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冠突散囊菌与木霉混合发酵液醇提物对小鼠巨噬细胞raw264.7免疫调节的影响

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中国酿造 2021年第5期40卷 37-42页

作者：范冬月李倩邹先伟张君毅华侨大学化工学院福建厦门361021 清华大学工程物理系北京100084

为进一步开发冠突散囊菌的药理活性,该研究将冠突散囊菌与木霉共同发酵,通过不同体积分数的乙醇对混合发酵液化学活性部位进行追踪,并结合液质联用(LC-MS)技术对活性部位化合物组成进行分析,通过四氮甲基唑蓝(MTT)比色法、中性红吞噬实... 详细信息

为进一步开发冠突散囊菌的药理活性,该研究将冠突散囊菌与木霉共同发酵,通过不同体积分数的乙醇对混合发酵液化学活性部位进行追踪,并结合液质联用(LC-MS)技术对活性部位化合物组成进行分析,通过四氮甲基唑蓝(MTT)比色法、中性红吞噬实验及酶联免疫吸附测定方法分别研究冠突散囊菌与木霉混合发酵液活性部位对小鼠巨噬细胞raw264.7增殖、吞噬以及分泌细胞因子的能力的影响。结果表明,冠突散囊菌与木霉混合发酵液体积分数70%乙醇提取部位有较好的免疫活性,该部位含有大黄素、芥子碱等生物活性成分。与阳性对照组脂多糖相比,500μg/mL冠突散囊菌与木霉混合发酵液的体积分数70%乙醇提物能够使小鼠巨噬细胞raw264.7增殖率提高12%,增强小鼠巨噬细胞raw264.7吞噬中性红的能力,并能促进NO及细胞因子IL-6、TNF-α的分泌。

关键词：冠突散囊菌木霉混合发酵乙醇提取物免疫调节小鼠巨噬细胞raw264.7

木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶对小鼠巨噬细胞raw264.7的抗炎作用研究

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中国药房 2018年第5期29卷 602-606页

作者：刘立新邹冬玉张羽男张强张楠楠佳木斯大学药学院黑龙江佳木斯154007 佳木斯大学公共卫生学院黑龙江佳木斯154007

目的:研究木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶的抗炎作用及机制。方法:以正常小鼠巨噬细胞raw264.7为对照,以脂多糖(LPS)诱导的raw264.7细胞为炎症模型,采用MTT法检测不同浓度(10、20、40、80μmol/L)的木犀草素、4,4′-联吡啶和木犀草素·... 详细信息

目的:研究木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶的抗炎作用及机制。方法:以正常小鼠巨噬细胞raw264.7为对照,以脂多糖(LPS)诱导的raw264.7细胞为炎症模型,采用MTT法检测不同浓度(10、20、40、80μmol/L)的木犀草素、4,4′-联吡啶和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶作用细胞2 h后的细胞活性;荧光定量聚合酶链式反应法测定40μmol/L浓度时细胞中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧合酶2(COX-2)m RNA的表达,酶联免疫吸附法测定40μmol/L浓度时细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)蛋白表达,Western blot法测定40μmol/L浓度时细胞中核转录因子p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果:与正常细胞比较,LPS诱导后raw264.7细胞活性明显降低(Praw264.7细胞活性(Praw264.7细胞活性无明显影响;40μmol/L浓度下,木犀草素和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶可使LPS诱导后细胞中i NOS和COX-2 m RNA表达水平及TNF-α、IL-6、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),其中木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶降低效果强于木犀草素(P<0.05或P<0.01)。结论:木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶可能通过下调NF-κB信号来抑制炎症相关因子产生,其抗炎作用优于木犀草素。

关键词：木犀草素 4,4′-联吡啶药物共晶小鼠巨噬细胞raw264.7 抗炎作用

野葛根多糖的提取、分离纯化、结构鉴定及对小鼠巨噬细胞raw264.7的免疫调节活性研究

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野葛根多糖的提取、分离纯化、结构鉴定及对小鼠巨噬细胞RAW264.7...

