检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

小泛素样修饰在肝脏疾病中作用的研究进展

中华实验外科杂志 2022年第12期39卷 2497-2501页

作者：刘晓智姜忠敏天津市第五中心医院中心实验室 300450 天津市第五中心医院病理科 300450

小泛素样(SUMO)修饰是存在于真核生物中一种重要的翻译后修饰,参与许多细胞过程,如DNA修复、转录调控、蛋白质稳定、细胞周期等。许多研究证据表明SUMO化和去SUMO化之间出现不平衡或其成分改变,会导致各种病理变化,与肝脏疾病的进展密... 详细信息

小泛素样(SUMO)修饰是存在于真核生物中一种重要的翻译后修饰,参与许多细胞过程,如DNA修复、转录调控、蛋白质稳定、细胞周期等。许多研究证据表明SUMO化和去SUMO化之间出现不平衡或其成分改变,会导致各种病理变化,与肝脏疾病的进展密切相关;SUMO化修饰能促进肝细胞癌的进展、促进肝炎病毒复制、参与非酒精性脂肪性肝病和肝纤维化、在胆汁性肝硬化及酒精性肝病致病机制中发挥重要作用。鉴于SUMO化修饰信号通路在肝脏疾病中起重要作用,有望成为治疗肝脏疾病新的治疗靶点。本文就SUMO化修饰在肝脏疾病中作用的最新研究进展作一综述。

关键词：小泛素样修饰肝脏疾病靶向治疗进展

糖尿病减弱心肌组织肌浆网钙转运三磷酸腺苷酶的小泛素样修饰

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国循环杂志 2014年第11期29卷 932-936页

作者：姚晶邵兴慧宋光远赵振燕高海洋武德崴滕思勇吴永健中国医学科学院北京协和医学院国家心血管病中心阜外心血管病医院心内科北京市100037

目的:探索糖尿病是否可以通过心肌组织肌浆网钙转运三磷酸腺苷(ATP)酶(SERCA2a)的小泛素样修饰进而影响SERCA2a的活性与表达。方法:采用小动物超声和左心室压力测定评价2型糖尿病大鼠(糖尿病组)和对照大鼠(对照组)心肌收缩和舒张功能;... 详细信息

目的:探索糖尿病是否可以通过心肌组织肌浆网钙转运三磷酸腺苷(ATP)酶(SERCA2a)的小泛素样修饰进而影响SERCA2a的活性与表达。方法:采用小动物超声和左心室压力测定评价2型糖尿病大鼠(糖尿病组)和对照大鼠(对照组)心肌收缩和舒张功能;比较糖尿病组大鼠和对照组大鼠心肌组织内SERCA2a的表达情况,用免疫共沉淀方法以及小泛素样修饰试剂盒比较糖尿病组大鼠和对照组大鼠心肌组织内SERCA2a小泛素样修饰程度。结果:和对照组大鼠比较:糖尿病组大鼠心肌收缩、舒张功能均下降,尤以舒张功能下降更为明显;糖尿病组大鼠心肌组织内SERCA2a蛋白水平、基因表达和小泛素样修饰程度均下降;小泛素样修饰E2(Ubc9)的蛋白水平在糖尿病大鼠心肌中也下降,而小泛素样蛋白1(SUMO1)和小泛素样修饰E1(SAE1和SAE2组成的二聚体)蛋白水平无明显变化。结论:SERCA2a小泛素样修饰程度和Ubc9蛋白水平在糖尿病心肌组织中下降,提示SERCA2a小泛素样修饰和Ubc9与糖尿病的心肌损伤密切相关。

关键词：糖尿病肌浆网钙转运ATP酶小泛素样修饰

FLASH结合早幼粒细胞白血病蛋白 IV并增强p53的SUMO修饰

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物化学与分子生物学报 2024年

作者：王梦妮熊真真王之盈吴建华石晓钟华南理工大学生物科学与工程学院生物技术系南昌大学医学部基础医学院生理学系

FLASH/CASP8AP2为基因组中一个独特的基因，参与多个细胞调控过程，包括细胞凋亡、组蛋白基因pre-mRNA的加工、转录调控以及细胞周期进程等。临床医学研究表明，FLASH是急性淋巴细胞白血病的一种预后标志物，还是多种癌细胞存活的关键... 详细信息

