检索结果-南通市图书馆

作者：王开金重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：结核病病程的延绵和复发所显示的持留现象，已经是久为人知的临床事实，但至今对结核分枝杆菌持留菌本质、发生机制及临床治疗仍无确切的认识和明确的界定，尤其是在结核分枝杆菌持留菌的临床药物治疗方面，几乎处于停滞状态... 详细信息

目的：结核病病程的延绵和复发所显示的持留现象，已经是久为人知的临床事实，但至今对结核分枝杆菌持留菌本质、发生机制及临床治疗仍无确切的认识和明确的界定，尤其是在结核分枝杆菌持留菌的临床药物治疗方面，几乎处于停滞状态，目前为止，还没有针对结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）持留菌的有效药物，而研究发现MTB能够进入巨噬细胞，并且进入巨噬细胞后，由于特殊的基因在巨噬细胞内的表达，从而达到适应巨噬细胞胞内环境从而达到持留作用。而近期的研究发现eis（Enhance intracellular survival）基因特异性的表达于致病的MTB复合群，具有提高MTB在巨噬细胞中的生存能力，能够达到长期持留。eis基因产物是一种可溶性分泌型蛋白，分子量约为42kd，能作用于巨噬细胞内及细胞外，有研究证实该种42kd蛋白能够影响巨噬细胞白介素（interlukin,IL）-10及肿瘤坏死因子（tunlornecrosisfactor，TNF）-a分泌，抑制巨噬细胞活化，于MTB的持留有一定关系。在机体免疫力下降时，持留MTB就会在体内复燃，发生结核病，结核病有卷土重来的趋势，其发病率及死亡率明显上升，持留态结核分枝杆菌是结核病内源性复燃和病程绵延的根源，以增殖期结核分枝杆菌为靶标的抗结核药对处在非增殖期的持留态MTB无效，这是目前全球防治结核病的主要障碍之一。近年来中草药在结核病的慢性感染治疗中日益得到重视，研究发现猫爪草的有效成分小毛莨内酯（Ternatolide，Tern）能显著增强细胞毒性T淋巴细胞（Cytotoxiclymphocyte,CTL）杀菌能力，达到杀灭持留菌作用[3]，我们的前期实验研究表明MTBeis（Enhance intracellular survival，eis）基因特异性表达于致病MTB复合群，具有提高MTB在巨噬细胞中的生存能力，与MTB的持留性密切相关。 Tern是从猫爪草（Ranunculus ternatus Thunb）的有效成分，祖国医学认为其性味辛甘，并有化痰散结、解毒消肿，归类于养阴药，临床主要用于治疗肺结核、淋巴结结核，而Tern对eis基因的影响目前尚无研究，本实验旨在探索Tern对重组耻垢分支杆菌（Mycobacteriumsmegmatis，MS）生长增殖情况、eis基因、蛋白表达的影响。进一步研究猫爪草对持留分支杆菌的有效成分、作用机理及作用强度。方法： 1从平板上挑取5×105MS-eis-PMV261分别接种于有Tern（200mg/L）卡那霉素抗性的LB肉汤培养基中作为试验组，MS-eis-PMV261单独培养作为对照组，同样于37℃，250r/min震摇培养，于第1、2、3、4、5和6天在两组中各取200μL测量菌液在波长600nm处A值，根据所测A值绘制增殖曲线。 2提取菌液DNA以RT-PCR方法检测Tern对eis基因表达的影响取培养6天Tern干预的试验组及对照组各3ml离心收集菌液后提取细菌DNA，溶于20ul双蒸水中。取1ul为模板RT-PCR扩增eis基因。eis基因的检测引物序列为上游：5’-ATGTTCCTACTGGCCGCGGC-3’;下游：5’–TCAGAACTCGAACGCGGTCTGG-3’。PCR反应条件为：95oC预变性3min;95oC变性30s，60oC退火30s，72oC延伸30s,共35个循环后再72oC延伸10min。PCR产物经1%琼脂糖电泳分析，并以Quantity One软件分析其条带灰度值量化基因表达水平。 3免疫印迹法SDS-PAGE及western blot检测Tern对EIS蛋白表达的影响分别取培养6天的3ml菌液以12000g,2min离心保留细菌及30ul菌液并加入5x蛋白上样缓冲液后沸水浴10min。电泳开始前，配制12%的分离胶以及5%的浓缩胶，收集的菌液蛋白离心后取上清，并进行SDS-PAGE电泳，电泳后，使用R-250考马斯亮蓝染色30min,脱色液脱色过夜后观察两组间42kd处蛋白表达情况。采用半干电转移方式将蛋白条带转印至PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭，以稀释的痰菌阳性结核患者血清（1:100）为一抗，过氧化物酶标记的羊抗人IgG（1:5000）为二抗，用DAB显色观察并分析蛋白条带。 4统计学方法数据以均数标准差x±s表示,采用SPSS18.0统计软件,两组间比较进行t检验。结果： 1Tern干预的试验组与未干预对照组MS-eis-PMV261的增殖曲线无明显差异。 2在给予Tern试验组eisDNA条带与对照组比较明显减弱。 3菌液处理后行SDS-PAGE电泳及western blot，结果显示含EIS基因的MS-eis-PMV261未给予Tern药物干预独立培养的对照组在42ku处可表达

