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小体鲟HSP70基因全长cDNA序列的分离及表达分析

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中国海洋大学学报（自然科学版） 2012年第12期42卷 21-28页

作者：倪蒙温海深步艳迟美丽钱焜尹相菡张冬茜丁玉霞中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室山东青岛266003

采用RT-PCR法首次从小体鲟(Acipenser ruthenus)肝脏RNA分离获得HSP70基因全长cDNA序列(HSP70cDNA)。生物信息学分析显示,小体鲟HSP70基因含有众多的蛋白激酶C磷酸化位点,Ser、Thr、Thy磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号... 详细信息

采用RT-PCR法首次从小体鲟(Acipenser ruthenus)肝脏RNA分离获得HSP70基因全长cDNA序列(HSP70cDNA)。生物信息学分析显示,小体鲟HSP70基因含有众多的蛋白激酶C磷酸化位点,Ser、Thr、Thy磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号转导与调控中发挥作用。经过BLAST比对,认为该序列与西伯利亚鲟(Acipenserbaerii)、斑点叉尾鮰(Ietalurus punetaus)、斑马鱼(Danio rerio)、罗非鱼(Oreochromis niloticus)、非洲爪蟾(Xenopus lae-vis)、中华鳖(Pelodiscus sinensis)、原鸡(Gallus gallus)、家鼠(Mus musculus)和人(Homo sapiens)的同源性均在80%以上,表明HSP70具有高度的保守性。组织表达分析表明,HSP70mRNA在小体鲟肝脏、心、脾、脑、肾、肌肉、胃、肠、垂体、精巢和卵巢组织中均有表达,但表达量不同,心脏、脾和肝脏中表达量高,脑、垂体和性腺中表达较少,鳃中没有表达。小体鲟HSP70基因的表达分析为研究应激条件下鲟科HSP70基因的差异表达和抗逆机理提供了基础。

关键词：小体鲟 HSP70基因 cDNA 基因分离序列分析表达分析

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小体鲟卵黄雌性蛋白分离纯化及抗血清的研制

中国水产科学 2007年第4期14卷 532-539页

作者：霍堂斌张颖孙大江曲秋芝中国水产科学院黑龙江水产研究所中国水产科学院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070 大连水产学院生命科学与技术学院辽宁大连116023

采用凝胶柱层析法,对小体鲟(Acipenser ruthenusLinnaeus)卵黄蛋白粗提液进行分离纯化。小体鲟卵黄蛋白粗提液的质量浓度为25.04 mg/mL,经Sephadex G-200层析后出现3个蛋白峰。用聚丙烯凝胶电泳、免疫印迹(Western-blotting)和免疫扩散... 详细信息

采用凝胶柱层析法,对小体鲟(Acipenser ruthenusLinnaeus)卵黄蛋白粗提液进行分离纯化。小体鲟卵黄蛋白粗提液的质量浓度为25.04 mg/mL,经Sephadex G-200层析后出现3个蛋白峰。用聚丙烯凝胶电泳、免疫印迹(Western-blotting)和免疫扩散等方法研究表明,小体鲟卵黄蛋白由分子量分别为132.1 kD、97.4 kD、85.9 kD、67.0 kD、59.2 kD、47.6 kD、30 kD、14.3 kD和12.8 kD的9个亚基组成;层析后峰B蛋白为卵黄雌性特异蛋白(yolk female specific protein,YFSP),是一种糖脂磷蛋白,具有雌性特异性和组织特异性,抗体具有种属特异性。Western-blotting结果表明,卵黄雌性特异蛋白(YFSP)与血清雌性蛋白(FSSP)免疫印迹图谱上都显示分子量为97.4 kD和30 kD的2条杂交带,可见两种蛋白在免疫原性上具有相似性,可以用卵黄雌性蛋白抗血清代替卵黄蛋白原抗血清对卵黄蛋白原进行检测

关键词：小体鲟卵卵黄蛋白卵黄雌性特异蛋白

小体鲟AR基因克隆、序列分析及其组织mRNA表达

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中国水产科学 2014年第6期21卷 1146-1153页

作者：余晶董晓丽张颖刘晓勇潘鹏买丽坎孙大江中国水产科学研究院黑龙江水产研究所上海海洋大学水产与生命学院中国水产研究院鲟鱼繁育工程中心

采用RT-PCR和RACE技术,克隆了小体鲟(Acipenser ruthenus)雄激素受体(AR)基因c DNA全长序列,应用real-time q PCR法对雌、雄个体不同组织中AR m RNA的表达进行检测。序列分析表明,AR基因c DNA全长为2 953 bp,包括5′端68 bp的非编码区(u... 详细信息

