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宫内膜干细胞研究进展

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中国病原生物学杂志 2012年第2期7卷 158-160,F0003页

作者：张金龙张舒琪袁立武警浙江省总队医院浙江嘉兴314000 温州医学院环境与公共卫生学院2010届预防医学专业浙江温州325000 杭州易文赛生物技术有限公司浙江杭州311121

本文介绍新型间充质干细胞—宫内膜干细胞的来源和特征,简述宫内膜干细胞分离、培养和体外扩增的方法;阐述宫内膜干细胞体外诱导分化心肌细胞和神经细胞的潜能,展望宫内膜干细胞的临床应用价值。

关键词：宫内膜干细胞诱导分化临床应用综述

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宫内膜干细胞在体外对U87细胞的趋化性研究

宫内膜干细胞在体外对U87细胞的趋化性研究

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作者：张春峰浙江大学

学位级别：硕士

本研究目的为探究MenSC(宫内膜干细胞,Menstrual blood stem cell)在体外对肿瘤细胞U87的趋化性及其内在作用机制。首先,我们通过体外实验探究SDF-1α因子能否促进MenSC对U87细胞的趋化性,结果发现随着加入SDF-1α因子浓度的升高,MenSC... 详细信息

本研究目的为探究MenSC(宫内膜干细胞,Menstrual blood stem cell)在体外对肿瘤细胞U87的趋化性及其内在作用机制。首先,我们通过体外实验探究SDF-1α因子能否促进MenSC对U87细胞的趋化性,结果发现随着加入SDF-1α因子浓度的升高,MenSC的趋化能力对应增强。并且我们通过敲低SDF-1α因子的受体CXCR4与CXCR7的表达,发现沉默表达后的MenSC对U87细胞的趋化性明显下降。由此可知,SDF-1α/CXCR4信号轴在MenSC对U87细胞的趋化过程中起着重要的作用。接着,我们在MenSC中加入100ng/ml的SDF-1α因子进行刺激,分别对加入后不同时间点0min、1min、5min、15min、30min、60min的相关蛋白表达水平进行测定,结果发现p-Jak2和p-STAT3表达水平在加入SDF-1α因子后立即上升,并在5min表达水平达到最高,之后下降保持不变;P-ERK1/2表达水平在加入SDF-1α因子后逐渐升高,在30min表达水平达到最高,之后保持不变;P-AKT表达水平在加入S DF-1α因子后立即上升,并在5min表达水平达到最高,之后下降保持不变。并且我们用抑制剂阻断Jak2/STAT3信号通路ERK信号通路,来观察阻断后是否影响MenSC对U87细胞的迁移能力。结果发现阻断Jak2/STAT3信号通路极显著的抑制了MenSC对U87细胞的迁移能力;阻断ERK信号通路也在一定程度上抑制了MenSC对U87细胞的迁移能力。由此结果可以表明Jak2/STAT3和ERK信号通路在MenSC对U87的趋化性过程中起着重要的作用。最后,我们通过在MenSC中加入100ng/ml的S DF-1α因子进行刺激,分别对加入后不同时间点0min、1min、5min、15min、30min、60min的相关骨架蛋白表达水平进行测定和细胞骨架荧光检测,发现p-FAK蛋白表达水平在加入SDF-1α因子后立即上升,并持续保持不变,p-Paxillin表达水平在加入SDF-1α因子后持续上升,并在15min达到最大水平,之后保持不变;细胞骨架在加入SDF-1α因子后伸展得到增强,并在15min达到最大水平,之后保持不变。相反的,我们在MenSC中加入Jak2/STAT3和ERK抑制剂,来检测相关骨架蛋白表达水平和进行细胞骨架的荧光检测,结果发现Jak2/STAT3和ERK抑制剂都能够抑制p-FAK和p-Paxillin的表达水平,并且能够抑制MenSC骨架的伸展。综上,我们研究证实了SDF-1α结合其受体CXCR4/7进而激活Jak2/STAT3和ERK1/2信号通路,反过来调节FAKs引起肌动蛋白细胞骨架的重塑,从而促进MenSC的迁移。基于以上,我们认为SDF-1α/CXCR4、Jak2/STAT3 和 ERK信号通路在MenSC对U87的趋化性过程中起着重要的作用。

关键词：宫内膜干细胞趋化性基质细胞衍生因子1 Jak2/STAT3 ERK 粘着斑激酶

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宫内膜干细胞的动态示踪及其对急性肝衰竭疗效实验研究

宫内膜干细胞的动态示踪及其对急性肝衰竭疗效实验研究

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作者：岑盼盼浙江大学

学位级别：硕士

背景:近年来,干细胞移植的兴起为肝衰竭提供了新的治疗策略。宫内膜干细胞是一群来源广泛,非侵入性获取,免疫原性低,具有强大自我更新与多向分化潜能的间充质干细胞,有望成为良好的移植细胞源。但目前干细胞治疗机制不明,动态的示踪成... 详细信息