关键词：持留分枝杆菌 eis基因小毛莨内酯

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小毛莨内酯对重组耻垢分枝杆菌eis基因表达的影响

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中国微生态学杂志 2013年第1期25卷 14-16页

作者：王开金易敏李升锦重庆医科大学附属第二医院呼吸内科重庆400010

目的研究小毛莨内酯(Ternatolide,Tern)对重组耻垢分枝杆菌生长增殖及其eis基因表达的影响。方法将5×105MS-eis-PMV261接种于LB培养基培养并加入200 mg/L的Tern作为实验组,MS-eis-PMV261单独培养作为对照,不同时间点测量取菌液波长为60... 详细信息

目的研究小毛莨内酯(Ternatolide,Tern)对重组耻垢分枝杆菌生长增殖及其eis基因表达的影响。方法将5×105MS-eis-PMV261接种于LB培养基培养并加入200 mg/L的Tern作为实验组,MS-eis-PMV261单独培养作为对照,不同时间点测量取菌液波长为600 nm的A值,根据所测A值绘制增殖曲线;提取菌液DNA以RT-PCR方法检测Tern对eis基因表达的影响;免疫印迹法SDS-PAGE及Western Blot检测Tern对EIS蛋白表达的影响。结果 Tern对两组重组耻垢分枝杆菌增殖差异无统计学意义(P>0.05);Tern可抑制eis基因的表达(P<0.05);SDS-PAGE及Western Blot检测发现Tern可显著降低EIS蛋白的表达(P<0.05)。结论 Tern对重组耻垢分枝杆菌的增殖无影响,但可抑制结核分枝杆菌eis基因及其表达的蛋白。该结果对研究持留性结核分枝杆菌的药物治疗提供了实验依据。

关键词：耻垢分枝杆菌 eis基因小毛莨内酯持留性

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小毛莨内酯对结核病人颗粒裂解肽基因表达的作用

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中国药理学通报 2001年第4期17卷 405-408页

作者：詹莉戴华成杨治平易文舒平陈世明中南大学湘雅二医院儿科学教研室长沙410011 美国新泽西医学牙学医学院药物分子生物学研究所湖南农业大学植物科学研究院长沙410128 华中科技大学同济医学院药学院武汉430030 湖南省结核病防治所长沙410006

目的　研究小毛莨内酯 (Ternatolide ,Tern)对健康成人 ,初诊未治、耐药肺结核病人及儿童结核患儿周围血淋巴细胞 (PBL)体外活化后颗粒裂解肽 (granulysin ,GLS)mRNA表达的作用 ,探索其抗结核菌的分子免疫学机理。方法　采用反转录聚合... 详细信息

目的　研究小毛莨内酯 (Ternatolide ,Tern)对健康成人 ,初诊未治、耐药肺结核病人及儿童结核患儿周围血淋巴细胞 (PBL)体外活化后颗粒裂解肽 (granulysin ,GLS)mRNA表达的作用 ,探索其抗结核菌的分子免疫学机理。方法　采用反转录聚合酶链反应半定量 (QC RT PCR)方法 ,测定不同剂量的Tern对以上 4组人群PBL颗粒裂解肽mRNA表达水平的影响。结果　当Tern在 10 0mg·L-1,2 0 0mg·L-1浓度时 ,均能诱导以上 4组人群体外活化的PBLGLSmRNA的表达 ,且各组诱导表达水平无显著差异。结论　Tern可能是通过提高CTL的效应分子GLSmRNA表达的水平 ,杀灭胞内致病菌MTB ,其诱导作用呈现剂量依赖性。

