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作者：李红颖成都中医药大学

学位级别：硕士

藏药小檗皮为小檗科植物甘肃小檗Berberis kansuensis Schneid.及其同属多种植物的干燥内皮,是藏药中典型的多基原品种。由于小檗皮与黄柏在外观性状上的相似性,课题组调查发现市场中存在黄柏与小檗皮混用的现象;同时课题组了解到目前... 详细信息

藏药小檗皮为小檗科植物甘肃小檗Berberis kansuensis Schneid.及其同属多种植物的干燥内皮,是藏药中典型的多基原品种。由于小檗皮与黄柏在外观性状上的相似性,课题组调查发现市场中存在黄柏与小檗皮混用的现象;同时课题组了解到目前各藏医院、藏药厂及药材市场上使用的主流品种包括匙叶小檗*** Schneid.、鲜黄小檗*** Maxim.、甘肃小檗*** Schneid.和刺红珠*** Franch.,不同基原小檗皮之间的传统性状相似,在藏医用药中常互相代替,但课题组在研究过程中发现不同基原小檗皮的药用功效存在差异,质量也参差不齐,这些混用情况严重影响了小檗皮的质量评控与临床使用。因此,开发更加准确、简便、快速的小檗皮品种鉴别方法对小檗皮及其成药的质量控制和市场监管具有重要意义。传统的鉴定方法有一定的局限性,本研究从分子生物学角度,采用DNA分子鉴定技术对小檗皮进行真伪鉴别和品种鉴定,并利用实时荧光定量VPCR技术初步建立藏成药中小檗皮的定量检测方法。目的:1.基于位点特异性PCR技术结合荧光可视化分析技术建立小檗皮及其混淆品黄柏的荧光可视化真伪鉴别方法,实现对小檗皮药材及其藏成药当中小檗皮的快速真伪鉴别;基于位点特异性PCR技术结合荧光可视化分析技术建立藏药小檗皮4种主流品种的特异性可视化鉴别方法,实现对小檗皮药材及其藏成药当中小檗皮品种的基原鉴别。2.基于实时荧光定量VPCR技术建立小檗皮药材的定量检测方法,实现对藏成药中原料药小檗皮的定量检测。3.进一步优化藏药小檗皮DNA检测方法,实现对小檗皮药材及藏成药中小檗皮的快速检测。方法:1.对小檗皮和混淆品黄柏的ITS2序列进行对比分析,筛选出小檗皮药材特异性DNA序列,针对该序列分别设计小檗皮和混淆品黄柏的特异性引物,采用VPCR技术结合荧光可视化分析技术,进一步缩短扩增时间,同时对体系中的退火温度、引物浓度、Taq酶用量以及循环数进行优化,并利用所建立的可视化检测方法对小檗皮和黄柏的商品药材及藏成药中的小檗皮进行快速真伪鉴别,以证明方法的实用性。2.对比藏药小檗皮主流品种匙叶小檗*** Schneid.、鲜黄小檗*** Maxim.、甘肃小檗*** Schneid.和刺红珠*** Franch.的rbc L序列,利用SNPs位点,设计4种主流品种的特异性引物,采用两步法PCR,引入SYBR GreenⅠ染料检测PCR扩增产物,实现对扩增产物的荧光可视化检测。对体系中的退火温度、引物浓度、Taq酶用量以及循环数进行优化,利用所建立的可视化检测方法对小檗皮商品药材和藏成药中的小檗皮进行基原品种鉴定,以证明方法的实用性。3.根据实时荧光定量VPCR原理,建立藏成药中小檗皮药材的定量检测方法,再对方法的特异性灵敏度进行考察;为进一步缩短检测时间,考察了3种提取方法(试剂盒提取法、CTAB法和直接裂解法)对实时荧光定量VPCR体系的影响;考察DNA含量与药材重量的线性关系,最后利用所建立的小檗皮实时荧光定量VPCR体系对八味小檗皮胶囊、四味姜黄汤散、八味獐牙菜胶囊中小檗皮含量进行定量检测。4.在碱裂解法的基础上,考察药材及藏成药的用量、Na OH溶液的浓度、体积,建立小檗皮药材及其藏成药基因组DNA的快速提取方法,采用ITS2通用引物对提取出的DNA进行质量检测,观察凝胶电泳条带及荧光显色,最后利用所建立的碱裂解法提取16批小檗皮商品药材及10批藏成药的基因组DNA,并利用常规PCR技术对基因组DNA的质量进行验证。结果:1.建立的超快速VPCR可视化荧光检测体系可以将扩增检测时间从传统的2小时左右缩短至30分钟;检测限低至10 pg/μL;对18个批次的小檗皮和黄柏商品药材和10批藏成药进行分析,检测结果发现其中15个批次的药材样本为小檗皮,3个批次的药材样本为黄柏,检测结果经测序验证,与测序结果100%一致;对10批藏成药进行真伪鉴定时发现,有9个批次的样本中含有正品小檗皮,1个批次的藏成药中含有混伪品黄柏。2.本研究成功建立了匙叶小檗、甘肃小檗和刺红珠的特异性可视化鉴别体系。利用4种小檗皮的通用引物和所建立的特异性可视化鉴别体系对16个批次的小檗皮商品药材进行分析,发现其中4个样本为匙叶小檗,6个样本为甘肃小檗,2个样本为刺红珠,3个样本为鲜黄小檗,经rbc L通用引物测序与Gen Bank数据库中序列一致,剩余1个阴性样本,鉴定为混伪品黄柏;同样对9批含有小檗皮的藏成药进行基原品种鉴别时发现,其中2个批次的藏成药在投料时同时加入了匙叶小檗及甘肃小檗,1批次加入了匙叶小檗及刺红珠,3个批次的藏成药仅加入了甘肃小檗,剩余3个批次加入了鲜黄