FLASH/CASP8AP2为基因组中一个独特的基因，参与多个细胞调控过程，包括细胞凋亡、组蛋白基因pre-mRNA的加工、转录调控以及细胞周期进程等。临床医学研究表明，FLASH是急性淋巴细胞白血病的一种预后标志物，还是多种癌细胞存活的关键因子。因此，对FLASH功能的深入研究有望为相关疾病治疗提供新的视角。我们先前鉴定FLASH为p53的结合因子，并发现其能够增强p53的转录活性。在此基础上，本文阐述了FLASH和p53相互作用的分子机制。研究结果表明，p53 K386突变显著降低其与FLASH（aa 51～200）和FLASH-SIM（aa 1 534～1 806）的结合强度。然而，GST沉降分析仅能检测到SUMO与FLASH-SIM而不是FLASH（aa 51～200）之间的相互作用。在细胞中过量表达FLASH增强了整体性SUMO1修饰以及p53的SUMO1修饰，这可能是FLASH增强p53转录活性的一种作用机制。由于PML NB为细胞内SUMO的亚细胞反应器，而PML IV亚型能够特异性地增强p53的SUMO修饰，我们在此分析了FLASH与PML IV之间的相互作用，并鉴定了二者相互作用的结构域基础：FLASH-N3A（aa 501～802）和FLASH-C2（aa 1 807～1 981）均能与PML IV（aa 228～633）结合。进一步的研究显示，PML IV能够增强FLASH调控的整体性SUMO修饰和p53的SUMO修饰，即二者在功能上存在协同性。FLASH 与肿瘤抑制因子p53 和PML IV 之间的相互作用，丰富了对其功能的认识，有望揭示FLASH在肿瘤发生过程中的作用机制，为癌症的诊断和治疗提供新的思路。

关键词： FADD样白细胞介素1β转化酶相关巨蛋白 p53 小泛素样修饰早幼粒细胞白血病蛋白IV

低分子肝素通过促进SUMO2/3蛋白的表达及核转移对脑缺血再灌注大鼠发挥脑保护作用

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

第三军医大学学报 2017年第11期39卷 1123-1129页

作者：顾小飞李恒杨桐榉王凯王丽君王震陈力勇第三军医大学大坪医院野战外科研究所麻醉科重庆400042

目的探讨低分子肝素(low molecular weight heparins,LMWH)对大鼠脑缺血再灌注后NF-κB活化和表达的影响及其可能机制。方法通过线栓法对大鼠建立大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将总计60只大鼠分为3组:假... 详细信息

目的探讨低分子肝素(low molecular weight heparins,LMWH)对大鼠脑缺血再灌注后NF-κB活化和表达的影响及其可能机制。方法通过线栓法对大鼠建立大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将总计60只大鼠分为3组:假手术组(Sham,n=20)、模型组(I/R,n=20)、低分子肝素干预组(LMWH,n=20),并用1.5 mg/kg的低分子肝素液进行干预。观察大鼠脑缺血再灌注后神经功能评分、梗死灶体积,并用Western blot、免疫组化、免疫荧光检测各组IL-1β、NF-κB P65及SUMO2/3蛋白表达的变化。结果 (1)神经功能评分结果显示:MCAO后大鼠出现严重的神经功能障碍,经LMWH干预后能明显减轻MCAO导致的神经功能障碍(P小梗死体积(P<0.01),尤其能够有效改善MCAO模型梗死敏感区纹状体的损伤程度(P<0.01);(3)Western blot检测结果显示:再灌注24 h后I/R组大鼠脑组织中IL-1β、NF-κB P65蛋白表达均高于Sham组(P<0.01),而经LMWH干预后的大鼠IL-1β、NF-κB P65蛋白表达相比I/R组均下降(P<0.01);再灌注3 h后,与Sham组相比,I/R组大鼠脑组织中SUMO2/3蛋白表达增强(P<0.01),而LMWH干预后SUMO2/3蛋白表达进一步增强(P<0.01);(4)免疫组化和荧光检测结果显示:再灌注3 h后,与Sham组相比,I/R组大鼠脑组织中蛋白SUMO2/3水平增加,出现核内移现象(P<0.01),并且主要发生在神经元细胞内,而LMWH干预后发生SUMO2/3核内移现象的神经元细胞进一步增多(P<0.01)。结论 LMWH在大鼠脑缺血再灌注损伤模型中能够促进SUMO2/3表达及核内移,这可能对抑制NF-κB活化减少炎症因子生成产生影响。