作者：董洲华南理工大学

学位级别：硕士

野葛根为豆科植物野葛藤Pueraria Lobata(willd.)Ohwi的干燥根。本文以野葛根为原料,从中分离纯化出两种水溶性活性多糖GE-1及GE-2,并分别从结构,免疫调节活性方面对其进行比较。结果表明:采用乙醇回流法除去野葛根中黄酮类物质,采用酶... 详细信息

野葛根为豆科植物野葛藤Pueraria Lobata(willd.)Ohwi的干燥根。本文以野葛根为原料,从中分离纯化出两种水溶性活性多糖GE-1及GE-2,并分别从结构,免疫调节活性方面对其进行比较。结果表明:采用乙醇回流法除去野葛根中黄酮类物质,采用酶解法除去野葛根中的淀粉及纤维素,采用Sevag法除去蛋白质,采用“水提醇沉法”获得野葛根中水溶性粗多糖,经阴离子交换柱层析DEAE-Sepharose Fast Flow和葡聚糖凝胶柱层析Sephacryl S-200 HR分离纯化后得到GE-1和GE-2两个组分。其中GE-1为中性多糖;GE-2为酸性多糖,糖醛酸含量为1.5%。经测定,野葛根多糖GE-1的分子量为9.9kDa,GE-2分子量为12.3kDa;扫描电子显微镜显示,GE-1为网状结构,表面有细微的孔;GE-2为表面光滑无凸起的条带状结构。紫外全波段扫描显示GE-1及GE-2均不含蛋白质及核酸类物质,不属于糖蛋白。红外光谱扫描显示,GE-1及GE-2均含有多糖特征吸收峰,且只含有α型吡喃糖,不含α型呋喃糖。单糖组成分析表明GE-1及GE-2均由葡萄糖组成,不含其它种类单糖。高碘酸氧化,Smith降解及甲基化结果表明GE-1含有1,4-Glcp和1,6-Glcp糖苷键,两者之间的摩尔比为1.72:2.64。GE-2中含有1,3-Glcp,1,4-Glcp,1,3,6-Glcp及1,6-Glcp四种糖苷键,各糖苷键之间的摩尔比为1.90:5.52:1.43:2.45。一维核磁共振分析显示,GE-1是由→4)-α-D-Glc(1→和→6)-α-D-Glc(1→糖残基组成的直链结构;GE-2含有分支结构,直链由→3)-α-D-Glc(1→,→4)-α-D-Glc(1→及→3,6)-α-D-Glc(1→三种糖残基组成,支链由→6)-α-D-Glc(1→糖残基组成。GE-1及GE-2均具有免疫调节活性,均能促进小鼠巨噬细胞raw264.7分泌细胞因子NO、TNF-α和IL-6。但GE-1的促进效果非常微弱,GE-2的促进效果较强。GE-2能特异性地与小鼠巨噬细胞raw264.7细胞膜表面受体SR,GR及TLR4相互作用,激活免疫应答,从而影响细胞因子NO、TNF-α和IL-6的分泌。

关键词：野葛根多糖提取纯化结构鉴定小鼠巨噬细胞raw264.7 免疫调节活性

乌头酸脱羧酶1对BCG诱导巨噬细胞炎症反应的调控作用研究

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1696-1706页

作者：戴帆刘占有张旭阳李武宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021 宁夏大学生命科学学院银川750021

旨在探究乌头酸脱羧酶1(aconitate decarboxylase 1,ACOD1)对减毒牛分枝杆菌卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin, BCG)诱导的小鼠巨噬细胞raw264.7炎症反应的调控作用。基于小干扰RNA技术构建ACOD1敲减模型,采用Western blot、qRT-PCR、免疫荧光等技术检测BCG感染巨噬细胞raw264.7后细胞内ACOD1、细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、COX2、iNOS以及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路蛋白的表达变化。结果显示,BCG感染巨噬细胞raw264.7后以时间和浓度依赖性方式显著上调ACOD1及促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、COX2、iNOS的表达,下调抑炎细胞因子IL-4、TGF-β的表达(P细胞因子表达(P<0.01),同时也会下调TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白TLR4、MyD88、TRAF6、p-NF-κB p65的表达。综上,ACOD1可能通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路参与调控BCG引起的炎症反应。

关键词：乌头酸脱羧酶1 BCG 小鼠巨噬细胞raw264.7 炎症反应 TLR4/MyD88/NF-κB信号通路

重楼提取液对小鼠巨噬细胞raw264.7增殖的影响

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包头医学院学报 2016年第10期32卷 1-2页

作者：刘友姜树原刘晓蕾邵国周卫华包头医学院内蒙古包头014060 吉首大学医学院

目的:观察重楼提取液对小鼠巨噬细胞raw 264.7增殖的影响。方法:采用不同浓度(0μL/m L、1μL/m L、10μL/m L、50μL/m L、100μL/m L)的重楼提取液,作用于体外培养的小鼠巨噬细胞raw264.7,使用倒置显微镜观察细胞形态的变化;通过四唑... 详细信息