关键词：小檗皮特异性DNA VPCR 质量控制藏成药碱裂解

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电子加速器辐照对藏药小檗皮中主要有效成分及灭菌效果的影响

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中南药学 2023年第12期21卷 3192-3197页

作者：吴剑英尼玛次仁张国庆张继稳陈丽华谢和兵安徽中医药大学药学院合肥230012 西藏神猴药业有限责任公司西藏日喀则857000 长三角药物高等研究院江苏南通226000 江苏云视药物科技有限公司江苏南通226000 江西中医药大学南昌330004

目的探究电子加速器辐照对小檗皮粉末和其水提液的灭菌效果及对主要活性成分的影响。方法采用2、4、6、8、10 kGy辐照剂量对小檗皮粉末和水提液进行灭菌,分别比较辐照前后小檗皮粉末和水提液的性状、显微特征、薄层色谱图、微生物水... 详细信息

目的探究电子加速器辐照对小檗皮粉末和其水提液的灭菌效果及对主要活性成分的影响。方法采用2、4、6、8、10 kGy辐照剂量对小檗皮粉末和水提液进行灭菌,分别比较辐照前后小檗皮粉末和水提液的性状、显微特征、薄层色谱图、微生物水平、主要活性成分(盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、木兰花碱)的含量变化和指纹图谱相似度。结果经不同辐照剂量灭菌后,小檗皮粉末和水提液的性状、显微特征、薄层色谱图均未见明显变化,盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、木兰花碱的含量无显著变化(P>0.05),细菌菌落数、霉菌和酵母菌菌落总数显著降低(P小檗皮中的主要有效成分无显著影响,在4 kGy时达到良好的灭菌效果,电子束辐照适用于小檗皮及其提取液的灭菌。

关键词：小檗皮辐照有效成分含量灭菌指纹图谱

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HPLC法测定藏药小檗皮中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的含量

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中国民族医药杂志 2018年第8期24卷 42-44页

作者：次仁许芳高万吉腾飞西藏藏医学院西藏拉萨850000 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室北京协和医学院&中国医学科学院药物研究所北京100050

目的:建立藏药小檗皮中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的含量测定方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Agilent XDBC18(4.6mm×50mm,5μm),流动相为水-乙腈-乙酸-三乙胺(70:30:0.5:0.745),体积流量1.0mL/min,检测波长345nm。结果:盐酸小檗碱在0.400~... 详细信息

目的:建立藏药小檗皮中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的含量测定方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Agilent XDBC18(4.6mm×50mm,5μm),流动相为水-乙腈-乙酸-三乙胺(70:30:0.5:0.745),体积流量1.0mL/min,检测波长345nm。结果:盐酸小檗碱在0.400~2.000μg的质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.9999),盐酸巴马汀在0.016~0.800μg的质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.9999);平均回收率分别为98.5%和97.5%。结论:所建立的HPLC法简便快捷、准确,可用于藏药小檗皮的质量控制。

