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压力对人眼小梁细胞自分泌TGF-β_2的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2006年第2期35卷 241-243页

作者：张虹陈莲一李贵刚单长梅华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科武汉430030

目的采用开放式压力控制培养系统研究压力对体外培养的人眼小粱细胞自分泌转化生长因子-β2（TGF-β2）的影响，探讨TGF-β2在原发开角型青光眼发病机制中的作用。方法体外培养人眼小梁细胞并传至第5代。对照组不施加压力（0mmHg，1mm... 详细信息

目的采用开放式压力控制培养系统研究压力对体外培养的人眼小粱细胞自分泌转化生长因子-β2（TGF-β2）的影响，探讨TGF-β2在原发开角型青光眼发病机制中的作用。方法体外培养人眼小梁细胞并传至第5代。对照组不施加压力（0mmHg，1mmHg=0．133kPa），实验组施加20、40、60及80mmHg压力，分别持续0、12、24、36h。采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法测定细胞上清液中TGF-β2浓度。结果小梁细胞自分泌TGF-β2随压力增高而增加，与对照组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）；在20～60mmHg范围内，加压时间越长，TGF-β2增高越明显；虽然80mmHg压力水平下TGF-β2增高幅度下降，但加压12和24h组TGF-β2水平仍明显高于对照组（P〈0．05）。结论随压力增高，小梁细胞自分泌TGF-β2增多，其水平与压力大小及作用时问相关，推测TGP-β2分泌异常可能是原发开角型青光眼病理进程中的重要机制之一。

关键词：转化生长因子-β2 青光眼小梁细胞压力

血管紧张素Ⅱ对体外培养的牛眼小梁细胞间质合成的影响

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西安医科大学学报 2002年第3期23卷 258-261页

作者：沈凤梅张林刘涛梁利梅周喜岩西安交通大学第一医院眼科西安710061

目的　观测血管紧张素Ⅱ对体外培养的牛小梁细胞间质合成的影响 ,探讨原发性开角青光眼的发病机制。方法　①体外培养牛眼小梁细胞 ,应用免疫组化方法 (NSE ,Ⅷ因子相关抗原染色 )鉴定细胞 ,光学及电子透射显微镜对细胞进行形态学及生... 详细信息

目的　观测血管紧张素Ⅱ对体外培养的牛小梁细胞间质合成的影响 ,探讨原发性开角青光眼的发病机制。方法　①体外培养牛眼小梁细胞 ,应用免疫组化方法 (NSE ,Ⅷ因子相关抗原染色 )鉴定细胞 ,光学及电子透射显微镜对细胞进行形态学及生长特性的观察 ;②AngⅡ (1×1 0 -7mol·L-1及 1× 1 0 -8mol·L-1)及其Ⅰ型受体拮抗剂孵育牛眼小梁细胞 ,免疫荧光染色测定纤维粘连蛋白 ,并用化学方法检测培养液中羟脯氨酸含量间接推导胶原含量。结果　牛眼小梁细胞培养成功 ,以上皮型为主。AngⅡ明显地增加了牛眼小梁细胞纤维粘连蛋白 ,同时培养液中的羟脯氨酸含量亦相应增高 (P 小梁细胞技术是研究小梁细胞特性的重要实验技术。AngⅡ可以促进纤维粘连蛋白、胶原合成增强 ,AT1受体拮抗剂可以部分阻断此促增殖效应。

关键词：体外培养小梁细胞血管紧张素Ⅱ 纤维粘连蛋白羟脯氨酸原发性开角青光眼发病机制

染料木素对体外培养的牛眼小梁细胞[Ca^2＋]i的影响

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国际眼科杂志 2011年第6期11卷 964-965页

作者：陆慧琴马强张德秀梁厚成中国陕西省西安市第一医院眼科 710002 西安交通大学第一医院眼科中国陕西省西安市710061

目的:在激光扫描共聚焦显微镜(laserscanning confocal microscopy,LSCM)下测定小梁细胞经染料木素(genistein,Gen)作用后钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。方法:运用组织块培养法获得三代牛眼小梁细胞,Fulo-3/AM负载后,于LSCM下动态扫描不... 详细信息