关键词：小毛莨内酯猫爪草颗粒裂解肽 QC-RT-PCR 结构休眠菌基因表达

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小毛莨内酯对结核休眠菌感染病人GLS mRNA表达的影响

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中国防痨杂志 2001年第5期23卷 275-277页

作者：詹莉戴华成杨治平易文成诗明舒平中南大学湘雅二医院长沙410011 美国新泽西医学牙学医学院药分子生物学研究所湖南农业大学植物科学研究院 410128 湖南省结核病防治所 410006 华中科技大学同济医学院药学院 430030

目的　研究小毛莨内酯抗人体结核休眠菌感染的分子免疫学机理。方法　采用PCR方法检测结核病人PBLs中结核菌 16kDα 晶状体同源蛋白DNA阳性的 5 6例患者为本研究对象 ;采用反转录聚合酶链反应半定量 (QC RT PCR)方法 ,测定不同剂量的Ter... 详细信息

目的　研究小毛莨内酯抗人体结核休眠菌感染的分子免疫学机理。方法　采用PCR方法检测结核病人PBLs中结核菌 16kDα 晶状体同源蛋白DNA阳性的 5 6例患者为本研究对象 ;采用反转录聚合酶链反应半定量 (QC RT PCR)方法 ,测定不同剂量的Tern .对以上病人PBL颗粒裂解肽mRNA表达水平的影响。结果　当Tern .在 10 0mg L ,2 0 0mg L浓度时 ,能诱导结核休眠菌感染病人体外活化的PBLGLSmRNA的表达。结论　Tern .可能通过促进颗粒裂解肽mRNA的表达 ,增强机体CTL杀菌能力 ,达到抗结核休眠菌的作用。

关键词：小毛莨内酯颗粒裂解肽结核休眠菌 18kD α-晶状体同源蛋白 GLS mRNA

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新型抗结核活性化合物的设计、合成与活性筛选及新型核苷衍生物ODE-TFV的制备与抗HBV活性评价研究

新型抗结核活性化合物的设计、合成与活性筛选及新型核苷衍生物OD...

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作者：李思阳北京协和医学院

学位级别：硕士

本论文的工作主要分为两部分：第一部分为新型抗结核活性化合物的设计、合成与活性筛选研究。在该部分工作中,首先对天然产物小毛莨内酯及其类似物的合成与体内外抗结核活性进行了研究。小毛莨内酯被认为可能是猫爪草中抗结核的有效成... 详细信息

