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昆明山海棠诱发小鼠精子 8号染色体不分离的研究

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Acta Genetica Sinica 2002年第3期29卷 217-220页

作者：王晓燕丁银润汪旭云南师范大学生命科学学院昆明650092

应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测了昆明山海棠 (THH)水抽提物在小鼠生殖细胞形成过程中对 8号染色体不分离的诱发效应。以THH水抽提物 (12 0mg/kg、2 4 0mg/kg、4 80mg/kg)腹腔注射昆明种雄性小白鼠 ,于处理 2 2天后取小鼠附睾精子涂... 详细信息

应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测了昆明山海棠 (THH)水抽提物在小鼠生殖细胞形成过程中对 8号染色体不分离的诱发效应。以THH水抽提物 (12 0mg/kg、2 4 0mg/kg、4 80mg/kg)腹腔注射昆明种雄性小白鼠 ,于处理 2 2天后取小鼠附睾精子涂片 ,以生物素标记的 8号染色体着丝粒重复序列探针进行FISH ,结果发现 ,THH在中间剂量组(2 4 0mg/kg)和高剂量组 (480mg/kg)诱发精子 8号染色体非整倍体频率均显著高于溶剂对照 (P 精子频率与溶剂对照无显著差异 (P >0 .0 5 )。研究表明 ,THH在雄性小鼠生殖细胞发育过程中具有染色体不分离诱发效应。

关键词：昆明山海棠非整倍体小鼠精子荧光原位杂交 8号染色体不分离中药材生殖毒性

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小鼠精子巴豆酰化修饰蛋白鉴定及功能探究

小鼠精子巴豆酰化修饰蛋白鉴定及功能探究

作者：杨强震上海交通大学

学位级别：硕士

赖氨酸巴豆酰化修饰(Lysine crotonylation,Kcr)是2011年鉴定到的一种新型酰化修饰,它参与精子形成过程中的逃逸性染色体关联基因沉默和组蛋白替换。然而成熟精子中是否存在Kcr及其功能如何尚未明确。精子细胞核内几乎不发生复制和转录... 详细信息

赖氨酸巴豆酰化修饰(Lysine crotonylation,Kcr)是2011年鉴定到的一种新型酰化修饰,它参与精子形成过程中的逃逸性染色体关联基因沉默和组蛋白替换。然而成熟精子中是否存在Kcr及其功能如何尚未明确。精子细胞核内几乎不发生复制和转录过程,其生理功能主要受蛋白翻译后修饰调控。蛋白磷酸化在精子中广泛存在,是完成获能以及受精的基础。钙离子载体A23187可诱导精子完成受精作用,但A23187处理的精子中磷酸化并未被激活,精子生理功能的改变是否与Kcr有关,目前未见报道。本研究使用抗体富集和液相色谱质谱联用技术,对小鼠成熟精子中蛋白的Kcr进行鉴定,并利用生物信息学分析手段,蛋白免疫印记和免疫荧光等技术对未获能组,获能组以及A23187处理组精子中Kcr蛋白的功能进行深入探究。研究结果表明:1.小鼠精子形成过程中存在大量Kcr蛋白,包括组蛋白和非组蛋白。精子组蛋白上共鉴定到有28个Kcr位点,与小鼠胚胎成纤维细胞相比,成熟精子中组蛋白Kcr修饰位点向羧基端偏移,影响精子结构并参与维持细胞核的致密性。2.与已被报道的Hela细胞相比,成熟精子中Kcr蛋白分布和Motif位点具有较大差异。精子Kcr蛋白较少参与到DNA复制,基因表达和RNA剪切等过程,而在能量代谢与繁殖等过程中发挥重要作用,这与精子大部分细胞质被去除且不具备转录复制活性的特征相一致。3.精子中Kcr作为一种新的修饰能够参与调节获能,并受到钙离子的调控。钙离子可通过抑制去Kcr酶(histone deacetylases,HDACs)的活性而不是提高促Kcr酶(P300/CBP)的活性,促进精子中Kcr水平的增加。4.A23187处理组中钙离子提高精子糖酵解、乙酰辅酶A合成、三羧酸循环和氧化磷酸化途径中关键酶的Kcr水平,抑制线粒体膜电位和ATP生成,抑制磷酸化修饰,提示Kcr与能量代谢间存在直接关系。5.钙离子诱导精子中参与调控能量代谢、结构运动和抗逆性蛋白Kcr增加。能量代谢关键酶Kcr水平增加抑制能量生成;微管蛋白等结构蛋白Kcr水平上升进而降低精子结构运动性;谷胱甘肽硫转移酶等具有细胞保护作用的蛋白Kcr增加,其活性增强,维持精子存活的状态。以上揭示A23187引起精子运动性降低但存活的分子机制。本文揭示Kcr作为新的蛋白修饰参与到精子获能中,拓展了Kcr功能,为精子能量代谢、运动性相关疾病的治疗提供新的思路,也为哺乳动物精子中蛋白Kcr研究提供基础资料。

