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宫内高糖对胎盘炎症因子及子代胰腺Igf2基因印记的影响

宫内高糖对胎盘炎症因子及子代胰腺Igf2基因印记的影响

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作者：刘妙娥浙江大学

学位级别：硕士

第一部分妊娠期糖尿病对胎盘炎症因子的影响目的：研究妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus, GDM)患者胎盘合成释放炎症因子改变,明确高糖环境对胎盘滋养细胞合成释放炎症因子的影响。材料和方法：获取临床妊娠期糖尿病和正常... 详细信息

第一部分妊娠期糖尿病对胎盘炎症因子的影响目的：研究妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus, GDM)患者胎盘合成释放炎症因子改变,明确高糖环境对胎盘滋养细胞合成释放炎症因子的影响。材料和方法：获取临床妊娠期糖尿病和正常对照组(Control, C)胎盘组织,采用实时定量PCR、酶联免疫吸附试验检(ELISA)测胎盘炎症因子合成释放改变。体外以生理糖浓度(5mmol/L)和高糖环境(25mmol/L)培养人类滋养细胞系(HTR8/SVneo)48h再加脂多糖(lipopolysaccharide, LPS,1μg/ml)刺激24h,酶联免疫吸附试验检测上清炎症因子释放。结果：GDM组胎盘较C组相比,抗炎因子脂联素(Adiponectin, ADIPOQ)、白细胞介素5(Interleukin5, IL5)、白细胞介素13(Interleukin13, IL13)信使RNA (message RNA, mRNA)表达下降(p高糖培养人类滋养细胞系,结果其释放IL-6增加(p高糖是引起胎盘和人类滋养细胞合成释放炎症因子发生改变,炎症反应亢进的主要原因。第二部分妊娠期糖尿病对小鼠胎鼠胰腺Igf2表达的影响及调控机制目的：研究宫内高糖环境下小鼠胎盘炎症反应改变及胎鼠胰腺胰岛素储备功能、印记基因Igf2表达、Igf2差异甲基化区(differentially methylated region, DMR)的甲基化状况及相关甲基化调节酶的改变,分析糖尿病发病相关基因的表达差异及可能的调节机制。材料和方法：建立妊娠期糖尿病小鼠模型,在孕18.5天取出对照组(F1-Control)与实验组(F1-GDM)胎盘、胎鼠胰腺(fetal mouse pancreas, FMP)进行比较,实时定量PCR检测胎盘炎症因子表达、胎鼠胰腺胰岛素、印记基因Igf2、甲基化调控相关酶Dnmt1、Dnmt3a、Trim28、Tet1、Aicda表达,免疫组化观察GDM胎鼠胰腺内胰岛素合成情况,并用MassARRAYTM EpiTYPER定量甲基化平台对Igf2甲基化水平进行分析。结果：宫内高糖环境的子一代胎盘白细胞介素6(Interleukin6,I16)表达增加(p宫内高糖可致小鼠胎盘116表达改变,是引起胎盘炎症环境改变的主要原因。同时胎鼠胰腺印记基因Igf2表达降低,可能是胎鼠胰岛素储备功能受损的原因之一。宫内高糖环境胎鼠胰腺Igf2DMR2高甲基化状态是引起Igf2表达降低的主要机制。胎鼠胰腺甲基化稳态关键酶Dnmt1、Trim28表达升高及Aicda表达降低,是胰腺印记基因Igf2甲基化水平改变的主要原因。第三部分白细胞介素6和高糖对胎鼠胰腺的影响目的：探索宫内改变环境中影响胎鼠表观遗传变化的主要原因及其可能机制。材料和方法：体外原代培养孕18.5天胎鼠胰腺组织C (glucose5mmol/L), C+IL-6(glucose5mmol/L+IL-64000pg/ml), HG (glucose25mmol/L), HG+IL-6(glucose25mmol/L+IL-64000pg/ml)48h后,利用实时定量PCR检测这四组胰腺印记基因Igf2、胰岛素、Dnmt1、Trim28、Aicda表达改变,免疫荧光观察不同培养条件下胎鼠胰腺内胰岛素合成情况,再次利用MassARRAYTM EpiTYPER定量甲基化平台对Igf2甲基化水平进行分析。结果：IL-6或HG培养均可使胎鼠胰腺胰岛素合成减少(p0.05)。IL-6或HG对Igf2DMR2区有4个CpG位点在IL-6或HG培养条件下出现高甲基化(p<0.05),其中IL-6对CpG、CpG、CpG1