背景:近年来,干细胞移植的兴起为肝衰竭提供了新的治疗策略。宫内膜干细胞是一群来源广泛,非侵入性获取,免疫原性低,具有强大自我更新与多向分化潜能的间充质干细胞,有望成为良好的移植细胞源。但目前干细胞治疗机制不明,动态的示踪成像有利于我们更好地了解干细胞移植后在体内的生物学行为,对于优化干细胞治疗至关重要。目的:通过建立大动物的急性肝衰竭模型,评价宫内膜干细胞经门静脉移植治疗急性肝衰竭的疗效。另外通过PKH26染料标记宫内膜干细胞,动态示踪其体内生物学分布。方法:利用PKH26染料体外标记宫内膜干细胞,并评估干细胞标记对细胞形态、增殖活力、中胚层分化潜能的影响。选取36只体重8-12kg雄性巴马香猪,通过颈静脉注射D-氨基半乳糖(***/kg)建立急性肝衰竭模型。将实验动物随机分为2组,治疗组在D-氨基半乳糖注射后立即接受PKH26标记的宫内膜干细胞经门静脉移植治疗(2.5×106/kg),对照组接受假手术治疗。比较两组动物的临床表现,不同时间点的肝功能、凝血功能指标,生存时间,以及肝脏组织病理。另外,通过活体成像系统对不同时间点治疗组动物离体肝脏、肺、脾脏进行动态成像。结果:PKH26染料标记对宫内膜干细胞的细胞形态,增殖活力,及成脂、成骨分化潜能无影响。治疗组与对照组实验动物的平均生存时间分别为75.75±5.11小时和53.75±2.37小时,Kaplan-Meier生存分析提示宫内膜干细胞移植治疗能显著延长急性肝衰竭动物的生存时间。实验动物在急性肝衰竭诱导后24-36小时肝功能恶化最为迅速。宫内膜干细胞治疗能明显缩短急性肝衰竭动物的凝血酶原时间,改善肝功能指标,减轻肝脏炎症坏死。另外,利用活体成像仪进行动态示踪发现,大部分荧光信号来自于肝脏,且主要分布于肝血窦与小叶实质内。肝脏内感兴趣区总光子平均辐射效率在移植后12小时为1.55×1010±2.97×108 p/s,24小时明显降低(7.74×109±1.23×108p/s),但 36 小时后又显著增高(3.65×1010±1.38×108p/s),48小时后衰减。结论:宫内膜干细胞移植治疗能够显著延长急性肝衰竭动物的生存时间,并证实其在体内具有定向迁移能力。

关键词：宫内膜干细胞急性肝衰竭示踪

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宫内膜干细胞治疗失代偿期肝硬化疗效观察

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武警医学 2014年第6期25卷 543-546页

作者：张金龙项春生刘芙蓉黄志刚莫国生揭中华陈锦阳武警浙江总队医院嘉兴314000 浙江大学医学院附属第一医院传染科杭州310003 杭州易文赛生物技术有限公司 311121

目的探讨宫内膜干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效。方法选择肝硬化失代偿期患者23例,宫内膜干细胞经静脉输注方法移植入肝脏,分别在治疗后第1周、2周、1个月、3个月、6个月、12个月复查肝脏功能(TBIL、ALT、AST)、甲胎蛋白(AFP)... 详细信息

目的探讨宫内膜干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效。方法选择肝硬化失代偿期患者23例,宫内膜干细胞经静脉输注方法移植入肝脏,分别在治疗后第1周、2周、1个月、3个月、6个月、12个月复查肝脏功能(TBIL、ALT、AST)、甲胎蛋白(AFP)、胆碱酯酶(CHE)、肝纤维化等实验室指标,分析临床症状及不良反应情况。结果治疗后23例临床症状及体征明显改善。移植治疗后,在各观察点复查肝功能TBIL、ALT、AST、AFP较治疗前均降低,但差异无统计学意义;ALB(34.8 g/L)和CHE(4386 U/L)较治疗前显著升高,差异有统计学意义(P宫内膜干细胞移植治疗可明显改善肝硬化失代偿期患者肝脏功能及临床症状,短期结果安全可靠,不良反应少,值得临床进一步研究。

关键词：宫内膜干细胞移植肝硬化

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宫内膜干细胞与跟腱细胞在低氧共培养研究宫内膜干细胞的体外分化研究

宫内膜干细胞与跟腱细胞在低氧共培养研究宫内膜干细胞的体外分化...