关键词：小檗皮盐酸小檗碱盐酸巴马汀高效液相色谱法

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HPLC法测定不同产地藏药小檗皮中盐酸小檗碱含量比较

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四川中医 2011年第9期29卷 45-46页

作者：子巴青海大学藏医学院青海西宁810001

目的:探讨青海不同产地小檗皮药材中盐酸小檗碱的含量。方法:采用HPLC法,对小檗皮的有效成分盐酸小檗碱进行含量测定,并进行了方法学研究。结果:盐酸小檗碱在0.0138～0.1615 ***-1范围内呈良好线性关系,r=0.9995,盐酸小檗碱在供试品的... 详细信息

目的:探讨青海不同产地小檗皮药材中盐酸小檗碱的含量。方法:采用HPLC法,对小檗皮的有效成分盐酸小檗碱进行含量测定,并进行了方法学研究。结果:盐酸小檗碱在0.0138～0.1615 ***-1范围内呈良好线性关系,r=0.9995,盐酸小檗碱在供试品的平均回收率为97.67%,重复性RSD为1.48%(n=6)。结论:青海化隆高海拔地区的小檗皮中盐酸小檗碱含量略高于青海其他地区,青海不同产地小檗皮中盐酸小檗碱含量无明显差异。

关键词：小檗皮产地盐酸小檗碱 HPLC 青海

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藏药小檗皮对糖尿病模型小鼠血糖水平影响的初步研究

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现代生物医学进展 2013年第19期13卷 3619-3622,3607页

作者：张燕孟宪丽岳丽珺向丽赖先荣成都中医药大学四川成都611137

目的:观察藏药小檗皮对糖尿病小鼠模型及正常小鼠血糖的影响,并以血糖为指标确定其治疗糖尿病及其并发症的有效剂量范围。方法:以6.72 ***-1、3.36 ***-1、1.68 ***-1、0.84 ***-1、0.42 g..kg-1剂量的小檗皮浸膏灌胃四氧嘧啶糖尿病小鼠... 详细信息

目的:观察藏药小檗皮对糖尿病小鼠模型及正常小鼠血糖的影响,并以血糖为指标确定其治疗糖尿病及其并发症的有效剂量范围。方法:以6.72 ***-1、3.36 ***-1、1.68 ***-1、0.84 ***-1、0.42 g..kg-1剂量的小檗皮浸膏灌胃四氧嘧啶糖尿病小鼠10 d,GOD-CE-PAP法测定小鼠血糖水平,以确定小檗皮的有效降糖剂量范围;6.72 ***-1、1.68 ***-1、0.84 ***-1剂量的小檗皮浸膏灌胃正常小鼠7 d,GOD-CE-PAP法测定小鼠血糖水平,观察小檗皮对正常小鼠血糖的影响。结果:与模型对照组相比,盐酸二甲双胍、盐酸小檗碱、生物碱复配及6.72 ***-1、1.68 ***-1、0.84 ***-1、3.36 ***-1、0.42 ***-1的小檗皮浸膏均有较好的降糖作用,5个剂量的小檗皮浸膏降糖作用依次为:6.72 ***-1>1.68 ***-1>0.84 ***-1>3.36 ***-1>0.42 ***-1;盐酸二甲双胍、羟苯磺酸钙、盐酸小檗碱、复配生物碱及6.72 ***-1、1.68 ***-1、0.84 ***-1剂量的小檗皮浸膏对正常小鼠血糖无明显作用。结论:藏药小檗皮对四氧嘧啶所致糖尿病模型小鼠血糖有明显降糖作用,对正常小鼠血糖无明显作用。

关键词：藏药小檗皮糖尿病小鼠模型血糖

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藏药小檗皮防治糖尿病视网膜病变的研究思路探讨

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中外医疗 2014年第13期33卷 192-194页

作者：拉巴次仁叶凡范刚赖先荣西藏自治区藏药厂西藏拉萨850000 成都中医药大学四川成都611137

糖尿病视网膜病变是导致糖尿病患者失明的主要病因之一,早期防治是关键。糖尿病是藏医药的特色优势病种,藏药小檗皮是藏医治疗糖尿病及眼病的重要药物之一。该研究从藏医药对糖尿病及其视网膜病变(京尼萨库病及其眼病)的理论认识、用药... 详细信息

糖尿病视网膜病变是导致糖尿病患者失明的主要病因之一,早期防治是关键。糖尿病是藏医药的特色优势病种,藏药小檗皮是藏医治疗糖尿病及眼病的重要药物之一。该研究从藏医药对糖尿病及其视网膜病变(京尼萨库病及其眼病)的理论认识、用药经验中,发掘藏药小檗皮对糖尿病视网膜病变的用途,提出了藏药小檗皮防治糖尿病视网膜病变的研究思路。

