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复方中药免疫增强剂对寒冷刺激小鼠呼吸道黏膜的保护作用研究

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黑龙江畜牧兽医 2023年第16期 120-123,140页

作者：蒋海生刘欢张晓云河北征宇制药有限公司石家庄051430 河北省兽用免疫增强剂产业技术研究院石家庄051430 河北省动物专用免疫增强技术创新中心石家庄051430

为了探讨复方中药免疫增强剂对小鼠呼吸道黏膜的保护作用,试验将36只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、模型组和复方中药免疫增强剂组,每组12只。复方中药免疫增强剂组给药剂量为0.5 g/kg,溶于0.4 mL无菌水中灌胃给予,1次/d,连续7次;空... 详细信息

为了探讨复方中药免疫增强剂对小鼠呼吸道黏膜的保护作用,试验将36只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、模型组和复方中药免疫增强剂组,每组12只。复方中药免疫增强剂组给药剂量为0.5 g/kg,溶于0.4 mL无菌水中灌胃给予,1次/d,连续7次;空白对照组和模型组灌胃等体积0.9%氯化钠溶液。末次给药30 min后,模型组和复方中药免疫增强剂组小鼠置-20℃环境中1 h,再转移至25℃环境中30 min,循环刺激2次以建立寒冷刺激致小鼠鼻黏膜免疫屏障功能低下模型;空白对照组小鼠不予任何刺激。采用试剂盒检测小鼠上呼吸道中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、λ干扰素(IFN-λ)、溶菌酶(LZM)分泌水平,观察鼻黏膜组织的病理变化,测定各组小鼠免疫器官指数。结果表明:与空白对照组比较,模型组小鼠sIgA、IFN-λ质量浓度均显著下降(P寒冷刺激致小鼠鼻黏膜免疫屏障功能低下模型制备成功。与模型组比较,复方中药免疫增强剂组小鼠sIgA、IFN-λ质量浓度均显著上升(P<0.05)。空白对照组鼻黏膜上皮结构完整、纤毛分布规整,未见明显脱落,淋巴细胞丰富;模型组鼻黏膜上皮萎缩,纤毛脱落,结构紊乱;复方中药免疫增强剂组黏膜上皮结构完整,纤毛分布较规整,和模型组比较,淋巴细胞增多。与空白对照组比较,模型组小鼠LZM活性、脾脏指数和胸腺指数均显著下降(P<0.05);与模型组比较,复方中药免疫增强剂组小鼠LZM活性、脾脏指数和胸腺指数均显著上升(P<0.05)。说明复方中药免疫增强剂可通过促进sIgA、IFN-λ和LZM的分泌,提高免疫器官指数来增强小鼠鼻黏膜免疫屏障功能,维持鼻黏膜形态结构完整,改善机体的免疫功能。

关键词：免疫增强剂寒冷刺激分泌型免疫球蛋白A(sIgA) λ干扰素(IFN-λ) 溶菌酶(LZM) 免疫器官指数

寒冷刺激支气管上皮细胞产生外泌体促肺成纤维细胞表达气道重塑相关因子

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中国生物化学与分子生物学报 2017年第10期33卷 1070-1075页

作者：朱芮李敏超重庆医科大学附属第二医院呼吸内科重庆400010

外泌体可由多种细胞分泌,是具有多种生物学功能的细胞外囊泡,但其在气道重塑中的作用尚不明确。为探讨经寒冷刺激的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)分泌的外泌体对人胚肺成纤维细胞(HLF1)气道重塑相关因子表达的影响,收集BEAS-2B细胞株培养... 详细信息

