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药学学报 2011年第3期46卷 285-292页

作者：张宝袁迟深孙云扬州大学医学院药理学教研室江苏扬州225001

从百日咳杆菌中分离出非甲基化寡核苷酸单链(CpG-ODNs),建立卵白蛋白(OVA)致敏的小鼠急性哮喘与慢性哮喘模型,经急性哮喘模型从百日咳杆菌CpG-ODNs与9条相似度高且含有CG片段的seq A～seq I序列中筛选出有效序列(seq A),以seq A腹腔注射... 详细信息

从百日咳杆菌中分离出非甲基化寡核苷酸单链(CpG-ODNs),建立卵白蛋白(OVA)致敏的小鼠急性哮喘与慢性哮喘模型,经急性哮喘模型从百日咳杆菌CpG-ODNs与9条相似度高且含有CG片段的seq A～seq I序列中筛选出有效序列(seq A),以seq A腹腔注射(ip)及灌胃(ig)对急、慢性哮喘小鼠分别进行干预。检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞(WBC)总数和嗜酸性粒细胞(EOS)数,酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中细胞因子及血管内皮生长因子(VEGF)水平。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测小鼠脾细胞TLR-9 mRNA表达量;蛋白印迹(Western blotting)法检测小鼠肺组织TLR-9蛋白表达。结果表明,小鼠急性哮喘模型经腹腔注射及灌胃seq A预处理,可明显抑制BALF中WBC总数增加,显著抑制EOS增加;百日咳杆菌、CpG+及seq A～seq D灌胃组亦显著抑制EOS增加,而seq E～seq I作用不明显;上述各序列干预组以腹腔注射途径抑制EOS作用较为显著。对小鼠慢性哮喘模型,CpG+和seq A腹腔注射预处理均能明显上调BALF中γ干扰素(IFN-γ)①空白对照组:(176.45±23.46)***-1;②模型组:(174.11±22.71)***-1;③CpG+(ip):(220.56±15.42)***-1;④seq A(ip):(225.23±21.60)***-1;并下调白介素-4(IL-4)①空白对照组:(66.91±5.81)***-1;②模型组:(81.02±11.24)***-1;③CpG+(ip):(63.99±6.09)***-1;④seq A(ip):(62.75±10.03)***-1;各序列组对VEGF无显著影响(P>0.05);seq A腹腔注射亦能上调小鼠脾细胞TLR-9 mRNA(TLR-9/GAPDH)①空白对照组:0.62±0.13;②模型组:0.66±0.17;③CpG+(ip):1.46±0.26;④seq A(ip):1.42±0.34及肺组织TLR-9蛋白表达(TLR-9/β-actin)①空白对照组:0.63±0.16;②模型组:0.61±0.07;③CpG+(ip):1.15±0.25;④seq A(ip):1.03±0.29;但经灌胃途径无明显影响。结果显示,CpG-ODNs和获得的CpG序列seq A可显著抑制哮喘模型的气道炎症反应以及相应炎症细胞因子水平的改变,其作用机制可能与调节Th1/Th2平衡、调控Toll样受体9(TLR-9)表达有关。

关键词：哮喘百日咳杆菌寡核苷酸单链 Th1/Th2 TLR-9

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百日咳杆菌CpG-ODNs对大鼠变应性哮喘IgE生成的影响

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2011年第1期32卷 59-62页

作者：胡婷王凤霞王骏孙云扬州大学医学院江苏扬州225001

以百日咳杆菌CpG-ODNs有效序列seqA采用腹腔注射(ip组)和灌胃(ig组)2种途径干预变应性哮喘大鼠模型,ELISA法检测模型大鼠血清中IgE含量;使用seqA干预后,以分光光度法检测大鼠背部皮肤致敏部位伊文思蓝渗出程度。结果表明:seqA ip组能下... 详细信息

