检索结果-南通市图书馆

安徽医科大学学报 2024年第7期 1231-1237页

作者：高雄肖胜昔郝泉水李秀芳吴耀华长江大学医学部黄冈市中心医院麻醉科罗田县人民医院麻醉科

目的研究富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)对神经病理性疼痛(NP)大鼠痛觉敏感性的影响，并探讨其可能的机制。方法将48只SD大鼠随机分成4组：假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、LRRK2抑制剂组(MLi-2组)和LRRK2抑制剂+p38丝裂原活化蛋白激... 详细信息

目的研究富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)对神经病理性疼痛(NP)大鼠痛觉敏感性的影响，并探讨其可能的机制。方法将48只SD大鼠随机分成4组：假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、LRRK2抑制剂组(MLi-2组)和LRRK2抑制剂+p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激动剂组(MLi-2+Anisomycin组),每组12只。采用坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)诱导NP大鼠模型，术后第8天开始鞘内注射MLi-2(1 mg/kg, 10μl)或Anisomycin(20μmol/L,10μl),每天1次，连续7 d。分别于术前(第0天)及术后第7、14天进行痛觉敏感性检测，分析各组大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(PWTL)变化；ELISA检测大鼠脊髓背角中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；尼氏染色观察大鼠脊髓组织神经元病理变化；免疫荧光染色观察大鼠脊髓中小胶质细胞标志物离子化钙结合适配分子-1(Iba-1)表达水平；Western blot检测大鼠脊髓背角中LRRK2、p-p38 MAPK、p38 MAPK和Iba-1蛋白表达水平。结果与Sham组比较，Model组大鼠右侧后肢MWT和PWTL均明显降低(P2、Iba-1蛋白和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平均明显升高(P2组大鼠右侧后肢MWT和PWTL明显升高(P2、Iba-1蛋白和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平明显降低(P2对NP大鼠痛敏、神经炎症的改善作用。结论抑制LRRK2表达可减轻由小胶质细胞活化介导神经炎症引起的NP大鼠痛觉敏感性，其作用机制可能与调控p38 MAPK信号通路有关。

关键词：神经病理性疼痛富含亮氨酸重复激酶2 小胶质细胞神经炎症 p38丝裂原活化蛋白激酶

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

缺氧后线粒体Drp1通过LRRK2-HK2诱导mPTP过度开放的机制研究

引用

重庆医科大学学报 2023年第2期48卷 117-123页

作者：段晨阳重庆医科大学第二附属医院麻醉科重庆400010

目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况... 详细信息

目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况;通过超速离心法分离线粒体和细胞质成分蛋白;使用Co-IP和Westernblot检测缺氧或者干预Drp1、干预己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)后Drp1的表达分布情况、HK2与电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage dependent anion channel,VDAC)结合情况、Drp1与富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)结合情况;使用蛋白分子对接和蛋白芯片方法筛选Drp1的潜在结合蛋白及结合位点;使用Drp1抑制剂和点突变法用于相应机制探究。结果:缺氧后Drp1发生线粒体转位促使mPTP过度开放(P2-Thr473磷酸化水平减低引起的HK2线粒体分离会导致mPTP结构破坏,通过HK2 T473D点突变恢复HK2活性后,HK2与线粒体结合情况及mPTP开放情况明显改善(P2结合并封闭其活性位点,通过Drp1 T595A点突变破坏Drp1-LRRK2结合后,HK2活性及HK2线粒体分离情况明显改善(P激酶LRRK2活性位点导致HK2 Thr473磷酸化水平减低及其线粒体分离,最终诱导mPTP过度开放。

关键词：缺氧动力相关蛋白1 富含亮氨酸重复激酶2 己糖激酶-2 线粒体线粒体膜通透性转换通道

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

帕金森病相关蛋白LRRK2与PAKs蛋白相互作用的细胞生物学研究

帕金森病相关蛋白LRRK2与PAKs蛋白相互作用的细胞生物学研究

引用

作者：张然武汉科技大学

学位级别：硕士

目的:本研究以富含亮氨酸重复激酶2(Leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)蛋白及其相互作用蛋白质分子(PAK5、PAK6)为研究对象,从细胞生物学角度阐明LRRK2蛋白与PAKs蛋白的相互作用机制及其内在联系,为了解LRRK2在帕金森病中的致病机制... 详细信息

目的:本研究以富含亮氨酸重复激酶2(Leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)蛋白及其相互作用蛋白质分子(PAK5、PAK6)为研究对象,从细胞生物学角度阐明LRRK2蛋白与PAKs蛋白的相互作用机制及其内在联系,为了解LRRK2在帕金森病中的致病机制提供新的理论基础。方法:利用分子克隆技术制备本实验中所需要的重组蛋白表达质粒,包括带HA标签、GFP荧光标签的LRRK2全长蛋白,带Cy Pet荧光标签的LRRK2蛋白,带Myc标签、GFP、YPet荧光标签的PAK5、PAK6蛋白,通过转染在哺乳动物细胞系(HEK293T)中瞬时表达蛋白。利用荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)检测LRRK2与PAKs蛋白的相互作用及其相互作用程度。通过蛋白免疫印迹检测蛋白表达情况并探究其激酶活性变化。利用线粒体红色荧光探针检测二者在线粒体中的定位情况。结果:FRET结果显示,LRRK2与PAK6及PAK5在细胞中会发生相互作用,与野生型相比,LRRK2的Roc结构域的致病突变和保护突变会增强其与PAK5、PAK6的相互作用,差异具有统计学意义(P2与PAKs在HEK293T细胞中共表达后对PAKs的磷酸化水平没有显著影响。过表达PAK5或PAK6对内源性LRRK2及过表达野生型LRRK2及LRRK2的磷酸化水平无明显影响,对过表达LRRK2的磷酸化水平有下降的趋势,对过表达LRRK2的磷酸化水平有升高的趋势。荧光探针染色后皮尔森相关系数分析显示,PAK6及LRRK2与线粒体共定位信号强于PAK5,二者在细胞中共表达后,LRRK2在细胞中的分布形态由弥散分布变为散在聚集性分布。过表达野生型LRRK2及R1398H、R1441H突变体增强了PAK5与线粒体的共定位荧光信号,而N1437H、R1441C突变体则对PAK5在线粒体中的定位没有明显改变,过表达LRRK2(野生型及突变体)对PAK6与线粒体的共定位荧光信号没有明显改变。结论:LRRK2可以和PAK6及PAK5在细胞中发生相互作用;二者在细胞中共表达会改变LRRK2在细胞中的分布形态;PAK6与LRRK2定位在线粒体上,PAK5在线粒体上没有明显定位;LRRK2的Roc结构域的致病突变和保护突变会增强其与PAK5、PAK6的相互作用,同时会改变PAK5在线粒体上的定位,对PAK6在线粒体上的定位没有明显改变。