关键词：小鼠精子能量代谢钙离子 A23187 巴豆酰化修饰

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克林霉素对雄性小鼠精子功能的影响

安徽农业科学 2010年第36期38卷 20705-20706页

作者：赵冰徐振军李建娇白桂芬刘冰赤峰学院生命科学系内蒙古赤峰024000

[目的]研究克林霉素对雄性小鼠生殖细胞的影响。[方法]取48只健康成年雄性小白鼠,随机分为试验A组、B组、C组和对照组,每组12只小鼠。试验A、B和C组分别注射克林霉素15、30和60 mg/kg.d,对照组腹腔注射生理盐水。29 d后,脱臼处死小鼠,... 详细信息

[目的]研究克林霉素对雄性小鼠生殖细胞的影响。[方法]取48只健康成年雄性小白鼠,随机分为试验A组、B组、C组和对照组,每组12只小鼠。试验A、B和C组分别注射克林霉素15、30和60 mg/kg.d,对照组腹腔注射生理盐水。29 d后,脱臼处死小鼠,观察小鼠精子的活率、畸形率、精子膜低渗肿胀率。[结果]试验B、C组小鼠精子活率和尾膜肿胀比率低于对照组,而畸形率高于对照组;试验A组小鼠精子活率、畸形率以及尾膜肿胀比率与对照组相比无显著差异。[结论]克林霉素使用剂量等于或超过重度感染使用剂量时会影响雄性小鼠精子的正常功能。

关键词：克林霉素小鼠精子活率畸形率尾膜肿胀比率

褪黑素对小鼠精子冷冻及安钠咖对猪冻精解冻的影响研究

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褪黑素对小鼠精子冷冻及安钠咖对猪冻精解冻的影响研究

作者：陈雪娇四川农业大学

学位级别：硕士

精液的超低温冷冻起源于一百多年前,到目前为止,精液冷冻的效果并不理想。氧化损伤是造成哺乳动物精子冷冻-解冻后质量下降的重要原因。褪黑素具有很强的抗氧化作用,但对冷冻精子活力,活率的影响却存在争议。安钠咖的主要成分是咖啡因... 详细信息

精液的超低温冷冻起源于一百多年前,到目前为止,精液冷冻的效果并不理想。氧化损伤是造成哺乳动物精子冷冻-解冻后质量下降的重要原因。褪黑素具有很强的抗氧化作用,但对冷冻精子活力,活率的影响却存在争议。安钠咖的主要成分是咖啡因和安息香酸钠,咖啡因的添加已经被应用到很多物种精液冷冻保存过程中,具有提高精子活力的作用,但是安钠咖应用于猪精液冷冻还较少。本实验以昆明白小鼠和荣昌猪作为研究对象,在小鼠精子冷冻液R18S3中添加不同浓度的褪黑素,分别为0 mg/mL(M0组)、0.125 mg/mL (M1组)、0.25 mg/mL(M2组)、0.5mg/mL(M3组),探讨其对冷冻-解冻后精子质量和活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)的影响。在每100 mL猪的解冻液中添加5 mL安钠咖,精子解冻后检测其密度、活率、顶体完整率、质膜完整率和畸形率。结果如下：(1)小鼠精子超低温冷冻后,与新鲜组相比,除平均路径速度、运动的线性度、运动的平直度以外,精子冷冻后各项运动指标都呈现显著下降趋势(P≤0.05)。与未添加褪黑素冷冻组(M0)相比,M1组和M2组中精子的总运动率要显著提高(P≤0.05),M1组、M2组、M3组精子的平均曲线运动速度显著上升(P精子的平均直线运动速度(P≤0.05),M2组的精子尾部鞭打频率及M3组的平均侧摆幅度均显著高于M0组(P-≤0.05),但是精子的活力只在M1组得到显著提高(P≤0.05);M1、M2、M3组含ROS的活精子数少于M0组。因此,选用M1组冷冻液作为小鼠精液冷冻保护液进行后续实验。(2)选择M1组冷冻液用于小鼠精子冷冻保存,解冻后精子促凋亡基因bax没有显著性变化,但能显著提高(P≤-0.05)抗凋亡基因bcl-xl的mRNA表达。(3) 猪精液冷冻超低温冷冻后,与新鲜对照组精子相比,解冻后精子密度、活率、顶体完整率、质膜完整率显著下降(P≤0.05),畸形率显著上升(P≤0.05),解冻液中添加安钠咖能显著提高冷冻后精子的活率(P≤0.05),对其他质量指标有所改善,但是没有达到显著水平。由此可见,在小鼠精子超低温冷冻保存稀释液中添加0.125 mg/mL褪黑素能够抑制精子的氧化损伤,提高抗凋亡基因的表达,从而改善精子冷冻-解冻后的质量。添加安钠咖能改善猪精子冷冻-解冻后质量,特别是活率有明显的提高,可以考虑作为今后猪精液超低温冷冻的添加剂之一