采用RT-PCR和RACE技术,克隆了小体鲟(Acipenser ruthenus)雄激素受体(AR)基因c DNA全长序列,应用real-time q PCR法对雌、雄个体不同组织中AR m RNA的表达进行检测。序列分析表明,AR基因c DNA全长为2 953 bp,包括5′端68 bp的非编码区(untranslation region,UTR),2 528 bp的开放阅读框ORF(open reading frame)和3′端327 bp的非编码区(不包括ploy A的尾巴)。AR前体蛋白由843个氨基酸组成,理论分子质量为94.24 k D。同源比较结果表明,小体鲟AR氨基酸序列与其他鱼类的AR氨基酸序列同源性较高,与杂交鲟(***×Huso huso)、西伯利亚鲟(***)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)和日本鳗鲡(Anguilla japonica)的雄激素受体同源性分别为99%、98%、83%和83%。real-time q PCR分析小体鲟雌雄个体不同组织中的表达结果显示,AR基因在雌雄个体中相对表达基本相同,都是在性腺、肌肉和肾中高量表达,而在其他组织中少量表达。AR基因在小体鲟体内广泛表达,表明该基因可能对其生长和繁殖有重要作用。

关键词：小体鲟雄激素受体基因克隆序列分析组织表达

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小体鲟卵黄蛋白生化特性及合成途径的研究

水生生物学报 2009年第1期33卷 67-75页

作者：霍堂斌张颖孙大江曲秋芝中国水产科学院黑龙江水产研究所哈尔滨150070

使用葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)从小体鲟鱼卵粗提液中,提纯卵黄脂磷蛋白(Lipovitellin,Lv)和卵黄高磷蛋白(Phosvitin,Pv)。卵黄脂磷蛋白(含糖、磷和脂,等电点7.50)具有雌性特异性,分子量为144kD,由97.4kD和30kD的大小2个亚基组成。卵... 详细信息

使用葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)从小体鲟鱼卵粗提液中,提纯卵黄脂磷蛋白(Lipovitellin,Lv)和卵黄高磷蛋白(Phosvitin,Pv)。卵黄脂磷蛋白(含糖、磷和脂,等电点7.50)具有雌性特异性,分子量为144kD,由97.4kD和30kD的大小2个亚基组成。卵黄高磷蛋白(含糖、磷,等电点8.30)其分子量为66kD,其具有两个亚基,分子量分别为47.6kD、16.8kD。制备卵黄脂磷蛋白兔抗血清,采用免疫组化方法对不同年龄小体鲟的肝脏、肠、卵(Ⅱ—Ⅴ期卵巢)及血涂片,进行免疫组织化学定位研究。小体鲟卵巢发育到Ⅳ期前,卵黄蛋白主要靠卵母细胞自身合成,这个时期内源性合成卵黄蛋白;当卵巢发育到Ⅳ期,卵母细胞自身不合成卵黄蛋白,主要是通过肝脏合成卵黄蛋白原,通过血液循环运送到卵巢,被卵母细胞吸收后,裂解为卵黄蛋白,这个时期外源性合成卵黄蛋白。

关键词：小体鲟卵黄蛋白生化特性免疫组织化学合成途径

小体鲟血清卵黄蛋白原和Ca2+浓度与卵巢发育的关系

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中国水产科学 2009年第6期16卷 967-974页

作者：齐茜曲秋芝张颖索力孙大江中国水产科学研究院黑龙江水产研究所上海海洋大学大连水产学院

采用ELISA方法、分光光度计法和组织学方法,系统研究了不同年龄小体鲟(Acipenser ruthenus)血清卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)、血清钙离子(Calcium,Ca2+)含量与卵巢发育变化的关系。结果表明:血清Vg浓度、Ca2+浓度与卵巢的发育时期相关... 详细信息

采用ELISA方法、分光光度计法和组织学方法,系统研究了不同年龄小体鲟(Acipenser ruthenus)血清卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)、血清钙离子(Calcium,Ca2+)含量与卵巢发育变化的关系。结果表明:血清Vg浓度、Ca2+浓度与卵巢的发育时期相关;在卵黄沉积期内,血清中Vg浓度与Ca2+浓度呈线性正相关(R2=0.9264);卵黄生成前期和沉积初期,血清中Vg浓度和Ca2+含量较低;卵黄沉积期内,卵母细胞由沉积初期的0.56mm增大到卵黄沉积末期的2.01mm,血清Vg质量浓度由110.65μg/mL上升到242.22μg/mL,血清Ca2+浓度由2.34mol/L增大到2.72mol/L。对同年龄的雌、雄小体鲟血清Vg浓度和Ca2+浓度测定表明,根据血清中Vg和Ca2+含量差别,可以区分出沉积期小体鲟的性别。

关键词：小体鲟 ELISA 血清卵黄蛋白原血清钙离子卵巢发育

小体鲟仔、稚、幼鱼生物学及苗种培育技术初步研究

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河海大学学报（自然科学版） 2002年第Z1期30卷 114-117页

作者：张彤晴葛家春盛建明周刚江苏省淡水水产研究所江苏南京210017 江苏省淡水水产研究所江苏南京210017 江苏省水产技术推广站江苏南京210036 江苏省淡水水产研究所江苏南京210017

对小体鲟苗种生物学及培育进行了初步研究,摸索了此阶段适宜养殖的环境因子,并对其生长情况进行了测定,探讨了提高苗种培育关键时期(敏感期、转食期)成活率的技术可能性.本试验苗种成活率为56%.