目的:在激光扫描共聚焦显微镜(laserscanning confocal microscopy,LSCM)下测定小梁细胞经染料木素(genistein,Gen)作用后钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。方法:运用组织块培养法获得三代牛眼小梁细胞,Fulo-3/AM负载后,于LSCM下动态扫描不同浓度Gen作用后胞内荧光强度变化,得出[Ca2+]i值。结果:10-6,10-5,10-4mol/LGen可使小梁细胞[Ca2+]i呈剂量依赖性降低,其中10-5mol/LGen可使小梁细胞[Ca2+]i由328.62±16.77nmol/L减少至309.69±16.57nmol/L(n=8,P小梁网而致房水流出阻力减小、眼压下降。

关键词：小梁细胞染料木素胞内钙离子浓度激光扫描共聚焦显微镜

维拉帕米对牛眼小梁细胞表达转化生长因子-β的影响

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眼科研究 2004年第2期22卷 156-160页

作者：陈飞魏厚仁曾艳彩吕源淑张樱华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科武汉430022

目的　研究维拉帕米 (Verapamil)在抑制牛眼小梁细胞 (BTMC)合成细胞外基质 (ECM )的同时 ,对BTMC表达转化生长因子 β1(TGF β1)、TGFβ2 的影响。方法　采用半定量RT PCR和免疫组化结合计算机图像分析技术分别检测等于和低于 0 0 1m... 详细信息

目的　研究维拉帕米 (Verapamil)在抑制牛眼小梁细胞 (BTMC)合成细胞外基质 (ECM )的同时 ,对BTMC表达转化生长因子 β1(TGF β1)、TGFβ2 的影响。方法　采用半定量RT PCR和免疫组化结合计算机图像分析技术分别检测等于和低于 0 0 1mg/mLVerapamil对BTMC表达TGFβ1、TGFβ2 蛋白和mRNA。结果　 0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1mg/mLVerapamil可质量浓度依赖性抑制BTMC表达TGFβ1、TGFβ2 蛋白和mRNA(P <0 0 5 ) ,且 0 0 1mg/mLVerapamil可完全抑制TGF β1的蛋白合成 ,同样质量浓度的Verapamil对TGF β1的抑制程度要大于TGF β2 (P <0 0 5 )。结论　Verapamil抑制BTMC合成ECM的机制可能为抑制TGF β表达 ,这种抑制是在转录水平上 ,且对TGF β1的抑制可能在其中起主要作用。此外 ,TGF β可通过自分泌方式作用BTMC ,促进ECM的合成 ,进一步为Verapamil在发病学环节上防治原发性开角型青光眼提供实验依据。

关键词：维拉帕米小梁细胞表达转化生长因子-β 原发性开角型青光眼

老鼠眼球切片和小梁细胞的太赫兹与红外光谱特性

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老鼠眼球切片和小梁细胞的太赫兹与红外光谱特性

作者：田甜天津大学

学位级别：硕士

太赫兹时域光谱和红外显微光谱技术在生物医学研究领域有着重要作用,探索不同生物组织或细胞的光谱特性是太赫兹技术和红外光谱技术产业化的必由之路。眼睛是人体感受外界信息的关键部位,因此本研究从眼部组织和细胞出发,利用太赫兹近... 详细信息

太赫兹时域光谱和红外显微光谱技术在生物医学研究领域有着重要作用,探索不同生物组织或细胞的光谱特性是太赫兹技术和红外光谱技术产业化的必由之路。眼睛是人体感受外界信息的关键部位,因此本研究从眼部组织和细胞出发,利用太赫兹近场成像高分辨率特性和同步辐射光源高亮度、高分辨率等特性展开眼部组织和细胞研究。对于眼底疾病的早期诊断、揭示疾病的致病机理有着重要意义。本文主要工作如下:1.对老鼠石蜡包埋和冰冻眼球进行了太赫兹近场成像和同步辐射红外显微成像的研究,获得了老鼠眼球的太赫兹和红外光谱特性。并从眼球的结构和成分出发,分析了样品的太赫兹和红外吸收光谱。2.利用同步辐射红外显微成像技术研究了老鼠冷冻干燥的视网膜,获取了老鼠视网膜的红外光谱特性以及不同化学键或官能团的振动转动模式在视网膜上的分布情况。并对视网膜红外光谱和二阶导数光谱进行了分析。讨论了太赫兹光谱和红外光谱用于眼底检查的应用前景。3.在体外用转化生长因子-β诱导小梁细胞过度增殖,模拟原发性开角型青光眼的产生。检测诱导前后细胞的太赫兹光谱和红外光谱特性,从细胞的主要物质变化方面对光谱特性进行了分析。研究结果为原发性开角型青光眼等疾病的太赫兹和红外光谱的检测提供了依据。

