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上皮细胞黏附分子增强细胞间紧密连接促进乳腺癌细胞耐药

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中国生物化学与分子生物学报 2022年第6期38卷 809-815页

作者：牛亚楠高宇何倚帆李克敏李瑞涵张文龙张轩萍师锐赞山西医科大学基础医学院药理教研室山西榆次030000 山西医科大学第一临床医学院太原030001

乳腺癌是致死率很高的恶性肿瘤,由ABCG2(ATP-binding cassette G2)介导的多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致其化疗失败的重要原因,探讨ABCG2介导的耐药机制并探寻其关键分子是当前亟待解决的难题。上皮细胞黏附分子(epithelial ... 详细信息

乳腺癌是致死率很高的恶性肿瘤,由ABCG2(ATP-binding cassette G2)介导的多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致其化疗失败的重要原因,探讨ABCG2介导的耐药机制并探寻其关键分子是当前亟待解决的难题。上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)参与多种肿瘤耐药,且与乳腺癌MDR密切相关,但它在ABCG2介导的乳腺癌耐药中的作用尚未阐明。本研究目的在于探究EpCAM对于ABCG2介导的乳腺癌细胞的多药耐药的调节作用及其机制。CCK8细胞毒性结果证实,相对于人乳腺癌药物敏感株MCF-7,耐药株MCF-7/MX对米托蒽醌(mitoxantrone,MX)的耐药性显著增强;Western印迹结果显示,与MCF-7相比,MCF-7/MX细胞中ABCG2高表达,EpCAM表达上调。siRNA法敲低MCF-7/MX细胞中EpCAM可下调其ABCG2表达,并恢复对MX的敏感性。倒置显微镜观察细胞形态,发现敲低EpCAM可减少MCF-7/MX细胞间连接。免疫荧光双染法观察到EpCAM与密封蛋白1(claudin 1)在MCF-7/MX细胞共定位;进一步Western印迹结果表明,敲低EpCAM减少MCF-7/MX细胞中密封蛋白1表达。综上所述,EpCAM可能通过与密封蛋白1相互作用,增强细胞间紧密连接,促进ABCG2介导的乳腺癌多药耐药。

关键词：上皮细胞黏附分子乳腺癌细胞间紧密连接密封蛋白1 耐药

轮状病毒感染致腹泻乳鼠模型粪便中志贺杆菌的分离、鉴定及其对人克隆结肠腺癌细胞中紧密连接蛋白表达的影响

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吉林大学学报（医学版） 2021年第5期47卷 1221-1228页

作者：于美玲陆恒章陶晓莉程美慧李永刚赵微锦州医科大学基础医学院病原生物学实验室辽宁锦州121000

目的:探讨密封蛋白1(Claudin-1)和闭合蛋白(Occludin)在志贺杆菌感染的人克隆结肠腺癌细胞(Caco-2)中的表达情况,阐明志贺杆菌对人克隆结肠腺癌Caco-2细胞的影响及其相关机制。方法:将10窝SPF级昆明系5日龄乳鼠分为对照组乳鼠5窝和实验... 详细信息