关键词：小鼠精子猪精液超低温冷冻活性氧褪黑素安钠咖

pcDNA3.1-preS1-GFP重组质粒的构建及其在小鼠精子内的表达

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pcDNA3.1-preS1-GFP重组质粒的构建及其在小鼠精子内的表达

作者：李茜青岛大学

学位级别：硕士

目的构建含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)基因与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV) preS1基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-preS1-GFP,观察并检测该重组质粒在小鼠精子内的表达。方法采用聚合酶链反应(polymerase ... 详细信息

目的构建含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)基因与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV) preS1基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-preS1-GFP,观察并检测该重组质粒在小鼠精子内的表达。方法采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)方法,以pBR322-HBV质粒为模板扩增HBV preSl基因片段,将PCR扩增得到的HBV preSl基因片段与含有GFP的真核表达载体pcDNA3.1-GFP分别进行EcoR I和Xba I双酶切,以T4连接酶过夜连接,经酶切及测序鉴定后,用脂质体LipofectamineTM2000转染小鼠精子,在荧光显微镜下观察GFP有无表达,并应用PCR检测HBV preS1基因的存在。结果①利用DNA重组技术将preS1基因插入到pcDNA3.1-GFP质粒中,经双酶切及测序鉴定,成功构建了pcDNA3.1-preS1-GFP真核表达载体;②将重组质粒按一定比例转染小鼠精子后,在荧光显微镜下观察到转染精子头部有较明亮的绿色荧光;③提取转染精子DNA,经PCR扩增得到位于HBV preSl基因区域内长约589bp的片段,与预期一致。结论①以上研究结果证实,重组质粒pcDNA3.1-preS1-GFP已得到成功构建,这为建立新型HBV垂直传递小鼠模型提供了可能;②重组真核表达载体pcDNA3.1-preS1-GFP在小鼠精子内的表达,表明重组质粒pcDNA3.1-preS1-GFP可用于制备转基因小鼠,同时GFP还可作为HBVpreS1基因存在与否的报告基因。因此本研究为建立新的HBV垂直传递小鼠模型,进而更好地研究HBV的垂直传播机制奠定了实验基础。

关键词：乙型肝炎病毒重组质粒绿色荧光蛋白小鼠精子转染

高度保守的RNA结合蛋白-Pumilio在小鼠精子发生中作用的研究

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高度保守的RNA结合蛋白-Pumilio在小鼠精子发生中作用的研究

作者：朱彤南京医科大学

学位级别：硕士

精子发生的过程是一个复杂的发育过程,这一过程涉及精原干细胞和精原细胞有丝分裂,然后分化为精母细胞进行减数分裂,最终形成成熟的精子,因此精子发生为研究发育分化过程中的基因表达的调控提供了一个很好的模型,在精子分化的过程中涉... 详细信息