关键词：太赫兹近场成像同步辐射红外显微成像眼球视网膜小梁细胞转化生长因子-β

维拉帕米对牛眼小梁细胞增殖和吞噬功能的影响

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眼科研究 2003年第3期21卷 250-253页

作者：陈飞魏厚仁曾艳彩吕源淑张樱( 华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科武汉430022 广州军区武汉总医院信息科

目的　研究维拉帕米对牛眼小梁细胞 (BTMC)增殖和吞噬功能的影响。方法　采用MTT和3 H TDR实验检测 0 0 0 0 1、0 0 0 0 5、0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1、0 0 5、0 1mg/ml 7种质量浓度的维拉帕米对BTMC增殖功能的影响。以乳胶微粒... 详细信息

目的　研究维拉帕米对牛眼小梁细胞 (BTMC)增殖和吞噬功能的影响。方法　采用MTT和3 H TDR实验检测 0 0 0 0 1、0 0 0 0 5、0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1、0 0 5、0 1mg/ml 7种质量浓度的维拉帕米对BTMC增殖功能的影响。以乳胶微粒为标记 ,定量检测等于和低于 0 0 1mg/ml维拉帕米对BTMC吞噬功能的影响。结果　低于 0 0 1mg/ml维拉帕米对BTMC增殖功能无抑制作用 (P >0 0 5 ) ,等于或高于 0 0 1mg/ml的维拉帕米可浓度依赖性地抑制BTMC增殖功能 (P 小梁细胞的吞噬功能 ,减少房水外流阻力。

关键词：原发性开角型青光眼维拉帕米小梁细胞增殖吞噬作用

莱菔硫烷对体外培养牛眼小梁细胞氧还蛋白表达的影响及其机制研究

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莱菔硫烷对体外培养牛眼小梁细胞氧还蛋白表达的影响及其机制研究

作者：苏静滨州医学院

学位级别：硕士

目的应用莱菔硫烷(sulforaphane, SFN)研究PI3K/Akt与MAPK/ERK1/2通路对体外培养的牛眼小梁细胞内硫氧还蛋白(thioredoxin, Trx)表达的影响及其机制。方法体外培养牛眼小梁细胞并进行细胞形态学观察,取培养状态良好的第三代牛眼小梁细胞... 详细信息

目的应用莱菔硫烷(sulforaphane, SFN)研究PI3K/Akt与MAPK/ERK1/2通路对体外培养的牛眼小梁细胞内硫氧还蛋白(thioredoxin, Trx)表达的影响及其机制。方法体外培养牛眼小梁细胞并进行细胞形态学观察,取培养状态良好的第三代牛眼小梁细胞,并将其随机分为4组,分别以0 μmoL-1,10μmol·L-1,20μmol·L-1和30 μml·L-1浓度的SFN干预细胞30分钟,分组提取经过SFN干预后的体外培养的牛眼小梁细胞内的RNA,并应用Real-timePCR技术检测小梁细胞内抗氧化蛋白Trx的Trx-mRNA的表达,并通过结果得出SFN刺激Trx蛋白表达的最适浓度。而后,再将体外培养的牛眼小梁细胞细胞随机分为6组,为了完成完整的对照试验所以本次实验的分组分别命名为,空白对照组,LY294002组,U0126组,SFN组,LY294002+SFN组与U0126+SFN组。其中,LY294002可以特异性的抑制一条和氧化还原密切相关的通路即PI3K/Akt通路,U0126可以特异性的抑制另一条和氧化还原反应密切相关的通路即MAPK/ERK1/2通路。本次实验研究其在SFN的诱导下应用两条通路的分别的特异性的通路抑制剂可否通过抑制Nrf2的表达特异性而达到抑制PI3K/Akt通路与MAPK/ERK1/2通路进而影响抗氧化蛋白即硫氧还蛋白(Trx)蛋白的表达量。体外培养的牛眼小梁细胞分组并标记后,分别经通路抑制剂处理1小时,再加入最适浓度的SFN继续在细胞培养箱内培养6小时进行药物干预,药物干预完成后,按照分组,分别提取牛眼小梁细胞内的核蛋白与浆蛋白,并采用Westernblot技术,比较各组间Nrf2及Trx蛋白的表达量,用以探究P13K/Aκt通路与MAPK/ERK1/2通路及通路内转录因子Nrf2对体外培养的牛眼小梁细胞内Trx抗氧化蛋白表达量的影响。结果体外培养的牛眼小梁细胞可正常表达Trx,在应用了额定浓度的SFN后,应用Real-time PCR技术检测小梁细胞内抗氧化蛋白Trx的Trx-mRNA的表达,可观察到,牛眼小梁细胞内Trx-mRNA表达量均有不同程度的增高。应用Western blot技术分别检测核蛋白及浆蛋白内的Nrf2蛋白及Trx蛋白,经灰度值的测定与比较,运用统计学技术及SPSS软件计算可得,SFN组内细胞所表达的Nrf2蛋白与Trx蛋白的量较空白对照组Nrf2蛋白与Trx蛋白的量均可见有明显的增强,其中,又有LY294002+SFN组与U0126+SFN组细胞内Nrf2蛋白与Trx蛋白的表达量较SFN组明显降低,但较空白对照组依旧是有明显的增高。应用了LY294002或U0126的实验组相比较可发现无差异。结论PI3K/Akt通路与MAPK/ERK1/2通路均可通过活化细胞内的Nrf2通路蛋白,来促体外培养的牛眼小梁细胞内的Trx-mRNA表达以及抗氧化蛋白Trx的合成,进而起到保护细胞抵抗氧化应激损伤的作用。