关键词：富含亮氨酸重复激酶2 Ⅱ型P21活化激酶蛋白相互作用荧光共振能量转移线粒体蛋白共定位分析

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

帕金森病相关致病蛋白LRRK2与Ⅱ型PAKs家族蛋白的相互作用研究

帕金森病相关致病蛋白LRRK2与Ⅱ型PAKs家族蛋白的相互作用研究

引用

作者：潘慧琴武汉科技大学

学位级别：硕士

目的:本研究以富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)的ROC结构域蛋白及其相互作用的蛋白质分子(PAK5、PAK6)为研究对象,从分子生化水平上阐明ROC结构域蛋白与PAKs蛋白的分子间作用机理及内在联系,为LRRK2致病机理... 详细信息

目的:本研究以富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)的ROC结构域蛋白及其相互作用的蛋白质分子(PAK5、PAK6)为研究对象,从分子生化水平上阐明ROC结构域蛋白与PAKs蛋白的分子间作用机理及内在联系,为LRRK2致病机理的研究提供新的分子机制及理论基础,为深入了解帕金森病的致病机理提供新的理论依据。方法:利用分子克隆技术制备带有不同标签蛋白(GST、MBP、Myc等)的重组蛋白表达质粒(野生型及突变体),包括全长蛋白(PAK5、PAK6)、ROC截短蛋白(1329-1520aa)、PAKs截短蛋白PAKs-GBD(10/11-55aa),在原核大肠杆菌E.coli或哺乳动物细胞系(HEK293T细胞)中形成稳定蛋白表达系统。运用下拉实验(pull-down assay)检测其相互作用水平。利用原核生物蛋白表达系统进一步将蛋白分离纯化(主要包括亲和层析与凝胶过滤层析),运用生物膜层干涉技术(Biolayer interferometry,BLI)-蛋白相互作用检测二者相互作用并计算K值;合成多肽分子PAKs-GBD(10-40aa),N端用FITC-Ahx修饰,利用荧光偏振技术来检测二者相互作用并计算K值。结果:下拉实验的结果显示,ROC结构域的野生型不仅可与PAK6发生相互作用,也可与PAK5发生相互作用;ROC结构域内的致病突变/保护型突变、活性型、磷酸模拟型突变均能与PAK5、PAK6发生相互作用且对与PAK5、PAK6的相互作用无明显影响;虽然在截短蛋白PAKs-GBD与ROC结构域蛋白的下拉实验中,PAK5-GBD与ROC结构域蛋白的结合力明显弱于PAK6-GBD与ROC结构域蛋白的结合力,但是在全长蛋白PAKs与ROC结构域蛋白的下拉实验中,PAK5、PAK6与ROC结构域蛋白的相互作用无显著性差异。BLI技术-蛋白相互作用与荧光偏振实验的结果显示,ROC结构域的野生型与PAK6-GBD的相互作用的K值为14.68n M,与PAK5-GBD的相互作用的K值为14.96 n M,表明ROC结构域蛋白不仅可以与PAK6-GBD发生相互作用,也可以与PAK5-GBD发生相互作用,且PAK5-GBD、PAK6-GBD与ROC结构域蛋白的结合力无差异性;此外,ROC结构域蛋白的野生型与PAKs-GBD的相互作用的K值是致病突变的4～8倍,表明致病突变显著增强了ROC结构域蛋白与PAKs-GBD的相互作用;单磷酸模拟型突变与PAKs-GBD的相互作用的K值大约是野生型的1.5倍,而多磷酸模拟型突变与PAKs-GBD的相互作用的K值与野生型无差异性,提示ROC结构域的磷酸化的水平可影响ROC结构域蛋白与PAKs-GBD的相互作用;ROC结构域野生型、保护型突变的活性型与PAK6-GBD的K值是非活性型的1.5～2倍,PAK5-GBD与ROC结构域的活性型/非活性型的相互作用的K值无差异,提示ROC结构域蛋白的GTP活性型并不明显增强其与PAK6-GBD、PAK5-GBD的相互作用,ROC结构域蛋白与PAK5-GBD的结合属于非GTP依赖型结合。结论LRRK2 ROC结构域不仅可以与PAK6发生相互作用,也可以与PAK5发生相互作用;位于LRRK2 ROC结构域的致病突变可影响其与PAK5、PAK6的相互作用;LRRK2 ROC结构域蛋白与PAK5、PAK6的相互作用是非GTP依赖型结合。

关键词：富含亮氨酸重复激酶2 帕金森病 P21-活化激酶5 P21-活化激酶6 蛋白相互作用

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：