目的:观察重楼提取液对小鼠巨噬细胞raw 264.7增殖的影响。方法:采用不同浓度(0μL/m L、1μL/m L、10μL/m L、50μL/m L、100μL/m L)的重楼提取液,作用于体外培养的小鼠巨噬细胞raw264.7,使用倒置显微镜观察细胞形态的变化;通过四唑盐比色法检测小鼠巨噬细胞raw264.7的增殖情况。结果:与阴性对照组相比,作用24 h后,50μL/m L、100μL/m L重楼提取液均能抑制raw264.7细胞的增殖;作用48 h后,5μL/m L、10μL/m L、50μL/m L、100μL/m L均能抑制raw264.7细胞的增殖,并且具有时间及浓度依赖性,其抑制效果在100μL/m L作用48 h时最好。结论:高浓度重楼提取液抑制细胞增殖,细胞接触变松,密度降低,贴壁能力减弱,可见较长伪足,生长状态差。

关键词：重楼提取液小鼠巨噬细胞raw264.7 细胞增殖

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新疆疏花蔷薇花的体外抗氧化活性

现代食品科技 2024年

作者：冯倩倩赵文惠李安林郭瑛田莉新疆名医名方与特色方剂学重点实验室新疆医科大学中心实验室新疆医科大学中医学院

研究新疆特色植物资源疏花蔷薇花不同极性部位的体外抗氧化活性，为该药材的后续研究提供参考。制备疏花蔷薇花的石油醚（E1）、二氯甲烷（E2）、乙酸乙酯（E3）、正丁醇（E4）等不同极性部位提取物，考察其对DPPH、ABTS和羟基自由基的... 详细信息

研究新疆特色植物资源疏花蔷薇花不同极性部位的体外抗氧化活性，为该药材的后续研究提供参考。制备疏花蔷薇花的石油醚（E1）、二氯甲烷（E2）、乙酸乙酯（E3）、正丁醇（E4）等不同极性部位提取物，考察其对DPPH、ABTS和羟基自由基的清除能力评价体外抗氧化活性；以抗氧化活性最高的E4为研究对象，以D-半乳糖诱导小鼠巨噬细胞raw264.7建立体外氧化损伤模型，设立对照组、模型组、Vc组、E4（低、中、高剂量）组，CCK-8法测定细胞存活率，测定细胞中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、乳酸脱氢酶、过氧化氢酶的活力及丙二醛含量。疏花蔷薇花不同极性部位抗氧化活性大小为E4>E3>E2>E1，其中E3、E4清除自由基能力较强，并且呈明显剂量依赖效应。当E4质量浓度为3.13～12.50μg/mL时，raw264.7细胞的存活率均≥80%，无明显毒性；各剂量组可显著促进raw264.7细胞存活率（P细胞中SOD、GSH-PX、LDH、CAT活力，降低MDA含量。结果表明疏花蔷薇花具有良好的体外抗氧化能力。

关键词：疏花蔷薇花不同极性提取部位体外抗氧化小鼠巨噬细胞raw264.7

脂肪分化相关蛋白2对BCG诱导小鼠传代巨噬细胞自噬的调控作用

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畜牧兽医学报 2023年第5期54卷 2134-2146页

作者：王崇年于嘉霖宫照乾吴晓玲邓光存宁夏大学生命科学学院银川750021 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021

本研究旨在探讨脂肪分化相关蛋白2(perilipin 2,PLIN2)在卡介苗(bacillus calmette-guérin,BCG)感染的小鼠巨噬细胞raw264.7中对自噬的调控作用。利用小干扰RNA敲减小鼠巨噬细胞raw264.7中PLIN2的表达,结合BCG感染,通过免疫印迹、流式... 详细信息

本研究旨在探讨脂肪分化相关蛋白2(perilipin 2,PLIN2)在卡介苗(bacillus calmette-guérin,BCG)感染的小鼠巨噬细胞raw264.7中对自噬的调控作用。利用小干扰RNA敲减小鼠巨噬细胞raw264.7中PLIN2的表达,结合BCG感染,通过免疫印迹、流式细胞术和免疫荧光等技术,检测胞内PLIN2、自噬、内质网应激及脂肪酸代谢相关因子指标的表达变化。结果显示:BCG感染显著上调巨噬细胞raw264.7中PLIN2的表达(P细胞内中性脂质的蓄积。敲减PLIN2能使BCG感染的巨噬细胞raw264.7中自噬相关蛋白ATG5(P细胞自噬率极显著降低(P细胞内中性脂质的含量(P细胞内Ca^(2+)浓度极显著降低(P巨噬细胞内自噬相关蛋白表达均无显著差异(P>0.05)。BCG感染巨噬细胞上调了PLIN2的表达,而PLIN2通过上调细胞内脂肪酸含量,进而级联激活PERK-eIF2α-ATF4-CHOP内质网应激信号通路,诱导细胞自噬发生。