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2014年浙江省骨科学学术年会

作者：郑亦静洪建军温州医科大学附属第二医院

目的:通过人宫内膜干细胞与人跟腱细胞在低氧环境下共培养及检测宫内膜干细胞的各项特异性指标的表达量,研究共培养以及低氧对人宫内膜干细胞向跟腱细胞定向分化的影响。方法:在无菌条件下获取三例跟腱修复术患者的跟腱标本,去除疤痕组... 详细信息

目的:通过人宫内膜干细胞与人跟腱细胞在低氧环境下共培养及检测宫内膜干细胞的各项特异性指标的表达量,研究共培养以及低氧对人宫内膜干细胞向跟腱细胞定向分化的影响。方法:在无菌条件下获取三例跟腱修复术患者的跟腱标本,去除疤痕组织及腱、鞘膜组织,通过原代细胞培养得到跟腱细胞。利用带有插入层的Transwell 6孔培养板进行细胞非接触式共培养,细胞比例为1:1,将跟腱细胞置于上层,宫内膜干细胞置于下层。并将共培养系统分别置于常氧(20%O2)、低氧(2%O2)环境下进行培养,宫内膜干细胞单独培养作为对照组。每组各自培养1、2、3周后,提取宫内膜干细胞总RNA,利用Real-Time PCR检测其Ⅰ、Ⅲ型胶原、Thrombospondin 4,TENC,SCX基因表达的改变;利用阿新蓝染色法检测蛋白多糖表达量的改变;免疫组化检测Thrombospondin 4的表达;并用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测Ⅰ型胶原与Thrombospondin 4蛋白的表达量。结果:1.共培养后,成功分离提取宫内膜干细胞;Real-Time PCR检测结果显示常氧组与低氧组宫内膜干细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原、Thrombospondin 4,TENC,SCX基因相对表达较对照组显著增加;差异有统计学意义(P细胞非接触式共培养能促进人宫内膜干细胞被跟腱细胞诱导分化为类跟腱细胞,低氧组能在一定程度上促进宫内膜干细胞的定向分化。干细胞的定向分化即细胞移植有可能成为治疗跟腱病变的一种有效的治疗方式。

关键词：共培养分化低氧宫内膜干细胞跟腱细胞

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官内膜干细胞的成肝分化及其对肝损伤修复作用的研究

官内膜干细胞的成肝分化及其对肝损伤修复作用的研究

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作者：林建浙江大学

学位级别：硕士

本研究目的为探讨宫内膜干细胞的体外成肝诱导分化及其在肝脏损伤中发挥的修复作用。首先,我们从招募的志愿者经血中分离出单个核细胞进行体外传代培养并对获得的细胞进行间充质干细胞鉴定。宫内膜干细胞不具有致瘤性,可以呈单层贴壁生... 详细信息

本研究目的为探讨宫内膜干细胞的体外成肝诱导分化及其在肝脏损伤中发挥的修复作用。首先,我们从招募的志愿者经血中分离出单个核细胞进行体外传代培养并对获得的细胞进行间充质干细胞鉴定。宫内膜干细胞不具有致瘤性,可以呈单层贴壁生长,可以24小时倍增一次,为典型的棒状或长梭状的成纤维细胞样细胞。流式细胞术分析这类细胞均表达CD44,CD73,CD90,和CD29,而不表达CD117,CD34, CD45,和HLA-DR。宫内膜干细胞在体外可以被诱导分化为成骨细胞和成脂细胞。其次,我们研究了宫内膜干细胞的体外成肝诱导分化能力。宫内膜干细胞在与HGF、FGF4、OSM以及DEX等共培养后,逐渐向上皮细胞样细胞形态变化。诱导分化后的细胞能够表达ALB和AFP蛋白,以及基因ALB、AFP、CK18、CK19、CYP1A1和CYP3A4等。表达谱芯片分析可见分化后的细胞能表达33个肝脏相关基因,这些基因在原代肝脏细胞中表达,而宫内膜干细胞中则不表达。另外,诱导分化后细胞功能验证显示,其具有糖原合成、ICG排泌和尿素合成功能等。这些数据可以初步证实,所诱导的细胞是具有肝细胞表型且能发挥部分肝脏细胞功能的较成熟的细胞。最后,为了验证移植细胞能否参与肝损伤修复过程,小鼠肝脏部分切除后,分别移植宫内膜干细胞和诱导分化后细胞,移植后10天,移植分化组小鼠肝功能较移植宫内膜干细胞组恢复明显,具有显著性差异。移植8周后,在小鼠肝脏中可以检测到移植细胞的存在,并且移植宫内膜干细胞在受体肝脏内发生分化。Fah-/小鼠作为移植受体,移植细胞后8周,发现诱导分化组小鼠肝脏可见大量Fah阳性细胞,而移植宫内膜干细胞组则仅有少量散在分布的Fah阳性细胞存在。这些数据说明,分化后细胞可以部分重建小鼠肝脏,未分化细胞可以发生分化但整体水平较低。结果显示,移植细胞可以随血流迁移至小鼠肝脏,并在小鼠肝脏内达到一定程度的重建。综上所述,宫内膜干细胞及其来源的细胞在肝脏疾病治疗中可以发挥一定作用。

关键词：宫内膜干细胞成肝分化肝损伤

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