组作为对照,6周后用多克隆兔抗NF-κB p65免疫组织化学染色,观察NF-κB p65在高脂血症小鼠耳蜗中的表达,并检测小鼠ABR反应阈。结果:在高脂血症小鼠耳蜗中,NF-κB p65主要定位在Corti器、盖膜、血管纹、螺旋韧带、螺旋神经节及其神经纤维,高脂血症小鼠耳蜗NF-κB p65的免疫反应与对照组比较显著增强。高脂血症模型组小鼠ABR反应阈与对照组比较明显增高,差异有统计学意义(P小鼠耳蜗NF-κB p65表达增强,ABR反应阈增高,表明高脂血症可引起小鼠听力损害。

关键词：高脂血症 NF-κB p65 小鼠耳蜗 ABR反应阈免疫组织化学

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