外泌体可由多种细胞分泌,是具有多种生物学功能的细胞外囊泡,但其在气道重塑中的作用尚不明确。为探讨经寒冷刺激的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)分泌的外泌体对人胚肺成纤维细胞(HLF1)气道重塑相关因子表达的影响,收集BEAS-2B细胞株培养液提取外泌体,利用透射电镜及Western印迹对外泌体进行其大小、形态及标志性蛋白的检测;提取的外泌体与HLF1共同培育,分别设置空白对照组、正常对照组(加入未作干预的BEAS-2B细胞所产的外泌体)及寒冷刺激组(加入经寒冷刺激后的BEAS-2B细胞所产的外泌体)。运用Real-time PCR及Western印迹技术,分别检测各组HLF1表达FGF-2、TNF-α、MMP-9的mRNA及蛋白情况。结果显示,提取BEAS-2B细胞分泌的外泌体为直径小于100 nm的圆形或椭圆形结构,并表达外泌体标志性蛋白CD9、TSG101、ALIX;寒冷刺激组24 h后,其FGF-2、TNF-α、MMP-9的mRNA及蛋白表达均显著高于空白对照组及正常对照组(均P寒冷刺激后的BEAS-2B细胞所释放的外泌体可以携带并传递生物信号,诱导HLF1表达气道重塑相关因子。

关键词：寒冷刺激外泌体气道重塑人支气管上皮细胞人胚肺成纤维细胞

寒冷刺激支气管上皮细胞产外泌体促肺成纤维细胞表达重塑相关因子

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寒冷刺激支气管上皮细胞产外泌体促肺成纤维细胞表达重塑相关因子

作者：朱芮重庆医科大学

学位级别：硕士

目的验证人支气管上皮细胞(BEAS-2B)能够产外泌体;探讨经寒冷刺激的BEAS-2B细胞分泌的外泌体对人胚肺成纤维细胞(HLF1)气道重塑相关因子表达的影响。方法收集BEAS-2B细胞株培养液提取外泌体,利用透射电镜及Western印迹对外泌体进行其大... 详细信息

目的验证人支气管上皮细胞(BEAS-2B)能够产外泌体;探讨经寒冷刺激的BEAS-2B细胞分泌的外泌体对人胚肺成纤维细胞(HLF1)气道重塑相关因子表达的影响。方法收集BEAS-2B细胞株培养液提取外泌体,利用透射电镜及Western印迹对外泌体进行其大小、形态和标志性蛋白的检测;提取的外泌体与HLF1共同培育,分别设置空白对照组、正常对照组(加入未作干预的BEAS-2B细胞所产的外泌体)及寒冷刺激组(加入经寒冷刺激后的BEAS-2B细胞所产的外泌体)。运用Real-time PCR及Western印迹技术,分别检测各组HLF1表达成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factors-2,FGF-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)的mRNA及蛋白情况。结果BEAS-2B细胞分泌的外泌体为直径小于100 nm的圆形或椭圆形结构,并表达外泌体标志性蛋白CD9、TSG101、ALIX;寒冷刺激组24 h后,其FGF-2、TNF-α、MMP-9的mRNA及蛋白表达均显著高于空白对照组及正常对照组(均P寒冷刺激后的BEAS-2B细胞所释放的外泌体可以携带并传递生物信号,诱导HLF1表达气道重塑相关因子。

关键词：寒冷刺激外泌体气道重塑人支气管上皮细胞人胚肺成纤维细胞

解表方对寒冷刺激致大鼠鼻黏膜免疫屏障功能低下模型的作用

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中成药 2022年第1期44卷 227-230页

作者：李爽杨居崩廖陈晏雪梅代蓉肖纯李秀芳云南中医药大学云南昆明650500

目的探究解表方对寒冷刺激致大鼠鼻黏膜免疫屏障功能低下模型的作用。方法采用冷热循环刺激复制大鼠鼻黏膜免疫屏障低下模型,分别给予含生药量33.48 g/kg的银翘散和含生药量2.43 g/kg的麻黄汤进行干预。ELISA试剂盒检测大鼠鼻腔灌洗液中... 详细信息