目的:探讨密封蛋白1(Claudin-1)和闭合蛋白(Occludin)在志贺杆菌感染的人克隆结肠腺癌细胞(Caco-2)中的表达情况,阐明志贺杆菌对人克隆结肠腺癌Caco-2细胞的影响及其相关机制。方法:将10窝SPF级昆明系5日龄乳鼠分为对照组乳鼠5窝和实验组乳鼠5窝,对照组乳鼠每天每只灌胃PBS缓冲液100μL,实验组乳鼠每天每只灌胃病毒滴度为1×10^(6) PFU·mL^(-1) SA11株轮状病毒100μL,采集乳鼠粪便标本通过生化实验、血清学检测及16S rRNA测序,进行志贺杆菌的分离和鉴定。将Caco-2细胞分为对照组和志贺杆菌感染组,采用不同浓度梯度的志贺杆菌感染Caco-2细胞不同时间后,台盼蓝染色检测各组细胞存活率,Real-timePCR和Westernblotting法检测各组细胞中Claudin-1和OccludinmRNA及蛋白表达水平。结果:细菌生化鉴定可观察到双糖铁培养基斜面不变色,底部为黄色,且穿刺线明显,疑似致病性肠道菌。该菌对乳糖呈阴性,对葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇呈阳性。16S rRNA测序,与志贺杆菌序列同源性为99%,确定为志贺杆菌。与对照组比较,志贺杆菌感染组志贺杆菌感染4 h内细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05):与1×10^(6) CFU·mL^(-1)志贺杆菌共培养3 h时,Caco-2细胞中Claudin-1和Occludin mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:通过轮状病毒感染致腹泻乳鼠模型粪便中分离的志贺杆菌可降低人克隆Caco-2中Occludin和Claudin-l的表达水平,提高肠上皮细胞的通透性,从而影响肠上皮细胞的正常屏障功能。

关键词：志贺杆菌 Caco-2细胞密封蛋白1 闭合蛋白

葛根芩连汤抑制特应性皮炎小鼠模型炎症反应及恢复皮肤屏障功能的实验研究

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环球中医药 2022年第10期15卷 1774-1781页

作者：李昱达郑丰杰王航张淑静冯婧刘锦钢汤阳孙燕李宇航北京中医药大学中医学院 100029

目的观察葛根芩连汤对2,4-二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导的特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)模型小鼠的干预作用及潜在作用机制。方法 24只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、中药组(葛根芩连汤治疗)和对照组(... 详细信息

目的观察葛根芩连汤对2,4-二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导的特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)模型小鼠的干预作用及潜在作用机制。方法 24只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、中药组(葛根芩连汤治疗)和对照组(糠酸莫米松治疗)。DNFB反复刺激皮肤致敏诱导AD小鼠模型。观测各组小鼠皮损评估、皮肤组织病理学、皮肤p H值、经皮水分流失、搔抓行为及血清总免疫球蛋白E (immunoglobulin E,Ig E)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)含量。逆转录—聚合酶链式反应(quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)法测定丝聚合蛋白、密封蛋白1的m RNA的表达;蛋白免疫印迹法(Weston blot,WB)检测丝聚合蛋白、密封蛋白1的蛋白表达水平。结果 (1)治疗前,与正常组相比,模型组背部皮肤有明显的红斑水肿,并可见结痂、鳞屑、皮肤肥厚增生;搔抓次数明显增多,经皮失水及皮肤p H值显著升高;经治疗,与模型组比较,中药组与对照组皮肤损伤情况改善,搔抓次数、经皮失水、皮肤p H值显著降低(P 10水平均与正常组有显著差异;经治疗,中药组、对照组总Ig E、IL-6水平与模型组相比含量降低(P 蛋白、密封蛋白1的表达水平降低;WB显示丝聚合蛋白、密封蛋白1蛋白的含量降低;经治疗,中药组、对照组丝聚合蛋白、密封蛋白1的基因表达水平增高;丝聚合蛋白、密封蛋白1蛋白含量增高(P 蛋白、密封蛋白1的表达,抑制炎症反应和改善皮肤屏障,为中医“皮应大肠”理论和皮肤病从肠论治提供了实验依据。