关键词：藏药小檗皮糖尿病视网膜病变研究思路

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藏药小檗皮中小檗碱的含量测定

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中国民族医药杂志 2000年第3期6卷 41-42页

作者：张琦田淑琴郑丽琴赵蜀蓉西南民族学院四川成都610041

用高效液相色谱法建立了藏药小檗皮中小檗碱的含量测定方法。该方法简便、准确 ,色谱条件为 :shimpack CLC-ODS柱 ;乙腈 :0 .1 mol/L;乙酸铵 :磷酸 ( 35∶ 65∶ 0 .5)为流动相 ;紫外检测波长 34 6nm.

关键词：藏药小檗皮小檗碱高效液相色谱法化学成分

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藏药八味小檗皮中盐酸小檗碱含量的分析

藏药八味小檗皮中盐酸小檗碱含量的分析

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西北地区第五届色谱学术报告会暨甘肃省第十届色谱年会

作者：杨月琴胡凤祖师治贤中国科学院西北高原生物研究所

采用 HPLC 法测定八味小檗皮中的盐酸小檗碱的含量以控制产品质量.采用 Symmetry(?)C(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;以甲醇-水-三乙胺(42:58:0.2,1:1盐酸调 pH=4) 为流动相,流速为1.0 mL×min,柱温为室温,检测波长为346 nm.结果表明,盐... 详细信息

采用 HPLC 法测定八味小檗皮中的盐酸小檗碱的含量以控制产品质量.采用 Symmetry(?)C(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;以甲醇-水-三乙胺(42:58:0.2,1:1盐酸调 pH=4) 为流动相,流速为1.0 mL×min,柱温为室温,检测波长为346 nm.结果表明,盐酸小檗碱在0.001 34～0.010 72mg/mL 的浓度范围内呈线性关系.盐酸小檗碱在制剂中的平均回收率为99.90(n=5), RSD=2.00%.结论:该方法正确、重现性好、简便、易行,可用于质量控制.

关键词：八味小檗皮小檗皮盐酸小檗碱高效液相色谱法

来源： cnki会议评论

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双波长薄层扫描法测定藏药小檗皮及晶珠糖尿肾康胶囊中盐酸小檗碱的含量

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青海医药杂志 2007年第4期37卷 59-60页

作者：欧阳飙杨凤梅青海省海东地区药品检验所 810600 青海省药品检验所 810000

目的：建立藏药小檗皮及晶珠糖尿肾康胶囊的含量测定方法。方法：采用双波长薄层扫描法λs=425nm，λR=550nm，以正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）为展开剂。结果：盐酸小檗碱在（0．848～4．24）μg范围内呈良好的线性关系，胶囊的平均回... 详细信息

目的：建立藏药小檗皮及晶珠糖尿肾康胶囊的含量测定方法。方法：采用双波长薄层扫描法λs=425nm，λR=550nm，以正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）为展开剂。结果：盐酸小檗碱在（0．848～4．24）μg范围内呈良好的线性关系，胶囊的平均回收率为98．83％，RSD=1．04％。结论：方法可靠，重现性好，能有效控制该制剂的质量。

关键词：盐酸小檗碱小檗皮晶珠糖尿肾康胶囊双波长薄层扫描

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紫外分光光度法测定藏药小檗皮中总生物碱的含量

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成都中医药大学学报 2017年第4期40卷 27-29页

作者：莫家祺王茂盛李艳吕秀梅范刚成都中医药大学民族医药学院四川成都611137

目的:建立藏药小檗皮中总生物碱的含量测定方法,为其质量控制提供科学依据。方法:以盐酸小檗碱为对照品,采用紫外分光光度法测定不同来源小檗皮药材中总生物碱的含量。结果:小檗皮总生物碱在2.376~8.712μg/m L范围内线性关系良好,加样... 详细信息

目的:建立藏药小檗皮中总生物碱的含量测定方法,为其质量控制提供科学依据。方法:以盐酸小檗碱为对照品,采用紫外分光光度法测定不同来源小檗皮药材中总生物碱的含量。结果:小檗皮总生物碱在2.376~8.712μg/m L范围内线性关系良好,加样回收率为96.89%,RSD为1.08%。不同来源小檗皮药材的总生物碱含量在38.46~86.33 mg/g之间,平均含量为58.58 mg/g。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于小檗皮药材的质量控制和评价。

关键词：藏药小檗皮总生物碱紫外分光光度法质量控制

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