目的探究解表方对寒冷刺激致大鼠鼻黏膜免疫屏障功能低下模型的作用。方法采用冷热循环刺激复制大鼠鼻黏膜免疫屏障低下模型,分别给予含生药量33.48 g/kg的银翘散和含生药量2.43 g/kg的麻黄汤进行干预。ELISA试剂盒检测大鼠鼻腔灌洗液中sIgA水平,Western blot法检测鼻黏膜中IgA、BAFF、APRIL、TGF⁃β1、TACI和pIgR蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠鼻腔灌洗液中sIgA水平降低(P<0.05),鼻黏膜中IgA、BAFF、APRIL、TGF⁃β1和pIgR蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,给予银翘散后大鼠鼻黏膜中IgA蛋白表达升高(P<0.05),鼻腔灌洗液中sIgA水平升高(P<0.05),给予麻黄汤后大鼠鼻黏膜中IgA、BAFF、pIgR蛋白表达升高(P<0.05),鼻腔灌洗液中sIgA水平升高(P<0.05)。结论麻黄汤可通过升高大鼠鼻黏膜组织中BAFF、IgA、pIgR的蛋白表达,促进sIgA的分泌来提高大鼠鼻黏膜免疫屏障功能,而银翘散可升高大鼠鼻黏中IgA蛋白表达。

关键词：解表方寒冷刺激鼻黏膜免疫屏障功能低下

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寒冷刺激引起关节损伤实验研究

中西医结合研究 2020年第5期12卷 308-312页

作者：李靖董宇飞李斌张志强黄晓桃吴云霞武警湖北总队医院武汉430061 华中科技大学同济医学院药学院武汉430030 华中科技大学同济医学院附属湖北省妇幼保健院武汉430070

目的观察间断性寒冷刺激引起小鼠关节炎病变的情况。方法将20只8周龄昆明小鼠随机分为正常对照组和寒冷刺激组,每组10只。对照组小鼠自由饮食,无特殊处理。寒冷刺激组小鼠每天固定时间被放置于底层铺满冰袋的小鼠笼中2 h,寒冷刺激共处... 详细信息

目的观察间断性寒冷刺激引起小鼠关节炎病变的情况。方法将20只8周龄昆明小鼠随机分为正常对照组和寒冷刺激组,每组10只。对照组小鼠自由饮食,无特殊处理。寒冷刺激组小鼠每天固定时间被放置于底层铺满冰袋的小鼠笼中2 h,寒冷刺激共处理12周。每周测量小鼠体重和后踝关节以下体积,寒冷刺激处理结束后脱颈处死小鼠,取其左后腿趾间关节、跖趾关节、踝关节进行组织固定、包埋、切片,HE染色观察各关节病理变化。剥去小鼠右后腿皮肤,提取踝关节组织匀浆,检测匀浆液类风湿因子(reumatoid factor,RF)、C-反应蛋白(C-reaction protein,CRP)的水平。结果寒冷刺激对小鼠体重无明显影响(P>0.05),寒冷刺激使小鼠后爪组织体积显著增加(P寒冷刺激后,小鼠关节组织水肿,轻度炎症浸润、滑膜增生,但未见明显血管翳、软骨和骨侵蚀等病理变化。寒冷刺激后,雌、雄性小鼠踝关节组织匀浆液CRP水平明显升高(P0.05)。结论间断性寒冷刺激可以引起小鼠趾间关节、跖趾关节、踝关节等关节炎性肿胀,但炎性细胞浸润少、浸润程度轻。此动物模型可作为一种以寒性为特征的不同于类风湿性关节炎等热性关节炎表现的新关节炎模型。

关键词：寒冷刺激关节炎类风湿因子 C-反应蛋白

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寒冷刺激对畜禽机体功能的影响

浙江畜牧兽医 2020年第6期45卷 13-15页

作者：于雯龙黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

寒冷刺激在我国大部分北方地区是对畜禽较为常见的应激因素,寒冷刺激会导致畜禽机体内环境的稳定状态、生理行为以及生理活动等发生改变[1],进而能够引起畜禽机体的全身发生非特异性变化。而当畜禽机体受到的寒冷应激强度过强时,机体就... 详细信息