关键词：特应性皮炎葛根黄芩黄连汤经皮水分流失丝聚合蛋白密封蛋白1 皮应大肠从肠治皮

痛泻要方对肝郁脾虚型UC大鼠结肠组织Claudin-1、ZO-1及血清COX-2、iNOS表达的影响

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中医药信息 2023年第8期40卷 15-22页

作者：樊俐慧朱向东杨霞王志刚甘肃中医药大学甘肃兰州730000 宁夏医科大学宁夏回族自治区银川750000 天水市中医医院甘肃天水741000

目的:探讨痛泻要方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠血清中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,iNOS)含量及结肠组织中密封蛋白1(Claudin-1)、紧密连接蛋白1(ZO-1)基因及蛋白表达的影响。方法:100只Wistar大鼠用病-证结合法复建肝郁脾虚型UC模型,按随机数字表法将造模组大鼠分为模型组(10 g/kg蒸馏水灌胃),美沙拉嗪组(0.4 g/kg美沙拉嗪灌胃),痛泻要方高、中、低剂量组(20.8、10.4、5.2 g/kg痛泻要方灌胃),每组20只。另取20只正常大鼠作为空白组(10 g/kg蒸馏水灌胃),各组灌胃体积均为10 mL/kg,连续21 d。药物治疗结束后,取血清及结肠组织,ELISA法检测血清中COX-2、iNOS含量;观察结肠组织大体形态及损伤情况,HE染色观察病理表现,RT-qPCR法检测Claudin-1、ZO-1 mRNA表达,免疫组化法和Western blot法检测Claudin-1、ZO-1平均光密度值及蛋白表达。结果:光镜观察显示,模型组大鼠结肠黏膜充血、水肿,炎性细胞浸润,细胞间紧密连接断裂;经痛泻要方干预后,大鼠结肠黏膜病理变化明显改善,细胞间紧密连接正常。与空白组比较,模型组大鼠血清中COX-2、iNOS含量明显升高(P蛋白表达明显降低(P蛋白表达量显著升高(P0.05);痛泻要方低剂量组Claudin-1、ZO-1平均光密度值升高(P蛋白表达升高(P蛋白Claudin-1、ZO-1的表达量及降低炎症细胞因子COX-2、iNOS的含量有关。

关键词：痛泻要方溃疡性结肠炎密封蛋白1 紧密连接蛋白1 环氧合酶-2 诱导型一氧化氮合酶

claudin 1和E-cadherin蛋白在大肠癌组织中的表达及临床意义

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癌症进展 2019年第13期17卷 1583-1585,1589页

作者：贾志伟邢贺楠刘晓川褚云香应急总医院消化科北京100029 北京和睦家医院内镜室北京1000160

目的探讨密封蛋白1(claudin 1)和上皮钙黏素(E-cadherin)在大肠癌组织中的表达情况及其与大肠癌患者临床特征的关系。方法收集80例大肠癌患者的大肠癌组织标本和癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法检测大肠癌组织和癌旁组织中claudin... 详细信息

目的探讨密封蛋白1(claudin 1)和上皮钙黏素(E-cadherin)在大肠癌组织中的表达情况及其与大肠癌患者临床特征的关系。方法收集80例大肠癌患者的大肠癌组织标本和癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法检测大肠癌组织和癌旁组织中claudin 1 和E-cadherin 蛋白的表达情况,分析大肠癌组织中claudin 1 和E-cadherin蛋白表达与大肠癌患者临床特征的关系。结果大肠癌组织中claudin 1蛋白的阳性表达率为65.0%(52/80),明显高于癌旁组织的27.5%(22/80),差异有统计学意义(P﹤0.01);大肠癌组织中E-cadherin 蛋白的阳性表达率为42.5%(34/80),明显低于癌旁组织的75.0%(60/80),差异有统计学意义(P﹤0.01)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移、侵及浆膜的大肠癌患者大肠癌组织中claudin 1 蛋白的阳性表达率均高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移、未侵及浆膜的患者,差异有统计学意义(P﹤0.05)。有淋巴结转移、侵及浆膜的大肠癌患者大肠癌组织中E-cadherin 蛋白的阳性表达率均明显低于无淋巴结转移、未侵及浆膜的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论 claudin 1蛋白在大肠癌组织中高表达,E-cadherin蛋白在大肠癌组织中低表达,并且与大肠癌的发生发展关系密切。

关键词：大肠癌密封蛋白1 上皮钙黏素临床特征