精子发生的过程是一个复杂的发育过程,这一过程涉及精原干细胞和精原细胞有丝分裂,然后分化为精母细胞进行减数分裂,最终形成成熟的精子,因此精子发生为研究发育分化过程中的基因表达的调控提供了一个很好的模型,在精子分化的过程中涉及基因组染色质的高度浓缩,从而导致该阶段基因组不能作为模板转录mRNA,因此在精子分化的过程中不能起始新的转录,这就需要有些mRNA提前转录并稳定的储存在细胞内,待特定的阶段起始翻译,RNA结合蛋白在mRNA从合成、储存、翻译到降解的过程中起到了关键的作用,在生殖细胞中有高表达量的RNA结合蛋白可能参与完成这一转录后事件,因为多个在动物界包括人的精子发生中高度保守的蛋白几乎都是RNA结合蛋白,因此精子发生中的这种转录后调控机制很可能是高度保守的,但RNA结合蛋白是如何参与精子发生的调控的,尤其是在小鼠和人的精子发生中了解甚少。PUF蛋白(Pumilio and FBF)代表一个真核生物中广泛存在的RNA结合蛋白家族,PUF家族蛋白以出现典型的8个连续的PUF重复序列为标志,每个PUF序列的长度大约为40个氨基酸,PUF重复序列的两端出现相关序列-Csp1和Csp2,整个PUF重复序列是结合RNA所必须的。PUF蛋白作为一个RNA结合蛋白家族,已有证据显示其在秀丽隐杆线虫和果蝇参与生殖细胞分化和发育的过程,而Pumilo1(PuM1)和Pumilo(Pum2作为小鼠中两个PUF蛋白家族的成员在小鼠精子分化过程中的作用还有待研究。在前期的研究工作中,本实验室确认了Pum 和Pum2在睾丸组织中都有较高表达,Pum1和Pum2的mRNA在小鼠出生后3天精子发育的初期就可以检测到表达,在14天到28天左右表达都有逐渐升高的趋势,在精子发生中,Pum1和Pum2的蛋白都在支持细胞、精原细胞、精母细胞的细胞质中表达,在圆形精子和成熟精子中不表达。由于无论是Pum1单独敲除还是Pum2单独敲除,小鼠都是可育的,提示Pum1和Pum2可能有相互补偿作用,因此研究Pum家族的作用有必要建立同时敲除Pum1和Pum2的双敲小鼠。但全身性双敲小鼠胚胎致死,无法直接观察它们在精子发生中的作用。因此我们通过Cre-Loxp系统在Pum2突变背景上构建了生殖细胞特异性敲除Pum1的Pum1、Pum2双敲的小鼠,首先,利用精原细胞特异性表达的Stra8-cre在精原细胞未分化前敲除Pum1,成年双敲小鼠生殖能力大大降低,在成年双敲小鼠中睾丸重量显著减小,精母细胞凋亡较野生型小鼠有明显增加,生殖细胞减少,精子数较野生型小鼠减少81.6%,且精子头部出现明显异常,畸形率高达74%。其次,为了进一步验证敲除小鼠的表型和Pum在未分化的精原细胞包括精原干细胞中的作用,我们利用在胚胎期18天开始表达的Vasa-cre对生殖细胞进行特异性敲除,在出生后6天确认敲除并观察到睾丸重量减小,生殖细胞减少,精子数较野生型小鼠减少98.5%,小鼠完全不育。综上所述,利用条件性敲除的小鼠遗传模型我们发现Pum1和Pum2在精子发生中参与精子变形和生殖细胞的维持等过程,Puml和Pum2双敲小鼠的构建为下一步探寻Pum蛋白在小鼠精子发生中的作用提供了强有力的工具和线索。

关键词：精子发生小鼠精子结合蛋白 RNA 精原细胞精子头部野生型小鼠睾丸重量精原干细胞睾丸组织

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苦瓜水提取物对雄性小鼠精子影响

中国公共卫生 2007年第6期23卷 741-742页

作者：胡怡秀刘秀英马征胡春生张莹莹尹进湖南省疾病预防控制中心长沙410005

苦瓜作为一种药食兼用的草质藤木植物的果实,民间食用已有数百年历史,其药用价值越来越被人们所关注。随着研究的深入,人们发现苦瓜有较多的保健作用和广阔的临床应用前景。对苦瓜的毒性研究发现。苦瓜对雄性动物具有较强的抗生育活性... 详细信息

苦瓜作为一种药食兼用的草质藤木植物的果实,民间食用已有数百年历史,其药用价值越来越被人们所关注。随着研究的深入,人们发现苦瓜有较多的保健作用和广阔的临床应用前景。对苦瓜的毒性研究发现。苦瓜对雄性动物具有较强的抗生育活性。国内外学者采用不同方法对苦瓜食用部分进行了分离提取及鉴定,从苦瓜中曾分离出苷类、蛋白质、多肽、氨基酸、糖类、生物碱类、有机酸、脂类、甾类、萜类、微量元素等多种化学成份。[第一段]