以百日咳杆菌CpG-ODNs有效序列seqA采用腹腔注射(ip组)和灌胃(ig组)2种途径干预变应性哮喘大鼠模型,ELISA法检测模型大鼠血清中IgE含量;使用seqA干预后,以分光光度法检测大鼠背部皮肤致敏部位伊文思蓝渗出程度。结果表明:seqA ip组能下调大鼠血清IgE,与模型组比较差异极显著(P<0.001);seqA ip组下调血清IgE的作用强于ig组;被动皮肤过敏反应试验中seqA ip干预组能有效下调致敏大鼠皮肤蓝斑吸光度,与模型组比较差异极显著(P<0.001),且seqA ip组的抑制作用强于ig组;说明效应序列seqA能有效下调IgE、抑制PCA,从而防治变应性哮喘。

关键词：哮喘百日咳杆菌寡核苷酸单链免疫球蛋白E 被动皮肤致敏反应

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百日咳杆菌效应CpG-ODNs防治变应性哮喘的实验研究

百日咳杆菌效应CpG-ODNs防治变应性哮喘的实验研究

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第十届全国抗炎免疫药理学学术会议

作者：张宝袁孙云扬州大学医学院药理教研室

目的:百日咳杆菌(Bordetella pertussis)是一种致病微生物,感染后可导致百日咳病的发生。灭活后的百日咳疫苗可预防该病。近期研究发现,变应性哮喘伴随Th1/Th2失衡现象,越来越多的研究证据表明全细胞百日咳疫苗可选择性增强人和动物的Th... 详细信息

目的:百日咳杆菌(Bordetella pertussis)是一种致病微生物,感染后可导致百日咳病的发生。灭活后的百日咳疫苗可预防该病。近期研究发现,变应性哮喘伴随Th1/Th2失衡现象,越来越多的研究证据表明全细胞百日咳疫苗可选择性增强人和动物的Th1型反应,对Th1/Th2平衡的调节功能已被应用于变应性疾病的研究中。本课题旨在探讨百日咳杆菌中特殊的非甲基化DNA结构CpG-ODNs与免疫细胞(如巨噬细胞、树突状细胞等)内体TOLL样受体(TLR)9结合形成二聚体,调节Th1/Th2平衡,产生防治变应性哮喘作用。方法:本课题组应用Vector NTIAdvance 11软件自百日咳杆菌基因组提取出9条效应CpG-ODNs,与全细胞百日咳杆菌抗炎作用进行对比,筛选得到抗炎作用最强的CpG序列,命名为seqA进行后续研究。制备ICR小鼠慢性哮喘模型,分别采用腹腔注射(i.p.)及灌胃(p.o.)给予seq A、ODN-1018及cont ODN-1018,于实验第60天颈椎脱臼处死小鼠,制备小鼠肺泡灌洗液(BALF)、分离脾脏。酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中IL-4、IFN-γ及VEGF浓度变化;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测小鼠脾脏组织TLR-9表达。结果:(1)seqA(i.p.)组和ODN-1018(i.p.)组IL-4低于模型组,IFN-γ高于模型组(P0.05);(2)seq A(i.p.)组和ODN-1018(i.p.)组脾组织TLR-9表达强于模型组(P组与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:百日咳杆菌基因组CpG-ODNs具有抗炎作用,i.p组的百日咳杆菌效应CpG-ODNs seq A可调节小鼠哮喘模型BALF中Th1/Th2平衡,各组对VEGF表达量的影响无显著性差异,结论:百日咳杆菌基因组CpG-ODNs具有抗炎作用,i.p组的百日咳杆菌效应可显著增强小鼠脾组织TLR-9的表达,该作用系CpG-ODNs与TLR-9形成复合物有关;口服给予CpG-ODNs seq A对脾组织TLR-9表达无显著改变;腹腔注射CpG-ODNs seq A对脾组织TLR-9表达的干预作用优于灌胃途径。

关键词：哮喘百日咳杆菌寡核苷酸单链 Th1/Th2 TOLL样受体9

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