检索结果-南通市图书馆

作者：甘露安徽师范大学

学位级别：硕士

奶牛乳房炎是奶牛养殖场中最严重的疾病之一，对奶牛业造成严重的经济损失。现阶段确定奶牛乳房炎致病菌主要是通过传统细菌培养，根据菌落形态确定其种类，此过程周期长且不能及时准确的确定致病菌种类以便于乳房炎疾病预防和治疗，因... 详细信息

奶牛乳房炎是奶牛养殖场中最严重的疾病之一，对奶牛业造成严重的经济损失。现阶段确定奶牛乳房炎致病菌主要是通过传统细菌培养，根据菌落形态确定其种类，此过程周期长且不能及时准确的确定致病菌种类以便于乳房炎疾病预防和治疗，因此研发和完善一种快速、灵敏、准确的新型诊断方法迫在眉睫。本研究采用传统细菌培养方法分离奶牛乳房炎病原菌，利用细菌菌落DNA提取方法，对采自临床型乳房炎病例共计40个乳样分别采用传统的细菌培养法和PCR方法分离鉴定。结果显示共分离得到主要致病菌有嗜酸氧化硫硫杆菌，琼氏不动杆菌，农杆菌，蜡状芽孢杆菌，地衣芽胞杆菌，芽孢杆菌，大肠杆菌，克雷伯菌，假单胞菌，金黄色葡萄球菌。成功的建立了一种快速而特异性的奶牛乳房炎致病菌的鉴定方法。分离得到奶牛乳房炎中主要的致病菌后，为了进一步研究奶牛乳房炎发生过程中组织形态结构的变化，HSP70和NF-κB是否参与免疫过程以及免疫病理机制。也为了寻找更理想的预防防治方法提供基础研究数据。本研究从采集的奶样中用传统细菌培养方法和分子学方法分离鉴定主要病原菌，从中挑选出地衣芽胞杆菌感染小鼠乳腺组织，通过HE染色分析感染后小鼠乳腺组织变化，通过免疫组织化学方法分析HSP70和NF-κB在感染小鼠体内的表达。结果显示感染后小鼠乳腺出现炎症症状，组织病理学观察显示腺泡腔内有大量嗜中性粒细胞侵润。实验组中HSP70和NF-κ B表达量比生理盐水组和空白组均有显著增加（P=0.000）。成功通过地衣芽胞杆菌诱发建立实验性乳房炎小鼠病理模型，实验组中HSP70和NF-κB表达量的增加说明其参与细菌感染小鼠乳腺组织后的病理过程。本文主要研究芜湖地区奶牛乳房炎主要致病菌，奶牛乳房炎发生过程中的结构变化及其免疫病理机制，为及时准确的确定奶牛乳房炎致病菌比便于疾病预防和治疗提供研究资料。

关键词：奶牛乳房炎致病菌 PCR 地衣芽胞杆菌小鼠乳房炎模型 HSP70 NF-κB

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绵羊抗菌肽GNLY基因多态性分析及合成多肽对小鼠乳房炎模型治疗作用的研究

绵羊抗菌肽GNLY基因多态性分析及合成多肽对小鼠乳房炎模型治疗作...

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作者：宋佳玮石河子大学

学位级别：硕士

抗菌肽是一种广泛存在于生物体内的多肽,其分子量小、化学性质稳定。抗菌肽具有高效的抗细菌、抗肿瘤、抗真菌、抗寄生虫、抗病毒作用,其独特的作用机制使细菌不易产生耐药性,因而成为科学家关注热点。颗粒溶素(Granulysin,GNLY)和大多... 详细信息