关键词：雄性动物苦瓜小鼠精子水提取物临床应用前景抗生育活性药食兼用药用价值

二氢硫辛酰胺脱氢酶酪氨酸磷酸化影响小鼠精子活力的分子机制研究

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二氢硫辛酰胺脱氢酶酪氨酸磷酸化影响小鼠精子活力的分子机制研究

作者：王立蕊上海交通大学

学位级别：硕士

哺乳动物精子中二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLD)是一种线粒体基质酶,亦是精子繁殖能力标记蛋白,其表达量的变化直接或间接影响动物精子的受精潜能。此外,蛋白翻译后修饰的变化也逐渐成为哺乳动物精子繁殖标记的研究热点。然而,精子中DLD是否发... 详细信息

哺乳动物精子中二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLD)是一种线粒体基质酶,亦是精子繁殖能力标记蛋白,其表达量的变化直接或间接影响动物精子的受精潜能。此外,蛋白翻译后修饰的变化也逐渐成为哺乳动物精子繁殖标记的研究热点。然而,精子中DLD是否发生酪氨酸磷酸化修饰的变化,DLD酪氨酸磷酸化与精子细胞内能量代谢和ATP水平是否存在关联性,相关研究甚少。尤其DLD酪氨酸磷酸化可逆性变化是否引起精子繁殖能力发生改变,其相关作用机制研究尚未见报道。因此,本研究利用重金属离子及小分子抗氧化剂作为小鼠精子DLD酪氨酸磷酸化可逆性变化的诱导因子,以DLD酪氨酸磷酸化为切入点,分析精子活力、能量代谢与DLD酪氨酸磷酸化修饰可逆性变化的相关性,探讨DLD蛋白酪氨酸磷酸化修饰的变化引起小鼠精子繁殖功能发生改变的分子机制,为进一步研究蛋白翻译后修饰的变化影响精子繁殖能力的分子机理,以及发掘家畜精子繁殖能力相关生物标记蛋白提供理论依据。本研究主要做了以下三个方面的工作:1.利用蛋白免疫印迹技术(WB)分析不同浓度镉离子诱导小鼠精子蛋白酪氨酸磷酸化修饰变化状况。结果证实,当镉离子浓度增加到5μM时诱导分子量约为55 kDa蛋白发生酪氨酸磷酸化。采用双向凝胶电泳结合蛋白免疫印迹技术(TD-WB),对该蛋白进行了鉴定,结果显示该特异性修饰蛋白为DLD。加入cAMP/PKA信号通路PKA抑制剂H-89和Ca级联信号通路调节因子W7和KN-93后,DLD酪氨酸磷酸化修饰没有发生变化,说明镉离子诱导DLD酪氨酸磷酸化修饰不遵循获能相关的cAMP/PKA信号通路和Ca级联信号通路。同时,获能调节因子HCO和BSA一起培养小鼠精子时,DLD不会发生酪氨酸磷酸化,提示DLD的酪氨酸磷酸化不参与小鼠精子获能。此外,采用DLD抗体结合免疫沉淀技术富集DLD蛋白,然后进行了酪氨酸磷酸化修饰检测,结果显示镉离子确实诱导DLD发生酪氨酸磷酸化修饰,而BSA可以抑制DLD的酪氨酸磷酸化,进一步验证了镉离子诱导DLD蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰的正确性。细胞的免疫荧光(IF)结果显示,镉离子处理后小鼠精子中段的荧光强度显著增强,镉离子和BSA一起处理后,中段荧光强度未发生显著变化,而线粒体恰位于小鼠精子中段,DLD又是一种线粒体蛋白,进一步验证了鉴定的DLD的正确性。***是三羧酸循环(TCA)中α-酮戊二酸脱氢酶复合体和丙酮酸脱氢酶复合体的第三组件,TCA过程中产生的NADH直接参与线粒体呼吸产能,而精子细胞内的ATP直接影响精子活力。蛋白酪氨酸磷酸化是一种重要的酶活性共价修饰方式,而DLD发生酪氨酸磷酸化时是否影响精子代谢以及活性机能?本研究结果显示,DLD发生酪氨酸磷酸化时,其脱氢酶活性显著降低(P小鼠精子能动性(MOT)、前进性运动速率(PRO)、平均曲线运动速度(VCL)及平均直线运动速度(VSL)均显著降低(P小鼠精子抑制DLD发生酪氨酸磷酸化时,与单独10μM镉离子处理组相比,DLD脱氢酶活性、NADH水平、线粒体产生的ATP水平和精子活力各项参数均显著增加(P小鼠精子活力及其繁殖能力。3.蛋白修饰的可逆性是其主要特点之一,尤其是酶蛋白磷酸化修饰发生可逆性变化后直接影响其自身的生理活性。镉离子诱导DLD发生酪氨酸磷酸化修饰是否存在可逆性?因此,本研究利用小分子抗氧化剂维生素C(Vc)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为小鼠精子DLD酪氨酸磷酸化可逆性变化的诱导因子,验证酪氨酸磷酸化DLD发生可逆性变化后其功能如何。结果显示在20 mM Vc或8 mM NAC的诱导下酪氨酸磷酸化DLD会发生脱磷酸化,从而恢复其脱氢酶活性、细胞内NADH水平、ATP水平以及精子活力。结果提示酪氨酸磷酸化DLD存在可逆性,且酪氨酸磷酸化和脱磷酸化可以作为DLD功能失活和复活的分子标记。同时,进一步研究证实Vc和NAC引起的DLD脱磷酸化并不是由于其抗氧化特性,可能通过与镉离子结合改变酪氨酸激酶与磷酸酶的平衡,进而诱导DLD脱磷酸化。综上所述,小鼠精子中,DLD的酪氨酸磷酸化修饰受重金属离子调控,且DLD的这种磷酸化修饰不参与精子获能,也不遵循cAMP/PKA信号通路和钙离子级联信号通路;发生酪氨酸磷酸化后DLD活性降低,进而影响精子能量代谢、ATP水平和活力;在小分子抗氧化剂Vc和NAC诱导因子作用下,酪氨酸磷酸化DLD发生脱磷酸化,而脱磷酸化促进小鼠精子DLD活性的复活;DLD酪氨酸磷酸化和脱磷酸化可以调节DLD活性,酪氨酸磷酸化修饰和脱磷酸化可以作为DLD功能失活和复活