寒冷刺激在我国大部分北方地区是对畜禽较为常见的应激因素,寒冷刺激会导致畜禽机体内环境的稳定状态、生理行为以及生理活动等发生改变[1],进而能够引起畜禽机体的全身发生非特异性变化。而当畜禽机体受到的寒冷应激强度过强时,机体就会发生多种复杂的异常反应,使畜禽机体的神经内分泌系统和免疫系统等多种功能受到影响[2]。

关键词：机体功能寒冷应激神经内分泌系统应激因素免疫系统寒冷刺激特异性变化北方地区

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肥大细胞促进寒冷刺激后的白色脂肪米色化

中华内分泌代谢杂志 2017年第7期33卷 612-619页

作者：陈彦陈刚福建省立医院南院内科福州350001 福建省立医院内分泌科

本文是在获得《Diabetes》杂志授权同意后,对2017年5月发表于该刊上的论著《Mast Cells Promote Seasonal White Adipose Beiging in Humans》（Diabetes 2017,66：1237-1246）进行中文翻译.该文主要研究白色脂肪米色化的机制,动物实验... 详细信息

本文是在获得《Diabetes》杂志授权同意后,对2017年5月发表于该刊上的论著《Mast Cells Promote Seasonal White Adipose Beiging in Humans》（Diabetes 2017,66：1237-1246）进行中文翻译.该文主要研究白色脂肪米色化的机制,动物实验研究提示寒冷刺激及许多免疫调节剂在人类皮下白色脂肪组织（subcutaneous white adipose tissue,SC-WAT）米色化反应过程中起重要作用.文章针对消瘦人群SC-WAT进行了季节相关的研究,检测了各种免疫细胞标记物的基因表达量,并进一步进行多变量分析,从而鉴定可预测解耦联蛋白1（UCP-1）基因表达的因子,同时还通过体外实验研究了肥大细胞诱导脂肪细胞UCP-1表达的机制.结果显示冷刺激下TIB64肥大细胞释放组胺和白细胞介素4（IL-4）,并进一步刺激3T3-L1脂肪细胞的UCP-1的表达和脂肪的分解.阻断肥大细胞的脱颗粒效应、抑制组胺释放或应用组胺拮抗剂,均可有效抑制诱导脂肪细胞UCP-1 mRNA的表达.综上所述,肥大细胞是WAT米色化反应中重要的免疫细胞类型,其在寒冷刺激后释放了促进UCP-1表达的因子.

关键词：肥大细胞白色脂肪米色化寒冷刺激解耦联蛋白1

寒冷刺激对大鼠胃粘膜的影响及良附丸的防治作用研究

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寒冷刺激对大鼠胃粘膜的影响及良附丸的防治作用研究

作者：毕殿红辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的：观察内、外寒冷刺激对大鼠胃粘膜形态及相关功能的影响。通过对实验大鼠施加寒冷刺激因素,观察大鼠胃粘膜局部病理改变及检测血清和胃粘膜的胃动素、胃泌素、前列腺素及内皮素的变化，探讨内外寒冷刺激对大鼠胃粘膜功能状态的影... 详细信息

