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小鼠心脏telocyte间质细胞检测技术与细胞特点

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小鼠心脏telocyte间质细胞检测技术与细胞特点

作者：邓丽珠福建医科大学

学位级别：硕士

背景:心脏Telocyte(TC)是一种与胃肠道Cajal间质细胞(ICC)形态相似的特殊类型细胞,存在于全身多个系统、多个部位,胞体发出细长突起telopode(TP)。国外研究多采用免疫荧光或电镜技术,但心脏TC生理功能研究进展缓慢,TC细胞的存在国内未... 详细信息

背景:心脏Telocyte(TC)是一种与胃肠道Cajal间质细胞(ICC)形态相似的特殊类型细胞,存在于全身多个系统、多个部位,胞体发出细长突起telopode(TP)。国外研究多采用免疫荧光或电镜技术,但心脏TC生理功能研究进展缓慢,TC细胞的存在国内未见相关报道。目的:以小鼠胃肠道ICC及膀胱TC为阳性对照,应用免疫组化、原代培养及电镜技术结合观察小鼠心脏中是否存在TC间质细胞,观察其形态特点,并比较检查技术的优缺点。方法:选择10d-10w昆明小鼠59例,以胃肠道ICC及膀胱TC为阳性对照。运用心肌组织免疫组化染色(ACK2,c-kit单克隆抗体),体外心脏TC分离与培养光镜及免疫荧光激光共聚焦显微镜,心脏原位组织及原代培养细胞透射电镜观察TC分布与特点。结果:免疫组化方法操作不需无菌,周期2天;原代细胞培养+免疫荧光激光共聚焦显微镜周期4-6天,需无菌环境;透射电镜不需无菌,周期15-20天。免疫组化方法(13例)在小鼠胃肠道、膀胱组织发现c-kit阳性产物,在小鼠心脏组织未发现c-kit阳性表达,而心脏原位组织及心肌细胞原代培养(41例)、细胞免疫荧光激光共聚焦显微镜、透射电镜(5例)均发现TC间质细胞。电镜下心脏TC及阳性对照组ICC或TC胞体均呈梭形或不规则形,心房及心室TC胞体面积平均值分别为9.18±3.67μm2、9.17±3.28μm2;小肠、结肠及膀胱ICC或TC胞体面积平均值分别为9.47±5.16μm2、12.12±3.84μm2、12.30±2.61μm2;各部位ICC或TC细胞面积差异无统计学意义。心房与心室TC突起长度相比差异有统计学意义(P=0.001),前者较后者短;小肠ICC、膀胱TC与心房TC突起长度相比差异有统计学意义(P值分别=0.001、0.005),小肠ICC及膀胱TC较心房TC突起长;结肠ICC与心室TC突起长度相比差异有统计学意义(P=0.018),前者较后者短。单个切面心脏TC及阳性对照组ICC或TC胞体发出1-3支细长突起TP,其中心脏TC细胞中含3支TP细胞占44.44%,含1支TP细胞占16.67%;小肠ICC细胞中含3支TP细胞占45.45%,含1支TP细胞占21.68%;膀胱TC细胞中含3支TP细胞占46.97%,含1支TP细胞占18.19%,相邻细胞TP间紧密联系或相互交错、缠绕,TP粗细不均,表面凹陷与膨大交替,并在心室TC细胞突起TP与毛细血管间发现长条形致密物质。TC细胞胞浆及突起内含丰富的线粒体及少量溶酶体、内质网等细胞器。结论:免疫组化、原代细胞培养及免疫荧光激光共聚焦显微镜、透射电镜方法结合,可提高心脏TC检出的可靠性。小鼠心脏存在c-kit阳性表达的TC间质细胞,其细胞大小与胃肠道ICC或膀胱TC间质细胞类似,心室TC细胞突起最长,心房TC突起最短。心室TC间质细胞嵌插于心肌纤维束间及毛细血管周围,TC突起与毛细血管间可能存在紧密联系。

关键词：小鼠心脏 telocyte telopode c-kit 检测技术

利用单细胞测序探讨高血压对小鼠心脏中不同细胞类型改变的影响

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心肺血管病杂志 2024年第2期43卷 194-200页

作者：王贤德乔博康贾立昕杜杰首都医科大学基础医学院 100069 首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所