关键词：宫内高糖胎鼠胰腺 Igf2 甲基化胰岛素妊娠期糖尿病炎症因子高糖人类滋养细胞系白细胞介素6 Dnmt1 Trim28 CpG岛

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宫内高糖暴露及子代早期高脂饮食造成子鼠脂肪胰及其与超声杨氏模量的关系

宫内高糖暴露及子代早期高脂饮食造成子鼠脂肪胰及其与超声杨氏模...

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作者：朱燕云福建医科大学

学位级别：硕士

目的:研究宫内高糖暴露及子代早期高脂饮食与子鼠脂肪胰的关系,探讨脂肪胰病理严重程度与超声杨氏模量的关系。方法:将Wistar孕鼠随机分成妊娠期糖尿病(GDM)组及正常血糖(NBG)组。GDM组孕鼠腹腔注射1%STZ溶液,NBG组孕鼠注射相同剂量柠... 详细信息

目的:研究宫内高糖暴露及子代早期高脂饮食与子鼠脂肪胰的关系,探讨脂肪胰病理严重程度与超声杨氏模量的关系。方法:将Wistar孕鼠随机分成妊娠期糖尿病(GDM)组及正常血糖(NBG)组。GDM组孕鼠腹腔注射1%STZ溶液,NBG组孕鼠注射相同剂量柠檬酸盐缓冲液。在注射STZ溶液后第3天、第7天及第12天,取尾静脉测空腹血糖浓度。三次血糖测量只要有一次血糖水平波动于13.92.2 mmol/L,则被认为是GDM模型老鼠。子鼠出生后3周龄,此时均再随机分为正常饮食(ND)组和高脂饮食(HFD)组,成为以下四组:即GDM+HFD、GDM+ND、NBG+HFD和NBG+ND(正常对照组),每组各6只。GDM+ND组、NBG+ND组子鼠予普通饲料,GDM+HFD组、NBG+HFD组子鼠予高脂饲料。子鼠每周称一次体重。9周龄时,各组子鼠行口服葡萄糖耐量(OGTT)试验并记录。取子鼠血清5ml,送检血清空腹血糖、甘油三酯及总胆固醇。应用病理、Western blot技术及超声弹性成像技术检测子鼠胰腺病理变化、SREBP-1和FAS蛋白表达情况及超声杨氏模量值。结果:1.膳食干预后,GDM+HFD组、NBG+HFD组子鼠体质量增长幅度较GDM+ND组、NBG+ND组子鼠低,差异有统计学意义(P宫内高糖暴露与子代早期高脂饮食对子鼠胰腺SREBP-1表达水平无交互作用,P>0.05;宫内高糖暴露主效应为0.46(P宫内高糖暴露及子代早期高脂饮食均可引起子代出现糖脂代谢紊乱。2.宫内高糖暴露及子代早期高脂饮食均可引起子鼠脂肪胰,尤以子代早期高脂饮食为著,且二者之间无交互作用。3.宫内高糖暴露及子代早期高脂饮食致子鼠脂肪胰的机制可能为胰岛素抵抗→上调SREBP-1表达水平→上调FAS表达水平→胰腺脂质异常沉积→脂肪胰。4.超声杨氏模量可反映子鼠脂肪胰的病理严重程度。

关键词：脂肪胰宫内高糖高脂饮食杨氏模量

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宫内高糖导致子代肝脏代谢异常与慢性肝损伤机制的研究

宫内高糖导致子代肝脏代谢异常与慢性肝损伤机制的研究

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作者：董新岩浙江大学

学位级别：硕士

第一部分妊娠期糖尿病小鼠子代模型的建立及肝脏代谢基因表达情况目的:研究宫内高糖环境出生的子一代小鼠糖代谢状况,并探讨其是否与肝脏糖脂代谢异常相关。材料和方法:STZ建立妊娠期糖尿病(gestationaldiabetesmellitus,GDM)小鼠模型,... 详细信息