抗菌肽是一种广泛存在于生物体内的多肽,其分子量小、化学性质稳定。抗菌肽具有高效的抗细菌、抗肿瘤、抗真菌、抗寄生虫、抗病毒作用,其独特的作用机制使细菌不易产生耐药性,因而成为科学家关注热点。颗粒溶素(Granulysin,GNLY)和大多数抗菌肽一样,能够杀灭多种微生物以及寄生虫,参与机体内免疫应答,是机体天然免疫的重要组成。有关绵羊抗菌肽GNLY研究内容较少,其基因在不同品种绵羊中是否存在差异尚不确定。目的:为了分析不同品种绵羊抗菌肽GNLY基因的SNP多态性,对新疆地区萨福克羊、美利奴羊、湖羊三个品种GNLY基因CDS区测序,利用生物信息学方法预测GNLY二级结构,推测氨基酸序列变化与蛋白结构和功能的关系;人工合成几条基于GNLY基因的多肽,测定合成多肽体外抑菌等生物学活性;挑选体外活性较强的多肽对小鼠乳房炎模型的进行治疗,测定合成多肽在体内的作用,为研发动物用抗感染药物提供科学依据。方法:(1)、通过采集萨福克羊、美利奴羊、湖羊外周血并提取RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增,对PCR产物进行测序分析。利用GNLY核苷酸序列推导出的氨基酸序列,再运用软件分析预测GNLY的二级结构,根据绵羊颗粒溶素GNLY和其单核苷酸多态性基因的推导的氨基酸序列设计多肽,按照保留其两亲性的a-螺旋和LOOP结构的设计原则,选取不同长度的多肽序列,设计合成多肽G16、G22、GS16、GC16。(2)、通过径向扩散试验和MIC试验检测合成多肽对大肠杆菌、沙门氏杆菌、葡萄球菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用;利用MTT试验观察合成多肽对人食管癌细胞(EC109)、人肾癌细胞(X786-0)的抑制作用。(3)、通过兔红细胞溶血试验验证合成多肽GC16的毒性;取分娩后8-10天的昆明系小鼠随机等量分为4组,分别记为PBS对照组(即不治疗)、多肽GC16治疗组、抗生素AMP治疗组、空白对照组。除空白对照组,其余每只小鼠均注射金黄色葡萄球菌,8 h后分别用PBS、GC16、AMP进行治疗。24 h后全部脱颈处死,取部分组织做病理切片观察,其余组织做CFU计数和TNF-α检测。结果:(1)、绵羊GNLY的二级结构含有8个α-螺旋和6个LOOP结构;根据测序结果分析,GNLY基因在萨福克羊、美利奴羊、湖羊体内核苷酸序列、氨基酸序列略有差异,与Genbank序列核苷酸同源性为91.85%、93.78%、92.35%,氨基酸同源性为93.15%、93.68%、92.47%。(2)、MIC试验中浓度大于250μg/m L的G16对大肠杆菌、葡萄球菌有抑制作用;浓度大于15μg/m L的GS16对大肠杆菌抑制作用明显,但对沙门氏杆菌、葡萄球菌以及金黄色葡萄球菌无明显的抑菌效果;浓度为62.5μg/mL的GC16对四种细菌均有抑制作用,其中,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果较为突出;而G22对四种细菌均无显著的抗菌效果;MTT试验结果表明合成多肽G16、GS16对癌细胞无抑制作用,G22和GC16对人食管癌细胞(EC109)、人肾癌细胞(X786-0)具有显著抑制作用,其中1 mg/mL G22和1 mg/mL GC16对EC109生长抑制率分别为88.21%,57.21%,对X786-0生长抑制率分别为96.37%和81.87%。(3)、溶血试验可知多肽对兔红细胞几乎没有毒性;动物试验中,观察PBS治疗组病理切片发现有炎性细胞浸润、充血、出血,腺泡组织不完整,组织间隙有大量细胞团块,金黄色葡萄球菌CFU计数和TNF-α水平明显高于其他3组(P小鼠乳腺炎模型治疗具有良好的效果,本研究为绵羊抗菌肽GNLY作为备选抑菌药物的研发打下了基础。

关键词：抗菌肽GNLY MIC试验 MTT试验小鼠乳房炎模型

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牛源地衣芽胞杆菌诱导小鼠临床乳房炎模型中热休克蛋白和核因子-κB表达上调

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解剖学杂志 2012年第5期35卷 596-599页

作者：甘露徐君李姝程跃蔡亚非安徽师范大学生命科学学院生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室芜湖241000