关键词： PLIN2 BCG 小鼠巨噬细胞raw264.7 内质网应激细胞自噬

TMAO通过CD147/MMPs通路诱导巨噬细胞活化

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中国生物化学与分子生物学报 2022年第1期38卷 91-96页

作者：刘奇林薛毅赖晓辉杜大勇柳杨张涛李运田南方医科大学第二临床医学院广州510000 中国人民解放军第三〇五医院心脏中心北京100010

肠道菌群代谢产物氧化三甲胺(trimethylamine N-oxide,TMAO)可通过多种途径促进动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的进展,现研究发现,在临床上其与斑块稳定性存在密切联系,但其分子机制目前尚不明确。金属蛋白酶诱导因子(extracellular ... 详细信息

肠道菌群代谢产物氧化三甲胺(trimethylamine N-oxide,TMAO)可通过多种途径促进动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的进展,现研究发现,在临床上其与斑块稳定性存在密切联系,但其分子机制目前尚不明确。金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,CD147)/基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是目前研究认为与斑块稳定性高度相关的信号通路,能通过削弱纤维帽的厚度等方式促进斑块不稳定性,导致心血管不良事件的发生。因此,本研究通过TMAO刺激小鼠巨噬细胞raw264.7建立细胞模型,观察对CD147、MMP2以及MMP9的影响,并进一步使用siRNA转染的方法构建CD 147基因沉默模型,探讨CD147与MMP2、MMP9的相互作用关系。RT-qPCR和Western印迹结果发现,CD147在小鼠巨噬细胞raw264.7中基因表达水平上无明显变化,但在蛋白质水平上表达明显增加(P细胞为对象的实验中发现,CD147、MMP2、MMP9的表达均受到明显抑制(P小鼠巨噬细胞raw264.7中MMP2、MMP9的表达,且这一作用可能部分通过CD147/MMPs通路实现。

关键词：氧化三甲胺斑块稳定性基质金属蛋白酶动脉粥样硬化小鼠巨噬细胞raw264.7 金属蛋白酶诱导因子CD147

黄酒多肽的多级分离纯化及其对小鼠巨噬细胞免疫调节的影响

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食品工业科技 2020年第13期41卷 289-295页

作者：冯瑞雪史瑛姬中伟钱肖华徐岳正毛健许正宏粮食发酵工艺与技术国家工程实验室江南大学江苏无锡214122 浙江古越龙山绍兴酒股份有限公司国家黄酒工程技术研究中心浙江绍兴312000

本研究以黄酒为原料,通过大孔树脂吸附、凝胶色谱等方法多级分离纯化黄酒中活性肽组分,并探究各级分离肽组分对小鼠巨噬细胞raw264.7免疫调节作用的影响。通过脂多糖LPS(1μg/mL)刺激raw264.7细胞建立体外炎症模型,以不同浓度的各级分... 详细信息

本研究以黄酒为原料,通过大孔树脂吸附、凝胶色谱等方法多级分离纯化黄酒中活性肽组分,并探究各级分离肽组分对小鼠巨噬细胞raw264.7免疫调节作用的影响。通过脂多糖LPS(1μg/mL)刺激raw264.7细胞建立体外炎症模型,以不同浓度的各级分离纯化的黄酒多肽样品进行干预,对NO释放抑制率最高的黄酒多肽组分进行结构分析。结果表明,可通过大孔树脂初步分离纯化黄酒活性多肽。对3种不同型号大孔树脂的吸附解析性能进行比较,最终选择DA201-C大孔吸附树脂富集黄酒多肽,收集洗脱液旋蒸冻干后获得黄酒多肽SJ组分。采用MTT法检测细胞活力,黄酒多肽SJ作用raw264.7细胞的安全范围为≤2.5 mg/mL。采用Griess Reagent法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)含量,与LPS模型组相比,黄酒多肽SJ浓度为0.3、0.6、1.2、2.5 mg/mL时能明显抑制NO释放(抑制率分别为20.85%、36.42%、68.58%、95.01%)。黄酒多肽SJ经Sephadex G-15凝胶色谱柱分离得到3个组分即G1、G2、G3,分别收集这三组洗脱峰并测定其对raw264.7细胞NO分泌量的影响。研究发现G1组分活性高于其他2种组分,G1、G2、G3的NO释放半抑制浓度分别是0.68、0.86、0.75 mg/mL。对G1组分进行氨基酸组成分析得知其疏水氨基酸占比32.63%,必需氨基酸占比28.46%。研究结果证明黄酒多肽能显著抑制LPS诱导的raw264.7分泌NO,对LPS刺激的raw264.7细胞炎症具有保护作用,从而促使巨噬细胞发挥免疫作用。

关键词：黄酒多肽结构鉴定小鼠巨噬细胞raw264.7 免疫调节活性