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在双链DNA上直接进行的多点突变

科学通报 1990年第6期35卷 454-456页

作者：朱榴琴申同健中国科学院生物物理研究所北京100080

基因的定点突变已经成为基因修饰及蛋白质工程等研究中的重要技术。在现今的定点突变方法中,以利用M13等单链DNA作模板的引物延伸法及缺口双链法最为常用。但有些基因,特别是某些较大的真核基因,在M13中常不够稳定。因此,除了改进载体... 详细信息

基因的定点突变已经成为基因修饰及蛋白质工程等研究中的重要技术。在现今的定点突变方法中,以利用M13等单链DNA作模板的引物延伸法及缺口双链法最为常用。但有些基因,特别是某些较大的真核基因,在M13中常不够稳定。因此,除了改进载体性能以外,

关键词：双链DNA 多点突变寡核苷酸引物

用PCR插入突变法扩增和克隆HIV-env282肽基因

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中华微生物学和免疫学杂志 1995年第4期15卷 251-253页

作者：项秉懿李飚王俊楼高辉苏成芝第四军医大学分子生物学研究所西安710033

本文报道借助于微机分析设计并合成了2个引物,通过聚合酶链反应插入突变法扩增出含有4个功能区(T肽区,与NLK部分同源区,显性中和位点及与CD4结合区)的HIV-env282肽基因,其5′端连有EcoR Ⅰ酶切位点和翻译起始码,3′端与终止码和BamH Ⅰ... 详细信息

本文报道借助于微机分析设计并合成了2个引物,通过聚合酶链反应插入突变法扩增出含有4个功能区(T肽区,与NLK部分同源区,显性中和位点及与CD4结合区)的HIV-env282肽基因,其5′端连有EcoR Ⅰ酶切位点和翻译起始码,3′端与终止码和BamH Ⅰ酶切位点相连。通过基因重组将其插入到大肠杆菌表达载体pBV220内并转化至宿主菌DH5α中,经电泳初筛、酶切分析和PCR鉴定,确定了一株含目的基因的重组菌,称之为pXW1。

关键词：人免疫缺陷病毒寡核苷酸引物聚合酶链反应克隆

花生矮化病毒和番茄环斑病毒的双重DPO-RT-PCR检测

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植物保护学报 2021年第4期48卷 931-932页

作者：袁俊杰袁淑珍卢乃会马新华杨卓瑜龙阳湛江海关广东湛江524000 二连浩特海关内蒙古二连浩特011100

花生矮化病毒(peanut stunt virus,PSV)和番茄环斑病毒(tomato ringspot virus,To RSV)是我国进境植物检疫性有害生物,存在通过染病大豆传入我国的风险。双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)是一种新型PCR引物,具有... 详细信息

花生矮化病毒(peanut stunt virus,PSV)和番茄环斑病毒(tomato ringspot virus,To RSV)是我国进境植物检疫性有害生物,存在通过染病大豆传入我国的风险。双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)是一种新型PCR引物,具有特异性高、引物自身及引物间难形成二级结构和对退火温度不敏感等优点(Chun et al.,2007),在多重PCR中引入DPO引物可以有效降低多重PCR体系构建难度,提高多重PCR的特异性。

关键词：花生矮化病毒番茄环斑病毒多重PCR 寡核苷酸引物 DPO 植物检疫性有害生物二级结构

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DNA分析与扩增

生物技术通报 1992年第7期8卷 24-30页

922381 温度和寡核苷酸引物长度对聚台酶链反应扩增专一性和有效性的影响[英]/Wu,D.Y.…∥DNACell Biol.-1991,10(3).-233～238[译自DBA, 1991,10(25),91-14514] 由于温度和寡核苷酸控制寡核苷酸杂交的专一性,因此研究了寡核苷酸长度(14... 详细信息

922381 温度和寡核苷酸引物长度对聚台酶链反应扩增专一性和有效性的影响[英]/Wu,D.Y.…∥DNACell Biol.-1991,10(3).-233～238[译自DBA, 1991,10(25),91-14514] 由于温度和寡核苷酸控制寡核苷酸杂交的专一性,因此研究了寡核苷酸长度(14～20个核苷酸)、碱基组成及退火温度对PCR扩增专一性和有效性的影响。一般情况下,PCR专一性受寡核苷酸长度或引物与模板的退火温度控制。

关键词： DNA 寡核苷酸引物聚合酶链反应退火温度碱基组成测序法序列特异性核昔酸电泳测序抗原基因

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文摘

国际遗传学杂志 1995年第5期18卷 275-286页

文摘０６５用原位标记寡核苷酸引物技术检测人１３号染色体特异性多态ａ卫星序列［英］／ＰｅｌｌｅｓｔｏｒＦ…ＨｕｍＧｅｎｅｔ．－１９９４，９４．－３４６～３４８ａ卫星ＤＮＡ是位于所有人类染色体着丝粒部位的一个家族性串联重... 详细信息

文摘０６５用原位标记寡核苷酸引物技术检测人１３号染色体特异性多态ａ卫星序列［英］／ＰｅｌｌｅｓｔｏｒＦ…ＨｕｍＧｅｎｅｔ．－１９９４，９４．－３４６～３４８ａ卫星ＤＮＡ是位于所有人类染色体着丝粒部位的一个家族性串联重复ＤＮＡ序列．其某些亚族有特殊性。...