目的：为进一步认识奶牛乳腺炎发生的免疫病理机制和寻找更理想的防治方法提供基础研究数据。方法：从采集回来的奶牛奶样中用传统细菌培养方法和分子学方法分离鉴定主要病原菌，挑选其中地衣芽胞杆菌感染小鼠乳腺组织，H-E染色分析感... 详细信息

目的：为进一步认识奶牛乳腺炎发生的免疫病理机制和寻找更理想的防治方法提供基础研究数据。方法：从采集回来的奶牛奶样中用传统细菌培养方法和分子学方法分离鉴定主要病原菌，挑选其中地衣芽胞杆菌感染小鼠乳腺组织，H-E染色分析感染后小鼠乳腺组织变化，免疫组织化学方法分析热休克蛋白70（HSP70）和核因子-KB（NF-kB）在感染小鼠体内的表达。结果：感染后小鼠乳腺出现明显的炎症症状，组织病理学观察显示腺泡腔内有大量嗜中性粒细胞浸润。实验组中HSP70和NF-kB表达量比生理盐水组和空白组均有增加。结论：成功通过地衣芽胞杆菌诱发建立实验性乳房炎小鼠病理模型，实验组中HSP70和NF-kB表达量的增加说明其参与细菌感染小鼠乳腺组织后的病理过程。

关键词：奶牛地衣芽胞杆菌小鼠乳房炎模型热休克蛋白70 核转录因子-kB

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金黄色葡萄球菌裂解性噬菌体治疗乳房炎的实验研究

金黄色葡萄球菌裂解性噬菌体治疗乳房炎的实验研究

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作者：李跃吉林大学

学位级别：硕士

金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)是一种常见的病原菌，可以引起多种局部和全身性感染疾病。金黄色葡萄球菌也是引起奶牛的乳房炎的主要致病菌之一。随着抗生素的滥用，金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药性逐渐增强，使得治疗由该菌... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)是一种常见的病原菌，可以引起多种局部和全身性感染疾病。金黄色葡萄球菌也是引起奶牛的乳房炎的主要致病菌之一。随着抗生素的滥用，金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药性逐渐增强，使得治疗由该菌引起的奶牛乳房炎越来越困难。因此，迫切需要研发新型药物，以控制耐药性金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳房炎。由于噬菌体具有快速杀灭特定病原菌的能力，使其在治疗耐药菌感染方面表现出很大的应用潜力。本研究在患乳房炎的奶牛中分离得到金黄色葡萄球菌，命名为4P-1。以该菌为指示菌株，从污水系统中分离获得了对其具有裂解活性的噬菌体，命名为2Y-10。生物学特征研究表明：该噬菌体头部呈正二十面体，直径约为48±5nm，尾长约为160±5nm;基因组为dsDNA，大小约为39.3kb;其感染4P-1的潜伏期约30min，裂解期约70min;最适pH值为7.0;50°C环境中处理1h仍能保持较高活性;对氯仿及乙醚不敏感;最佳感染复数(MOI)为0.01.001。进一步利用4P-1建立了小鼠乳房炎模型，并对该模型进行了检测，发现105cfu/25μL的菌量可以很好的获得乳房炎模型：乳腺腺泡结构局部破溃严重，腺泡壁增生明显，腺泡上皮细胞坏死、脱落，腺泡间隙与腺泡内有大量炎性细胞浸润，乳腺组织内细菌含量可达2.3×108cfu/g，TNF-α水平显著提高。利用噬菌体2Y-10通过灌乳的方式对该模型进行了治疗。结果表明乳腺感染前1h以及感染后1h给予噬菌体105PFU，均可以使乳腺组织内细菌数量显著下降;缓解乳腺组织病变，能够明显减少乳腺组织中淋巴细胞的渗出，缓解充血和淤血，改善腺泡壁的水肿;使TNF-α等炎性因子水平显著降低，有效降低炎症反应。另外，乳腺感染后6h给予高剂量(105PFU)噬菌体同样能够起到缓解乳房炎的作用。本研究利用噬菌体对金黄色葡萄球菌小鼠乳房炎模型进行治疗，初步表明利用裂解性噬菌体对奶牛乳房炎进行防治具有可行性，为后续研究奠定了基础。

关键词：噬菌体小鼠乳房炎模型金黄色葡萄球菌

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