本论文的工作主要分为两部分：第一部分为新型抗结核活性化合物的设计、合成与活性筛选研究。在该部分工作中,首先对天然产物小毛莨内酯及其类似物的合成与体内外抗结核活性进行了研究。小毛莨内酯被认为可能是猫爪草中抗结核的有效成分。文献报道其可能作用机制是通过增加外周血淋巴细胞颗粒裂解肽的表达,间接杀死结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)。如果该作用机制属实,猫爪草的抗结核作用是通过调节细胞蛋白的作用而实现,该机制与临床药物不同。而且,该作用机制对于抗休眠结核和耐药结核具有潜在优势。本论文针对小毛莨内酯可能的抗结核活性,对其进行了定向全合成,同时合成了一系列的衍生物,所有合成得到的目标化合物的结构均经过1H-NMR、MS确证。采用直观快速药敏实验技术,评价了其体外的抗结核活性,并在建立的小鼠急性气溶胶感染结核病模型中,评价了小毛茛内酯的体内抗结核活性。研究结果显示,小毛茛内酯及其部分衍生物在体外对MTB H37Rv ATCC27294菌株表现出了微弱的抑制活性,在小鼠急性气溶胶感染结核病模型中并没有表现出明显的抗结核作用。同时,本部分也进行了基于吩噻嗪类化合物的新型抗结核小分子化合物的设计、合成及活性筛选研究。吩噻嗪类化合物在临床上是一类传统的治疗精神疾病药物,但同时也有一定的抗结核活性,其可能的作用机制也深受关注。本论文针对吩噻嗪类化合物的抗结核活性,以氯丙嗪为模版分子,利用Discovery Studio3.0构建相应的3D药效团模型,并对虚拟化合物库进行筛选。对筛选结果进行手动择优选择,并进行合成和体外抗MTB H37Rv ATCC27294的活性评价。本部分共筛得到目标化合物15个,其中,13个目标物为本论文合成得到,所有合成化合物的结构均经过’H-NMR、HR-MS确证。体外抗结核分枝杆菌活性结果显示,化合物51(多巴胺)在体外对受测结核菌体现出中等活性强度的抑制作用,最小抑菌浓度(MIC)为8.0μg/ml,与吩噻嗪类化合物相比,该化合物更像先导物(lead-like),具有更大的结构修饰空间。第二部分为新型核苷衍生物替诺福韦十八烷氧乙基酯(ODE-TFV)的制备与抗HBV活性评价研究。ODE-TFV,为核苷类乙肝病毒(HBV)DNA聚合酶抑制剂,是新结构抗HBV候选化学药物。ODE-TFV为替诺福韦的前药化合物,口服吸收后在体内游离出活性成分替诺福韦发挥药效。本论文在合成目标化合物ODE-TFV的基础上,分别以HBV基因转染的人肝癌2.2.15细胞模型和DHBV血清感染雏鸭模型,评价了其抑制乙型肝炎病毒复制的体外和体内活性、以及改善肝脏病理的作用效果。研究结果显示,在体外,ODE-TFV抑制HBV DNA复制的IC50值为0.38±0.18μmol·L-1,抑制活性较对照药TFV-DF和3TC分别强约18倍和13倍;在体内,ODE-TFV100mg·kg-1和200mg·kg-1组,在给药7天和14天显示有显著性的DHBV DNA抑制活性;ODE-TFV100mg·kg-1和200mg-kg-1组能够明显改善DHBV引起的肝细胞坏死和炎细胞浸润,并有一定量效关系。综上,论文共合成化合物54个(其中,新化合物8个),目标化合物20个(其中,新结构目标物3个)。化合物的结构均经1H-NMR确证,目标化合物的结构还经HR-MS确证。论文对γ-羰基-δ-戊内酯和吩噻嗪类两种骨架类型的化合物进行了合成与初步抗结核活性研究,在论文所采用的实验条件下,小毛莨内酯及其结构类似物并没显示出明显抗结核作用,其原因有待进一步研究。对基于吩噻嗪类化合物的体外抗结核分枝杆菌活性筛选研究发现,化合物9(多巴胺)对受测结核菌体现出中等活性强度的抑制作用,最小抑菌浓度(MIC)为8.0μg/ml,为进一步修饰与优化提供了一个新的先导化合物。新型核苷衍生物ODE-TFV的体内外抗乙型肝炎病毒作用研究结果显示,ODE-TFV在体内外对HBV均显示明显的抑制活性,提示该品具有较好的开发应用前景。

关键词：小毛莨内酯吩噻嗪抗结核十八烷氧乙基替诺福韦酯化学合成抗病毒

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猫爪草有效成分抗结核治疗进展

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检验医学与临床 2008年第6期5卷 354-356页

作者：何柯新吕世静广东医学院检验学院湛江524023

临床研究证明,中药猫爪草抗结核效果显著,但机制尚未明了。因此,了解结核杆菌休眠和复苏的机制以及猫爪草提取物对结核分枝杆菌临床分离株的可能作用靶标意义重大。《中国药典》将猫爪草(radix ranunculi ternati)划分为毛莨科植物,是... 详细信息

临床研究证明,中药猫爪草抗结核效果显著,但机制尚未明了。因此,了解结核杆菌休眠和复苏的机制以及猫爪草提取物对结核分枝杆菌临床分离株的可能作用靶标意义重大。《中国药典》将猫爪草(radix ranunculi ternati)划分为毛莨科植物,是小毛莨(ranunculus ternatus thunb)的干燥块根,是20世纪50年代在河南省信阳地区发现的一种草药,原系野生,在长江中下游一带均有生长。其性平,味甘、辛,性温,归肝、肺经,具有清热解毒、消肿散结之功效。民间主要用于治疗瘰疬、淋巴结核未溃、肺结核、淋巴结炎、咽喉炎、腮腺炎、疖病、肿瘤等疾病。[第一段]

关键词：猫爪草小毛莨内酯颗粒裂解肽 γ-酮-δ-戊内酯复苏促进因子

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