关键词：缺血性脑卒中脑缺血再灌注损伤低分子肝素核因子-κB 小泛素样修饰

低分子肝素促进SUMO2/3表达及核转移发挥脑保护作用的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

低分子肝素促进SUMO2/3表达及核转移发挥脑保护作用的研究

作者：顾小飞第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景:低分子肝素(Low Molecular Weight Heparins,LMWH)在围术期脑卒中对脑缺血再灌注损伤(Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury,CIRI)的治疗一直存在争议,究其原因主要是担心其抗凝作用会影响血栓的移位及带来出血风险。然而一... 详细信息

研究背景:低分子肝素(Low Molecular Weight Heparins,LMWH)在围术期脑卒中对脑缺血再灌注损伤(Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury,CIRI)的治疗一直存在争议,究其原因主要是担心其抗凝作用会影响血栓的移位及带来出血风险。然而一系列研究发现在CIRI早期使用低剂量LMWH可以明显减小脑梗死体积,降低梗死边缘区炎症因子生成,而不影响PT、APTT。尽管近年来在肝素类抗炎作用的研究中发现LMWH能够通过抑制核因子kappa B(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)的活化降低炎症因子生成表现出脑保护效应,但对其内在调节机制的研究一直未有明确突破。一些研究推测LMWH可能通过物理结合方式阻止NF-κB核易位活化,这种说法虽然一定程度上能解释现象,但没有证据支撑,无法得到普遍认可。近年来类似研究很多,但大多都没有对LMWH调节NF-κB活化具体中间环节进行研究。而这一问题的探明对于LMWH在治疗领域尤其在CIRI的治疗中如何发挥抗炎作用具有重要的理论价值。近年来研究发现,CIRI早期顶叶皮层梗死边缘区SUMO2/3的增加非常显著,进一步研究发现SUMO2/3的增加能够提高神经细胞对CIRI的耐受性,对梗死半暗带具有保护作用。而其保护作用的发挥,与其能够抑制性调节应激性蛋白如NF-kB等的活化有关。鉴于此,在LMWH降低NF-κB活化的过程中,SUMO2/3是否发挥了中间调节作用有待研究证实。本课题意在就该问题进行深入研究,目的在于探明CIRI中LMWH对SUMO2/3的影响及SUMO2/3在LMWH调节NF-κB活化过程中的作用和意义。主要研究内容与方法:本课题通过建立大鼠大脑中动脉缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型模拟脑缺血再灌注损伤过程,用LMWH进行治疗处理,采用Western blot、免疫组化、免疫荧光等方法进行实验研究,研究内容包括:1、LMWH对CIRI大鼠神经功能及脑组织损伤的影响;2、LMWH对CIRI大鼠脑组织中NF-kB活化及炎症因子生成的影响;3、LMWH对CIRI大鼠脑组织中SUMO2/3表达及定位的影响。主要研究结果:***降低CIRI大鼠脑组织损伤,改善神经功能障碍1.1.神经功能评分结果显示:MCAO后大鼠出现严重的神经功能障碍,经LMWH干预后能明显减轻MCAO导致的神经功能障碍。1.2.大鼠在脑缺血再灌注后出现严重的脑梗死,而LMWH能明显减小梗死体积,尤其能够有效改善MCAO模型梗死敏感区纹状体的损伤程度。***降低CIRI大鼠脑组织中NF-kB的活化及炎症因子生成Western blot检测结果显示:再灌注24 h后I/R组大鼠脑组织中IL-1β、NF-κB P65蛋白表达均高于Sham组,而经LMWH干预后的大鼠IL-1β、NF-κB P65蛋白表达相比I/R组均下降。***促进CIRI大鼠脑组织中SUMO2/3蛋白的表达及核内转移*** blot检测结果显示:再灌注3h后,与Sham组相比,I/R组大鼠脑组织中SUMO2/3蛋白表达增强,而LMWH干预后SUMO2/3蛋白量表达进一步增强;3.2.免疫组化和荧光检测结果显示:再灌注3h后,与Sham组相比,I/R组大鼠脑组织中蛋白SUMO2/3水平增加,出现核内移现象,并且主要发生在神经元细胞内,而LMWH干预后发生SUMO2/3核内移现象的神经元细胞进一步增多。结论:LMWH在大鼠脑缺血再灌注损伤模型中能够促进SUMO2/3表达及核内移,这可能对抑制NF-κB活化减少炎症因子生成产生影响。