目的:利用单细胞测序技术分析野生C57B/L6小鼠在血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)灌注前后心脏组织中细胞组成,尤其是心脏成纤维细胞亚群改变,旨在探讨Ang Ⅱ灌注引起的高血压心脏重构过程中成纤维细胞的变化特征。方法:收取Ang Ⅱ... 详细信息

目的:利用单细胞测序技术分析野生C57B/L6小鼠在血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)灌注前后心脏组织中细胞组成,尤其是心脏成纤维细胞亚群改变,旨在探讨Ang Ⅱ灌注引起的高血压心脏重构过程中成纤维细胞的变化特征。方法:收取Ang Ⅱ微量泵灌注前(对照组)及灌注1周后的小鼠心脏组织进行单细胞测序。对测序数据进行质控、标准化、降维、tSNE聚类、细胞类型注释及占比以及随后的功能富集分析。结果:根据心脏组织细胞的特征基因将小鼠心脏组织中细胞分为7群,主要为内皮细胞、成纤维细胞和巨噬细胞。其中,Ang Ⅱ灌注后成纤维细胞(13.7%vs.24.3%)和巨噬细胞(7.7%vs. 22.1%)占比增加,内皮细胞占比减少(72.6%vs. 47.6%)。心脏成纤维细胞可以被分为6个亚群,分别发挥促进细胞外基质形成、细胞黏附及调控血管新生等功能。Ang Ⅱ灌注1周后参与炎症反应和调控血管形成的成纤维细胞亚群占比增加。结论:Ang Ⅱ灌注升高心脏组织中成纤维细胞和巨噬细胞占比增加。其中成纤维细胞主要为促进炎症反应和调控血管生成的亚群。

关键词：单细胞测序血管紧张素Ⅱ灌注小鼠心脏成纤维细胞

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应用活体冷冻技术研究活体小鼠心脏微循环

中国医学物理学杂志 2012年第5期29卷 3686-3690页

作者：史立业李子龙翟效月宁斌杨蓓齐国先中国医科大学附属第一医院老年病干诊科辽宁沈阳110003 中国医科大学附属第一医院肾内科辽宁沈阳110003 中国医科大学组织胚胎学教研室辽宁沈阳110001

目的:分别用传统组织制备方法与活体冷冻技术(in vivo cryotechnique,IVCT)联合冷冻置换制备方法制备样本,对比研究小鼠心外膜下微循环内血流、红细胞及血清蛋白在心脏的免疫定位分布。方法:实验分三组,活体冷冻组(IVCT)、浸泡固定组(im... 详细信息

目的:分别用传统组织制备方法与活体冷冻技术(in vivo cryotechnique,IVCT)联合冷冻置换制备方法制备样本,对比研究小鼠心外膜下微循环内血流、红细胞及血清蛋白在心脏的免疫定位分布。方法:实验分三组,活体冷冻组(IVCT)、浸泡固定组(immersion dehydration fixation,IM-DH)及灌流固定组(perfusion dehydration fixation,PF-DH),每组8只小鼠,分别对跳动的小鼠心脏进行活体冷冻技术联合冷冻置换,浸泡固定及灌流固定,制作的组织样本分别进行苏木素-伊红染色、免疫组织化学染色以及双重免疫荧光染色,光镜及共聚焦荧光显微镜观察,对结果进行对比分析。结果:IVCT从组织形态学水平显示微血管内流动状态的血流,即单行排列的顶端指向血流方向的成串的降落伞型红细胞,以及微血管分流和汇合处;血清白蛋白和免疫球蛋白不但通过微血管壁进入细胞间隙,白蛋白还单独分布在心肌细胞间的特殊结构闰盘和心肌细胞表面的T小管。结论:IVCT实现了从免疫组织化学水平显示活体状态小鼠心脏的微循环;心肌细胞间的闰盘及心肌细胞表面的T小管对血清蛋白具有分子大小选择性。

关键词：活体冷冻技术小鼠心脏微血管红细胞血清蛋白

白灵菇多糖对CCl_4损伤的小鼠心脏抗氧化作用研究

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食用菌 2009年第1期31卷 62-63页

作者：夏铁骑濮阳职业技术学院生物系河南濮阳475000

目的:探讨白灵菇多糖对CCI4损伤小鼠心脏抗氧化作用。方法:将成年小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组(低、中、高剂量给予的白灵菇多糖每天分别为100、200、500mg/kg共5组,连续灌胃30d后,模型对照组及3... 详细信息