关键词：小鼠精子能量代谢二氢硫辛酰胺脱氢酶酪氨酸磷酸化脱磷酸化

小鼠精子体外培养过程中Ca^(2+)对微管蛋白乙酰化的影响

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上海交通大学学报（农业科学版） 2016年第2期34卷 20-27,46页

作者：甄林青杨强震王立蕊徐芳张宇静谢硕冯健李新红上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240

微管蛋白的乙酰化作用对细胞代谢过程,维持细胞的稳定性及运动性具有特殊作用,而有关哺乳动物精子蛋白乙酰化修饰的研究报道较少,且成熟精子蛋白乙酰化作用机制尚未明确。本研究利用精子活力参数计算机辅助检测(CASA)技术、蛋白免疫印迹... 详细信息

微管蛋白的乙酰化作用对细胞代谢过程,维持细胞的稳定性及运动性具有特殊作用,而有关哺乳动物精子蛋白乙酰化修饰的研究报道较少,且成熟精子蛋白乙酰化作用机制尚未明确。本研究利用精子活力参数计算机辅助检测(CASA)技术、蛋白免疫印迹(WB)以及免疫荧光等实验技术,分析测定小鼠精子体外培养过程中,不同浓度Ca2+以及HCO-3、环腺苷酸(dbcAMP)等精子获能调节因子对微管蛋白乙酰化的影响。结果表明,小鼠精子中分子量约为55、37、26kDa微管蛋白发生乙酰化修饰,获能培养后微管蛋白乙酰化程度明显高于未获能培养;钙离子对精子运动能力以及微管蛋白乙酰化修饰起双重调节作用,低浓度Ca2+(≤2.0mmol/L)促进精子活力及微管蛋白乙酰化(P精子活力MOT(48.88%)、曲线运动速度VCL(99.46μm/s)及微管蛋白乙酰化(P小鼠精子微管蛋白乙酰化的抑制作用;dbcAMP、异丁基黄嘌呤(IBMX)及PKA抑制剂(H-89)等cAMP-PKA磷酸化信号因子影响微管蛋白乙酰化,但不符合cAMP-PKA磷酸化信号通路调节规律。免疫荧光结果显示乙酰化微管蛋白主要分布在精子尾部的中段和主段,且主段最为明显。本研究提示Ca2+可能通过调节微管蛋白的乙酰化,从而影响精子的活力及受精能力。

关键词： Ca2+ 小鼠精子微管蛋白乙酰化修饰获能