关键词：缺血性脑卒中脑缺血再灌注损伤低分子肝素核因子-κB 小泛素样修饰

地塞米松通过促进A549细胞SUMO化上调AQP4的表达

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

地塞米松通过促进A549细胞SUMO化上调AQP4的表达

作者：张孝玲天津医科大学

学位级别：硕士

目的:1.明确地塞米松对AQPs表达的影响。2.探索地塞米松对SUMOs表达的影响。3.探究SUMO化修饰与AQPs之间的调控关系。方法:1.地塞米松对A549细胞生长的影响及对AQPs表达的影响。选取A549细胞作为研究对象,代替人肺泡II型上皮细胞,加入... 详细信息

目的:1.明确地塞米松对AQPs表达的影响。2.探索地塞米松对SUMOs表达的影响。3.探究SUMO化修饰与AQPs之间的调控关系。方法:1.地塞米松对A549细胞生长的影响及对AQPs表达的影响。选取A549细胞作为研究对象,代替人肺泡II型上皮细胞,加入不同浓度的地塞米松后培养不同时间,显微镜下观察细胞的图像,CCK-8实验检测A549细胞的活力,TUNNEL实验检测细胞凋亡情况。Western Blot分别检测GR、AQP1、AQP4、AQP5蛋白在A549细胞中的表达水平。2.地塞米松对SUMO1、SUMO2/3及UBC9表达的影响。不同浓度的地塞米松作用于A549细胞不同时间,通过Western Blot分别检测SUMO1、SUMO2/3及UBC9蛋白在A549细胞中的表达水平。3.地塞米松作用于A549细胞后,检测SUMOs及AQPs的时空分布;敲低A549细胞中SUMO2/3后检测AQPs的表达。地塞米松作用A549细胞不同时间后,免疫荧光染色检测SUMO1、SUMO2/3、GR、AQP1、AQP4、AQP5的时空分布。构建SUMO2/3干涉质粒,转染A549细胞,PCR检测SUMO2和SUMO3的干涉效果,Western Blot检测SUMO2/3、UBC9、AQP1、AQP4、AQP5的表达水平。结果:1.显微镜下发现,高浓度的地塞米松作用后,A549细胞的形态无明显改变,排列稀疏,数量减少,而低浓度的地塞米松作用后A549细胞变化不明显;CCK-8及TUNNEL实验结果显示,低浓度的地塞米松对A549细胞的生长没有明显的抑制作用。地塞米松作用A549细胞后,GR的表达逐渐上升在36小时达到峰值。AQP1的表达无明显变化。AQP4的表达逐渐上升,在48小时达到峰值。AQP5的表达逐渐上升,24小时达峰值,后下降至正常水平。*** Blot结果显示,地塞米松作用A549细胞后,结合状态的SUMO1没有明显变化,游离状态的SUMO1轻微上升,结合状态的SUOMO2/3明显增加,在10、5x10、10M浓度时均具有统计学意义,游离的SUOMO2/3无明显变化。选取10M浓度的地塞米松作为后续实验的作用浓度。再次检测SUMO1、SUMO2/3及UBC9蛋白在A549细胞中的表达水平,结果发现地塞米松对SUMO1的表达无明显影响,SUMO2/3的表达增加,对UBC9的表达无明显影响。3.免疫荧光染色结果显示,地塞米松作用A549细胞后,SUMO1、SUMO2/3发生浆核移位,AQP1、AQP4的表达增加,AQP5的表达在24小时增加在48小时下降,GR遵循与AQP5相似的规律。PCR结果证实,SUMO2/3干涉质粒转染A549细胞后,SUMO2和SUMO3的表达降低。Western Blot结果显示,敲低SUMO2/3转染A549细胞后,在SUMO2/3表达下降的同时AQP4的表达也下降。结论:低浓度的地塞米松对细胞生长无明显抑制作用,可以促进AQP4蛋白表达,同时也可以促进细胞内蛋白的SUMO化修饰,当敲低SUMO2/3时,AQP4蛋白的表达量也下降。