目的：观察内、外寒冷刺激对大鼠胃粘膜形态及相关功能的影响。通过对实验大鼠施加寒冷刺激因素,观察大鼠胃粘膜局部病理改变及检测血清和胃粘膜的胃动素、胃泌素、前列腺素及内皮素的变化，探讨内外寒冷刺激对大鼠胃粘膜功能状态的影响，及良附丸的防治作用。材料与方法： 1分组造模及用药干预：大鼠适应性喂养3天，按体重随机分为5组。正常对照组：用生理盐水灌胃2mL／l00g，日2次;冰水浸泡组：用0℃冰水浸泡大鼠30min，水深为2cm，日1次;生理盐水灌胃2mL／l00g，日1次;冰水灌胃组：用0℃冰水灌胃2mL／100g，日2次;复合刺激组：用0℃冰水浸泡大鼠30min，水深为2cm，用0℃冰水2mL／100g灌胃，日1次;中药防治组：用0℃冰水浸泡大鼠30min，水深为2cm，用0℃冰水2mL／100g灌胃，日1次，同时给予良附丸溶液灌胃，日1次，灌胃时间间隔4小时以上。实验周期共7天。 2大鼠一般状态的观察：实验进行过程中，对大鼠饮食，二便，精神状态，毛色，体重情况及死亡情况进行观察和记录。 3取材及实验指标检测：实验结束后，禁食不禁水12小时，麻醉后，剖开大鼠腹腔，腹主动脉采血4mL，检测血清胃动素、胃泌素、前列腺素，内皮素;沿大弯侧剪开鼠胃，生理盐水冲洗，取胃体、胃窦组织检测胃粘膜病理，及胃粘膜胃动素、胃泌素、前列腺素，内皮素含量。结果： 1施加内、外寒冷刺激可损伤大鼠胃粘膜形态。 2大鼠胃组织和血清中的胃动素、胃泌素、6-keto-PGF2α水平降低，内皮素水平升高。 3良附丸可改善大鼠受损的胃粘膜。 4良附丸对模型大鼠血清及胃粘膜中的胃动素、胃泌素、6-keto-PGF2α水平，内皮素的水平有一定调整作用。结论： 1寒性刺激可以使实验大鼠的胃粘膜造成病理性损伤。 2寒冷刺激可以使大鼠胃粘膜和血清的胃动素、胃泌素、6-keto-PGF2α水平降低;可以使内皮素水平升高。 3冰水浸泡、冰水灌胃及复合因素对胃粘膜损伤的程度是不同的，复合因素损伤作用较重，冰水灌胃次之，冰水浸泡较轻。 4良附丸对寒冷刺激所致胃粘膜的损伤有一定防治作用。

关键词：寒冷刺激实验大鼠胃粘膜良附丸机制研究

寒冷刺激诱导大鼠棕色脂肪组织中的心脏干细胞增多

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中国循环杂志 2011年第5期26卷 382-385页

作者：杨俊杰刘志强王海滨刘剑锋陈韵岱中国人民解放军总医院心血管内科北京市100853 军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室

目的:检测寒冷刺激下大鼠肩胛部棕色脂肪组织中的心脏干细胞。方法:将大鼠随机分为2组,每组6只。实验组在寒冷环境下(4℃)饲养,对照组在常温条件(24℃)饲养。4周后分离肩胛部棕色脂肪比较两组脂肪组织活性。运用联合酶消化法提取并体外... 详细信息

目的:检测寒冷刺激下大鼠肩胛部棕色脂肪组织中的心脏干细胞。方法:将大鼠随机分为2组,每组6只。实验组在寒冷环境下(4℃)饲养,对照组在常温条件(24℃)饲养。4周后分离肩胛部棕色脂肪比较两组脂肪组织活性。运用联合酶消化法提取并体外培养棕色脂肪来源细胞,使用流式方法检测相应细胞表面标记物的表达情况,体外培养4周后运用免疫荧光等技术检测心肌特异性抗原的表达,并比较不同细胞接种密度下自发心肌分化的效果。结果:饲养4周后,实验组较对照组大鼠肩胛部棕色脂肪中解偶联蛋白-1(UCP-1)表达增加,棕色脂肪来源细胞的CD133,CD29和CD29/CD133表达增加,差异均有统计学意义(P寒冷刺激下棕色脂肪中存在更多的心脏干细胞,提示温度对心脏干细胞体内定位或增殖具有一定作用。

关键词：棕色脂肪心脏干细胞寒冷刺激