目的:探讨白灵菇多糖对CCI4损伤小鼠心脏抗氧化作用。方法:将成年小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组(低、中、高剂量给予的白灵菇多糖每天分别为100、200、500mg/kg共5组,连续灌胃30d后,模型对照组及3个试验组以5mg/kg·d·wt的量,灌以用色拉油配制的1%CCI4溶液,正常对照组灌以等体积的色拉油。24h后将各组动物处死,测定心脏器官的总SOD、Mn-SOD、MDA、GSH-Px几个主要抗氧化指标。结果:与模型对照组相比,给予中、高剂量的白灵菇多糖,可显著提高受损小鼠心脏的总SOD、Mn-SOD及GSH-Px几个主要抗氧化指标。结果:与模型对照组相比,给予中、高剂量的白灵菇多糖,可显著提高受损小鼠心脏的总SOD、Mn-SOD及GSH-Px的活性,降低MDA的含量。结论:对于CCI4损伤的小鼠心脏,白灵菇多糖具有较好的抗氧化作用。

关键词：白灵菇多糖 CCl4损伤小鼠心脏抗氧化

RIP3/CaMKII信号通路对重症病毒性心肌炎小鼠心脏功能及生存曲线的影响

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中华实验外科杂志 2022年第11期39卷 2186-2186页

作者：许祖芳王祥贵张永忠赵琳许文庆刘茜赣州市人民医院外科 341000 南昌大学第一附属医院心血管内科 330006

本文通过研究RIP3/CaMKⅡ信号通路对重症VMC小鼠心脏功能及生存曲线的影响,旨在为重症VMC的防治提供新的靶点和思路,现将结果报道如下。一、材料与方法1.对象及方法:取150只雄性BALB/c小鼠进行研究,以电脑随机数字表法将其分作对照组、... 详细信息

本文通过研究RIP3/CaMKⅡ信号通路对重症VMC小鼠心脏功能及生存曲线的影响,旨在为重症VMC的防治提供新的靶点和思路,现将结果报道如下。一、材料与方法1.对象及方法:取150只雄性BALB/c小鼠进行研究,以电脑随机数字表法将其分作对照组、模型组以及CaMKⅡ抑制剂组,每组各50只。其中模型组以及CaMKⅡ抑制剂组小鼠均通过CVB3m诱导法完成重症VMC小鼠模型的建立,对照组小鼠予以腹腔注射0.2 ml生理盐水干预。

关键词： CaMKⅡ BALB/c小鼠生存曲线信号通路重症病毒性心肌炎小鼠模型诱导法小鼠心脏

以色列研究人员利用基因手段使小鼠心脏“变年轻”

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大众科学 2023年第4期 11-11页

以色列魏茨曼科学研究所日前发表声明说,研究人员开发出一种基因手段,可以增强小鼠心肌细胞的分裂和再生能力,使其心脏“变年轻”,从而提高小鼠日后心脏抗击损伤的能力。这项已发表在英国《自然·心血管研究》期刊上的研究称,研究人员... 详细信息

以色列魏茨曼科学研究所日前发表声明说,研究人员开发出一种基因手段,可以增强小鼠心肌细胞的分裂和再生能力,使其心脏“变年轻”,从而提高小鼠日后心脏抗击损伤的能力。这项已发表在英国《自然·心血管研究》期刊上的研究称,研究人员激活了健康小鼠心肌细胞的ERBB2基因,然后再将这一基因关闭。日后,再与该基因未被激活的对照组小鼠做比较,观察这两类小鼠应对心脏损伤能力的差异。

关键词：心血管研究心脏损伤小鼠心肌细胞魏茨曼再生能力小鼠心脏以色列基因

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SIRT6介导的组蛋白H3K9乙酰化通过调控心肌能量代谢参与小鼠压力过载性心肌重构

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SIRT6介导的组蛋白H3K9乙酰化通过调控心肌能量代谢参与小鼠压力...