关键词：地塞米松小泛素样修饰糖皮质激素受体水通道蛋白家族水肿

HDAC2自身磷酸化对其SUMO E3连接酶活性的作用及机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

HDAC2自身磷酸化对其SUMO E3连接酶活性的作用及机制研究

作者：肖勇第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景和目的：组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases, HDACs)是一类锌离子依赖性金属蛋白酶,此酶活性结构域位于蛋白的N末端,介导组蛋白或非组蛋白的去乙酰化修饰,特别是对核小体组蛋白去除乙酰化修饰,可致染色体凝聚而改变核小体... 详细信息

研究背景和目的：组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases, HDACs)是一类锌离子依赖性金属蛋白酶,此酶活性结构域位于蛋白的N末端,介导组蛋白或非组蛋白的去乙酰化修饰,特别是对核小体组蛋白去除乙酰化修饰,可致染色体凝聚而改变核小体结构,强力阻碍靶基因的转录激活,发挥靶基因转录沉默作用,特别是对抑癌基因、凋亡基因和分化基因的转录具有明显的抑制作用,进而诱发肿瘤,被公认为有效的抗癌靶点。目前共发现18种HDACs,按结构和功能可分为四大类,其中Ⅰ类包括HDAC1、2、3和8,其广泛表达于各种真核细胞内,对细胞的增殖、生长、凋亡和分化等发挥着重要的调节作用,与各种肿瘤的发生发展密切相关。其中HDAC2高表达于结直肠癌和肺癌等多种肿瘤中,其表达高低与肿瘤的预后明显相关,抑制HDAC2的活性或表达可显著抑制结直肠癌细胞的增殖和生长,并促进癌细胞凋亡。然而,研究发现持续应用去乙酰化酶抑制剂后,可诱发皮肤T细胞淋巴瘤、结直肠癌和肺癌细胞产生获得性耐药,但其耐药机制仍不清楚。但若将HDAC抑制剂与mTOR通路抑制剂sirolimus联合应用,则能协同增强HDAC抑制剂对结直肠癌的杀瘤效应。由此提示HDAC2在结直肠癌和肺癌等肿瘤的发生、发展和耐药中起重要作用,但其作用机制仍不清楚。另外,我们前期研究还发现,HDAC2除具有去乙酰化酶,直接下调核小体组蛋白的乙酰化修饰,沉默p53、p21、Bax和NOXA等抗细胞增殖和促凋亡相关基因的表达,或者直接去除这些蛋白乙酰化修饰,在结直肠癌的发生发展中发挥重要作用外;其还具有SUMO E3连接酶活性,且通过此功能介导,其可上调翻译起始因子eIF4E的SUMO化修饰,激活帽依赖性mRNA的翻译,上调促细胞增殖和抗细胞凋亡相关基因如ODC、C-myc、Survivin和Bcl-2的表达,在结直肠癌细胞增殖和凋亡调控中发挥重要作用。