第一部分妊娠期糖尿病小鼠子代模型的建立及肝脏代谢基因表达情况目的:研究宫内高糖环境出生的子一代小鼠糖代谢状况,并探讨其是否与肝脏糖脂代谢异常相关。材料和方法:STZ建立妊娠期糖尿病(gestationaldiabetesmellitus,GDM)小鼠模型,子一代(GDM-F1)出生后由正常母鼠哺乳至3周后正常喂养。对成年后8周和20周的正常对照组及F1-GDM组进行糖耐量和胰岛素耐量试验;并提取肝脏组织的RNA,Real-Time PCR观察其与糖代谢相关基因表达情况。结果:GDM子一代小鼠在8周和20周与对照组相比均表现出糖耐量异常,并且存在轻微的胰岛素抵抗。GDM-F1肝脏组织糖原合成相关基因表达总体呈下降趋势,脂肪合成相关基因表达下降。结论:宫内高糖环境下出生的子一代小鼠葡萄糖耐量明显异常,肝脏糖代谢与脂肪合成相关基因表达异常,提示宫内高糖导致子代糖脂代谢紊乱可能是通过肝脏引起的。第二部分宫内高糖环境下出生的子一代小鼠肝脏免疫相关受体表达改变和慢性肝损伤目的:研究妊娠期糖尿病子一代小鼠肝脏免疫受体表达情况,从而判断高糖环境是否对子代造成慢性肝损伤。方法:分别取胎鼠,8周和20周子一代雄鼠,HE染色观察其肝脏受损情况。Trizol法提取总RNA,逆转录试剂盒进行逆转录实时定量PCR(Real-TimePCR)检测肝脏免疫受体IL-1β,IL-6r,CD36和CD248等mRNA的表达情况。提取肝脏组织总蛋白后,Western-blot观察20周子代小鼠IL-6r及其调控通路(JAK2/STAT3)蛋白水平表达情况,免疫组化观察IL-6r表达位置及水平。高糖环境培养小鼠肝细胞Hepal-6后Real-Time PCR检测其免疫介质的表达情况。结果:子代雄鼠胚胎时期及成年后肝脏IL-1β,IL-6r和CD248等mRNA水平表达均上调,其中胎鼠时期免疫受体上调较为明显,8周成年时差异略有减少,至20周小鼠免疫受体上调最为明显。Western-blot和免疫组化结果表明20周小鼠肝细胞表面IL-6r蛋白水平表达显著增加,JAK2/STAT3磷酸化水平上调细胞实验证实高糖培养的Hepal-6肝细胞免疫介质的表达明显上调。结论:宫内高糖环境可直接导致子代从胚胎时期开始肝脏免疫相关受体表达上调,揭示其炎症反应高于正常妊娠出生子代,这可能是促使成年至老年慢性肝损伤发病的重要原因。

关键词：宫内高糖子一代肝脏糖脂代谢宫内高糖肝脏免疫受体肝损伤

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妊娠期宫内高糖环境对子代的影响及其遗传效应机制研究

妊娠期宫内高糖环境对子代的影响及其遗传效应机制研究

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2011中国妇产科学术会议暨浙江省计划生育与生殖医学学...

作者：丁国莲王芳芳田申蒋颖张丹盛建中黄荷凤浙江大学医学院附属妇产科医院教育部生殖遗传重点实验室浙江大学医学院病理生理教研室

目的妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)使得胎儿在宫内暴露于母体的糖尿病环境中,已有研究表明,宫内高糖环境是GDM子代糖尿病发病的一个重要决定因素。关于GDM宫内环境引起子代糖尿病发病机制,在人和动物方面均已有研究... 详细信息

目的妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)使得胎儿在宫内暴露于母体的糖尿病环境中,已有研究表明,宫内高糖环境是GDM子代糖尿病发病的一个重要决定因素。关于GDM宫内环境引起子代糖尿病发病机制,在人和动物方面均已有研究,但对分子水平的调控机制缺乏深入探讨,也因此无法进行有效的源头干预。近年来,

关键词：宫内高糖子代亲源性印记基因甲基化

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