作者：吴书琪遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨胸主动脉缩窄(Thoracic aortic constriction,TAC)致小鼠压力过载性心肌重构过程中组蛋白去乙酰化酶SIRT6介导的组蛋白H3K9乙酰化修饰规律以及心肌组织中血管生成情况。方法:选择6周-8周的SPF级雄性昆明小鼠作为实验对象,建立... 详细信息

目的:探讨胸主动脉缩窄(Thoracic aortic constriction,TAC)致小鼠压力过载性心肌重构过程中组蛋白去乙酰化酶SIRT6介导的组蛋白H3K9乙酰化修饰规律以及心肌组织中血管生成情况。方法:选择6周-8周的SPF级雄性昆明小鼠作为实验对象,建立胸主动脉缩窄(Thoracic aortic constriction,TAC)手术模型,根据随机数字表法原则将实验小鼠分为5组:正常(Normal)组、假手术(Sham)组、TAC 4周(W)组、TAC 8周(W)组、TAC 12周(W)组;每组6只。在TAC组中,主动脉弓分离并部分结扎(范围约为主动脉弓直径的75%);在假手术组中,只进行主动脉弓分离而不结扎,其他操作与TAC组相同。分别于建模后4周、8周、12周进行以下检测:(1)小鼠心脏超声观察结扎部位及测定胸主动脉血流速度评估TAC模型,同时检测各组小鼠心室壁厚度、心室容积及心功能;(2)蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测SIRT6、H3K9ac、VEGFA蛋白表达水平;(3)免疫荧光染色检测CD31的表达。结果:(1)超声多普勒显示,TAC组小鼠主动脉弓明显狭窄,脉冲多普勒影像表明结扎部位的血流速度在TAC术后4周、8周、12周较Sham组显著增快(P心脏彩超显示,与Normal组及Sham组相比,TAC小鼠在术后4周LVAWT、LVPWT 均增高(P心脏肥厚明显,而术后8-12周LVAWT及LVPWT减低,心脏LVV、LVEDD及LVESD则逐渐增大,术后12周增大明显(P小鼠SIRT6和VEGFA的蛋白表达水平显著降低(P小鼠心肌组织中SIRT6低表达介导的组蛋白H3K9高乙酰化可能参与小鼠压力过载性心肌重构。(2)TAC小鼠心肌重构过程中心肌组织中血管生成显著减少。目的:探讨组蛋白去乙酰化酶SIRT6调控心肌能量代谢参与胸主动脉缩窄(Thoracic aortic constriction,TAC)致小鼠压力过载性心肌重构的组蛋白乙酰化调控机制。方法:选择6周-8周SPF级雄性昆明小鼠为实验对象,将实验小鼠随机分为五组:正常(Normal)组,假手术(Sham)组,TAC组,TAC+溶剂对照(TAC+Veh)组,TAC+MDL-800(SIRT6激活剂)组,每组6只。TAC组部分结扎胸主动脉(大约占胸主动脉直径的75%),假手术组只进行胸主动脉分离而不结扎。在TAC+MDL-800组中,TAC术后4周腹腔注射MDL-800(65mg/kg),每周3次,持续至TAC手术后12周。溶剂对照组腹腔注射与正常小鼠相同剂量和次数的DMSO,至12周进行如下检测:(1)免疫共沉淀(CoIP)检测H3K9ac与SIRT6、VEGFA之间的相互作用关系;(2)蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测H3K9ac、VEGFA表达水平;(3)心脏超声检测小鼠心功能指标;(4)免疫荧光染色检测CD31的表达;(5)透射电镜检测心肌细胞组织线粒体超微结构的变化;(6)Oxygraph-2k线粒体呼吸功能仪测定线粒体呼吸链氧化磷酸化水平。结果:(1)CoIP结果表明,H3K9ac可以与SIRT6和VEGFA相互结合。(2)WB结果显示,与Normal组及Sham组相比,TAC组小鼠心肌组织中VEGFA蛋白表达水平显著降低(P心脏彩超结果表明,TAC组小鼠LVAWT、LVPWT、LVEF均显著低于Normal组和Sham组,而与TAC+MDL-800组相比较,MDL-800可显著升高小鼠LVAWT、LVPWT及LVEF,且差异具有显著统计学意义(P<0.05);TAC组LVV、LVEDD及LVESD较Normal组及Sham组相比较显著增高(P<0.05),而TAC+MDL-800组较 TAC 组LVV、LVEDD 及 LVE

关键词：心肌重构组蛋白乙酰化血管生成小鼠心脏 SIRT6 心肌能量代谢乙酰化