然而,尽管我们发现并证实HDAC2具有SUMO E3连接酶新功能,且证实此新功能可通过调节真核翻译起始因子eIF4E的SUMO化修饰,而激活帽依赖性mRNA的翻译,但HDAC2的SUMO E3连接酶新功能的生物学意义仍不清楚,特别是此新功能如何协同其去乙酰化酶活性,通过转录沉默和翻译激活而选择性调控有利于肿瘤发生、增殖、生长和凋亡相关基因的表达,在结直肠癌等肿瘤的发生、发展和耐药中发挥重要作用的机制仍不得而知。并提示,单纯阻断HDAC2的去乙酰化酶活性对肿瘤的治疗存在缺陷,这也可能是肿瘤耐药的主要原因。为此我们认为HDAC2双酶活性协同抑制策略可能对肿瘤的治疗具有更好的疗效。然而,目前所有靶向HDAC2的抗肿瘤药物均是针对去乙酰化酶活性而设计,而针对SUMO E3连接酶的抑制剂仍待研发。而要设计研发靶向HDAC2 SUMO E3连接酶活性的抑制剂,我们首先必须了解此酶的活化调控机制。HDACs的活性受到多种机制的调控,包括翻译后修饰、亚细胞定位和辅阻遏蛋白质复合物相互作用。其中,翻译后修饰不仅直接影响HDACs的活性,而且影响其亚细胞定位和蛋白质复合物相互作用,从而间接调控其转录抑制活性。翻译后修饰方式主要包括磷酸化、乙酰化、泛素化和SUMO化等,其中磷酸化是HDAC2的主要翻译后修饰方式,存在于羧基端的S394、S407、S411、S422和S424等5个丝氨酸位点可被磷酸化修饰。另外,分析发现HDAC2的磷酸化修饰区域正好位于其SUMO E3连接酶的结构域内,且磷酸化修饰和SUMO修饰之间存在密切的联系。为此,我们推测HDAC2的自身磷酸化在其SUMO E3连接酶功能的发挥中起重要的调节作用,但有待证实。在体内磷酸化修饰HDAC2的激酶主要是CKⅡ,CKⅡ也可在体内外介导HDAC2394、422和424位丝氨酸的磷酸化修饰。与此相一致,CKⅡ也可介导HDAC1的磷酸化修饰,且突变HDAC1磷酸化位点S421A、S423A而消除其磷酸化修饰,反而促进HDAC1的SUMO化修饰。由此提示,CKⅡ介导的HDAC2自身磷酸化修饰也可能与其自身SUMO化修饰之间存在必然的联系,而HDAC2自身SUMO化修饰是其发挥SUMO E3连接酶活性的基础。然而,关于CK2介导的HDAC2磷酸化修饰对其自身SUMO E3连接酶活性的调控作用还未见报道。为此,本研究将主要采用基因点突变技术,初步探讨HDAC2自身磷酸化对其SUMOE3连接酶的影响和作用,并明确磷酸化修饰对HDAC2 SUMO E3连接酶的调节机制,为进一步设计研发靶向抑制HDAC2 SUMO E3连接酶活性的抗癌新药奠定基础。方法：本研究将首先通过基因点突变和片段缺失突变技术,构建HDAC2已知磷酸化位点S394A、S407A、S411A、S422A和S424A的磷酸化位点突变体和片段缺失突变体,后应用反应HDAC