关键词：小体鲟仔鱼稚鱼幼鱼生物学苗种培育

小体鲟卵透明带家族ZP3亚型和ZPAX基因cDNAs克隆及其组织表达分析

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大连海洋大学学报 2018年第4期33卷 444-454页

作者：东天朱华王巍董颖田照辉胡红霞北京市水产科学研究所渔业生物技术北京市重点实验室北京100068

为研究透明带ZP家族在小体鲟Acipenser ruthenus性腺发育、卵子发生等过程中所发挥的作用,采用PCR技术克隆获得小体鲟卵透明带家族ZP3 3种亚型(ArZP3-1、ArZP3-4、ArZP3-5)及ZPAX基因(ArZPAX)cDNA部分序列。结果表明:ArZP3-1部分cDNA序... 详细信息

为研究透明带ZP家族在小体鲟Acipenser ruthenus性腺发育、卵子发生等过程中所发挥的作用,采用PCR技术克隆获得小体鲟卵透明带家族ZP3 3种亚型(ArZP3-1、ArZP3-4、ArZP3-5)及ZPAX基因(ArZPAX)cDNA部分序列。结果表明:ArZP3-1部分cDNA序列长度为1029 bp,对应编码342个氨基酸;ArZP3-4部分cDNA序列长度为1191 bp,对应编码397个氨基酸;ArZP3-5部分cDNA序列长度为717 bp,对应编码238个氨基酸;ArZPAX部分cDNA序列长度为733 bp,对应编码243个氨基酸;ArZP3蛋白3种亚型及ArZPAX蛋白氨基酸序列中均含有一个保守的ZP结构域;基于ZP氨基酸序列的系统发育树显示,小体鲟ArZP3蛋白3种亚型与高等鱼类ZP3亲缘关系较近,而ArZPAX蛋白则与哺乳类、鸟类、高等鱼类和爬行类ZPAX亲缘关系均较远;通过半定量RT-PCR进行组织表达特异性分析表明,ArZP3-1基因在小体鲟卵巢、精巢、肝、脑、肾、心、肌肉、鳃中表达,ArZP3-4基因仅在小体鲟卵巢和精巢中表达,而ArZPAX基因在小体鲟卵巢、精巢、肝、肠、肾、脾、心、鳃、脑中均有表达,3个基因在性腺中的表达量均最高,且均具有雌、雄差异性表达特点。

关键词：小体鲟透明带蛋白 ZPAX 基因克隆组织表达

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小体鲟幼鱼水库坝下流水池塘驯养技术

江苏农业科学 2002年第5期30卷 59-61页

作者：张彤晴葛家春江苏省淡水水产研究所江苏南京210017

体鲟(Acipenser ruthenus L.)是世界上三种淡水定居型鲟科鱼之一,其个体较小,属硬骨鱼纲鲟形目鲟科鲟属,主要分布在苏联伏尔加河、额毕河、叶尼塞河流域,我国新疆地区额而刘斯河、布伦托河也有分布,近年来在我国已罕见.

关键词：小体鲟幼鱼水库坝下流水池塘驯养技术

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人工养殖施氏鲟和小体鲟精浆微量元素分析

中国水产科学 2003年第4期10卷 350-352页

作者：张涛庄平章龙珍张征周运涛蓝泽桥王正凯上海200090 中国水产科学研究院东海水产研究所中国水产科学研究院长江水产研究所宜昌市天峡特种渔业有限责任公司宜昌市天峡特种渔业有限责任公司湖北荆州434000 湖北宜昌444124

采用原子吸收分光光度法测定了施氏鲟(Acipenserschrenckii)和小体鲟(Acipenserruthenus)的精浆中7种微量元素(K、Na、Mg、Zn、Cu、Fe、Mn)的含量。施氏鲟分别取自宜昌和荆州,小体鲟取自宜昌。分析结果显示,不同种类和产地的鲟精浆中微... 详细信息

采用原子吸收分光光度法测定了施氏鲟(Acipenserschrenckii)和小体鲟(Acipenserruthenus)的精浆中7种微量元素(K、Na、Mg、Zn、Cu、Fe、Mn)的含量。施氏鲟分别取自宜昌和荆州,小体鲟取自宜昌。分析结果显示,不同种类和产地的鲟精浆中微量元素含量有差异,其中2条不同产地施氏鲟精浆Zn含量有显著性差异(P鲟和小体鲟精浆Na、K含量与我国主要淡水养殖鱼类有很大差异,在2种鲟精浆中Na与K浓度之比为10～14。

关键词：施氏鲟小体鲟精浆微量元素