关键词：莱菔硫烷硫氧还蛋白 PI3K MAPK Nrf2 小梁细胞

维拉帕米对牛眼小梁细胞合成细胞外基质的影响

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眼科研究 2003年第4期21卷 392-395页

作者：陈飞魏厚仁曾艳彩吕源淑张樱华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科武汉430022 广州军区武汉总医院信息科

目的探讨维拉帕米(Verapamil)对牛眼小梁细胞(BTMC)合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。方法采用免疫组化结合计算机图像分析和放免技术检测等于和低于0.01 mg/ml维拉帕米对BTMC合成胶原、纤维连接蛋白、透明质酸... 详细信息

目的探讨维拉帕米(Verapamil)对牛眼小梁细胞(BTMC)合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。方法采用免疫组化结合计算机图像分析和放免技术检测等于和低于0.01 mg/ml维拉帕米对BTMC合成胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。结果 0.001、0.005、0.01mg/ml维拉帕米可质量浓度依赖性抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白的合成(P0.05)。结论维拉帕米可通过抑制细胞外基质在小梁网异常沉积,减少房水外流阻力,有望在发病学环节上治疗原发性开角型青光眼。

关键词：维拉帕米牛眼小梁细胞合成细胞外基质免疫组织化学原发性开角型青光眼

维生素E对体外培养的人眼小梁细胞糖胺多糖代谢的影响

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眼科研究 1998年第1期16卷 26-28页

作者：袁莉娅魏厚仁吕源淑同济医科大学附属协和医院眼科

目的探讨维生素Ｅ对体外培养的人眼小梁细胞糖胺多糖（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ，ＧＡＧ）代谢的影响。方法第３～５代人眼小梁中加入１００、２００、４００、８００μｇ／ｍｌ的ＶｉｔＥ，分离提纯后ＧＡＧ经腊酸纤维薄膜... 详细信息

目的探讨维生素Ｅ对体外培养的人眼小梁细胞糖胺多糖（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ，ＧＡＧ）代谢的影响。方法第３～５代人眼小梁中加入１００、２００、４００、８００μｇ／ｍｌ的ＶｉｔＥ，分离提纯后ＧＡＧ经腊酸纤维薄膜电泳、闪烁测量测得人眼小梁细胞ＧＡＧ的总量和各组份构成比。结果１００、２００、４００μｇ／ｍｌＶｉｔＥ能增加ＧＡＧ的总量，同时增加透明质酸的构成比，降低含硫ＧＡＧ的构成比。８００μｇ／ｍｌＶｉｔＥ降低ＧＡＧ总量而不改变其构成比。结论ＶｉｔＥ似有在发病学上防治ＰＯＡＧ的可能性。

关键词：人眼小梁细胞维生素E 糖胺多糖体外培养青光眼 GAG