关键词：染色体倒位性反转病人寡核苷酸引物原位标记泪腺肿瘤细胞遗传学性转变常染色体基因基因频率等位基因频率断裂点检索工具文摘

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聚合酶链反应检测弓形虫核酸的研究

西安医科大学学报 1996年第3期17卷 296-299页

作者：程彦斌张永浩李哲余新炳张敏如西安寄生虫学教研室中山医科大学寄生虫学教研室

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，设计了一对寡核苷酸引物，对弓形虫Ｂ１基因的保守序列进行体外扩增，显示该引物只对弓形虫核酸扩增，可对４个或４个以上弓形虫扩增出明显条带，检测弓形虫核酸的最低量为２．５ｐｇ。该ＰＣＲ对急性... 详细信息

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，设计了一对寡核苷酸引物，对弓形虫Ｂ１基因的保守序列进行体外扩增，显示该引物只对弓形虫核酸扩增，可对４个或４个以上弓形虫扩增出明显条带，检测弓形虫核酸的最低量为２．５ｐｇ。该ＰＣＲ对急性感染弓形虫的小鼠，于４８ｈ后就可从部分小鼠（２／５）的外周血中检测到弓形虫核酸，９６ｈ后全部小鼠（５／５）外周血中均检测到弓形虫核酸，而感染２４ｈ后可从其肝、脾、肾等组织中扩增到弓形虫核酸。对３４例孕妇外周血分别用ＥＬＩＳＡ及ＰＣＲ平行检测，ＥＬＩＳＡ测ＩｇＭ阳性者３例，ＰＣＲ扩增阳性者６例（其中３例ＩｇＭ亦阳性），表明ＰＣＲ具有较高的敏感性和特异性。

关键词：弓形虫寡核苷酸引物聚合酶链反应 ELISA

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生物固氮

生物技术通报 1990年第7期6卷 78-79页

901888 退化寡核苷酸在一种束毛藻 nifH基因扩增中的利用[英]/Zchr,J.P.…//***.-1989,55(10).-2522～2526[译自 DBA,1989,8(24)89-14376]束毛藻(Trichodesmium pp.)的各个种是海洋生的,丝状的、非异形胞固氮蓝藻,是海洋生态体系的重要... 详细信息

关键词：寡核苷酸引物异形胞束毛藻固氮蓝藻海洋生态引物序列定序节杆菌螺菌基因扩增

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基因芯片的PCR引物设计

化工时刊 2002年第7期16卷 19-22页

作者：张元颖何农跃陆祖宏东南大学教育部分子与生物分子电子学重点实验室南京210096

基因芯片(Gene chip),将大量特定的核苷酸探针有序地固定在玻璃或硅等基底上,通过检测探针与荧光标记的核酸靶序列发生杂交显示的信号,获得生命信息。PCR技术可扩增核酸靶序列,极大提高了检测灵敏度。进行PCR扩增的首要条件是设计人工... 详细信息

基因芯片(Gene chip),将大量特定的核苷酸探针有序地固定在玻璃或硅等基底上,通过检测探针与荧光标记的核酸靶序列发生杂交显示的信号,获得生命信息。PCR技术可扩增核酸靶序列,极大提高了检测灵敏度。进行PCR扩增的首要条件是设计人工合成的寡核苷酸引物。本文介绍了PCR引物设计软件的一般设计原理并设计了相关软件。

关键词：基因芯片 PCR技术核酸靶序列寡核苷酸引物扩增

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核酸及蛋白质合成、提取、纯化

生物技术通报 1993年第3期9卷 20-21页

933585利用亲和层析制备λ噬菌体 DNA[英]/Coto,E.…//***.-1993,209(1).-199～201[译自 DBA,1993,12(11),93-06091]用大肠杆菌 SURE 培养噬菌体,再用10%的PEG8000从细胞裂解物中沉淀之。

关键词：蛋白质合成定序 DNA 核苷酸序列寡核苷酸引物结果重复性酿酒酵母限制性酶切放射性标记纯化过程