关键词：结、直肠肿瘤 HDAC2 磷酸化修饰小泛素样修饰 E3连接酶

BVDV体外感染与细胞SUMO通路关系的初步研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

BVDV体外感染与细胞SUMO通路关系的初步研究

作者：韩玉霞石河子大学

学位级别：硕士

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)是一种重要的动物疫病病原,牛感染后临床症状主要表现为腹泻、母畜流产和持续性感染等,造成重大的畜牧业经济损失。该病在全球范围内广泛分布,在我国20多个省、市、自治区都有流行... 详细信息

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)是一种重要的动物疫病病原,牛感染后临床症状主要表现为腹泻、母畜流产和持续性感染等,造成重大的畜牧业经济损失。该病在全球范围内广泛分布,在我国20多个省、市、自治区都有流行。目前,研究人员对于BVDV感染的致病机制尚不清楚。小泛素样修饰(Small Ubiquitin-related Modifier,SUMO)是一种重要的蛋白质翻译后修饰,能对病毒蛋白进行调控,进而影响病毒的复制等。关于SUMO修饰能否调控BVDV感染尚没有报道。因此,本研究从宿主SUMO通路的角度出发,研究BVDV感染对宿主细胞的影响及其机制,这将有利于我们寻找新型的BVDV防控策略。为此,本研究以BVDV和牛胚肾细胞(Madin-Darby Bovine Kidney,MDBK)为研究对象,主要开展以下的研究工作:1.不同生物型BVDV感染MDBK细胞后类泛素基因转录水平的检测。培养致细胞病变型(CP型)BVDV NADL病毒和非致细胞病变型(NCP型)BVDV shz 132病毒;RT-q PCR反应测定两种病毒拷贝数;Reed-Muench法测定NADL病毒TCID50值。以100 TCID50 NADL病毒和同等拷贝数的shz 132病毒分别感染MDBK细胞不同时间(4 h、12 h、24 h、48 h),RT-q PCR反应检测细胞类泛素基因SUMO1、SUMO2、SUMO3、Ubc9的转录水平。结果显示,NADL和shz 132病毒拷贝数分别是1.13×1011copies/m L和1.77×1011copies/m L,NADL TCID50值是104.9 TCID50/0.1 m L。RT-q PCR分析显示,与对照组相比,两种BVDV病毒感染都能引起MDBK细胞SUMO1、SUMO2、SUMO3、Ubc9基因的相对表达量变化。在shz 132感染的细胞中,SUMO1、SUMO2、SUMO3的相对表达量在各个感染时间都高于或接近于BVDV NADL感染的细胞,且在感染后24 h,以上三个基因的相对表达量下调,差异极显著(P泛素蛋白的相互作用分析。PCR方法扩增细胞类泛素基因SUMO1/SUMO2/SUMO3/Ubc9,进行TA克隆,经菌液PCR、双酶切、测序鉴定,构建重组原核表达载体p GEX-4T-1-SUMO1/SUMO2/SUMO3/Ubc9,转化*** BL21(DE3)表达菌,以0.1 m M IPTG诱导表达不同时间,SDS-PAGE鉴定表达效果。同时,诱导表达已鉴定正确的p ET-32a(+)-E0重组表达载体的转化菌,GST-pull down方法分析E0蛋白与类泛素蛋白的直接相互作用。测序结果表明,成功构建了p MD18-T-SUMO1/SUMO2/SUMO3/Ubc9克隆载体和p GEX-4T-1-SUMO1/SUMO2/SUMO3/Ubc9原核表达载体,核苷酸无突变;SDS-PAGE电泳表明,成功诱导表达了SUMO1/SUMO2/SUMO3/Ubc9-GST可溶性融合蛋白,分子量依次为37.3 k Da、36.6k Da、37.6 k Da、43.5 k Da;GST-pull down实验证明BVDV E0蛋白不能结合细胞类泛素蛋白。以上所有的研究结果表明,BVDV感染影响了M

关键词：牛病毒性腹泻病毒牛胚肾细胞小泛素样修饰相互作用病毒复制

小泛素相关修饰物异常表达在常见恶性肿瘤发生发展中的作用机制研究进展

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

山东医药 2021年第12期61卷 107-111页

作者：姜忠敏刘晓智赵坡天津市第五中心医院天津300450 中国人民解放军总医院

小泛素样蛋白(SUMO)修饰是一种可逆的翻译后修饰,已成为一种重要的分子调控机制,参与基因表达、基因组维持、DNA损伤修复、转录调控和细胞周期等多种生物学过程。如SUMO通路的稳态被破坏,异常SUMO会导致DNA损伤、转录调控失调,以及促进... 详细信息

小泛素样蛋白(SUMO)修饰是一种可逆的翻译后修饰,已成为一种重要的分子调控机制,参与基因表达、基因组维持、DNA损伤修复、转录调控和细胞周期等多种生物学过程。如SUMO通路的稳态被破坏,异常SUMO会导致DNA损伤、转录调控失调,以及促进癌症干细胞的干性维持,从而使细胞增殖、迁移和凋亡出现异常,促进肿瘤的发生发展。在白血病中,异常SUMO化修饰导致转录调控因子表达失调,致使髓系分化、细胞周期和凋亡受阻;在乳腺癌中,异常SUMO化修饰使损伤的DNA不能得到及时修复,并激活了一些癌基因;在前列腺癌中,异常SUMO化修饰促使转移相关因子表达及抑癌基因p53的活化;在肝癌中,异常SUMO化修饰通过影响细胞周期、调控部分转录因子促进肿瘤发生和转移;在结直肠癌中,异常SUMO化修饰通过调控细胞周期及相关癌基因的转录因子来调控细胞的增殖。

关键词：小泛素样修饰 DNA损伤转录调控失调肿瘤干细胞白血病乳腺癌前列腺癌肝癌结直肠癌