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静脉注射脂质体包裹的M蛋白基因治疗小鼠实验性肺转移肿瘤的实验研究

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静脉注射脂质体包裹的M蛋白基因治疗小鼠实验性肺转移肿瘤的实验...

作者：刁鹏四川大学

学位级别：硕士

背景和目的：水泡性口炎病毒(VSV)基质(M)蛋白是VSV病毒颗粒的结构蛋白，可以直接诱导肿瘤细胞凋亡。本实验室初步证实转染M蛋白基因具有诱导肿瘤细胞凋亡抑制肿瘤生长的作用，可以作为肿瘤基因治疗的候选治疗基因。为此，我们利用实验... 详细信息

背景和目的：水泡性口炎病毒(VSV)基质(M)蛋白是VSV病毒颗粒的结构蛋白，可以直接诱导肿瘤细胞凋亡。本实验室初步证实转染M蛋白基因具有诱导肿瘤细胞凋亡抑制肿瘤生长的作用，可以作为肿瘤基因治疗的候选治疗基因。为此，我们利用实验性肺转移肿瘤动物模型，观察静脉注射脂质体包裹的M蛋白基因抑制实验性肺转移肿瘤结节形成的作用。方法：用DOTAP：Chol脂质体包裹M蛋白基因和质粒空载体制备脂质体DNA复合物(Lip-MP和Lip—null)，以BALB／c小鼠建立CT26结肠癌实验性肺转移模型，将小鼠随机分为生理盐水(Saline)组、脂质体包裹空载体(Lip-null)组和脂质体包裹M蛋白基因(Lip-MP)组，在接种肿瘤细胞后第3天分别给予200ul Saline、200ul Lip-null(50ug DNA)和200ul Lip-MP(50ug DNA)等相应的处理，每2天1次，共6次。接种肿瘤细胞15天后每组随机处死5只小鼠，全肺称重，计数肺表面肿瘤转移结节数;其余10只观察小鼠生存期。HE染色评估全肺病理改变。TUNEL染色检测肿瘤细胞的凋亡情况。为评价Lip-MP复合物对小鼠肝功能的影响，以正常昆明鼠为研究对象，尾静脉给予上述单剂量的不同处理，48小时后采集血清检测转氨酶ALT、AST水平。

关键词：水泡性口炎病毒基质蛋白阳离子脂质体凋亡实验性肺转移

诱导小鼠肺泡巨噬细胞产生一氧化氮抑制肿瘤实验性肺转移

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中国肿瘤生物治疗杂志 1996年第4期3卷 264-267页

作者：任园张友会中国医学科学院

本文报道卡介苗(BCG)致敏小鼠雾化吸入基因重组白细胞介素-2(rIL-2)抑制小鼠乳腺癌实验性肺转移。结果显示,小鼠经治疗后肺表面转移瘤结节数显著减少,肺泡灌洗液一氧化氮(NO)含量显著增高。单独雾化吸入rIL-2对部分种瘤小鼠也有一定的... 详细信息

本文报道卡介苗(BCG)致敏小鼠雾化吸入基因重组白细胞介素-2(rIL-2)抑制小鼠乳腺癌实验性肺转移。结果显示,小鼠经治疗后肺表面转移瘤结节数显著减少,肺泡灌洗液一氧化氮(NO)含量显著增高。单独雾化吸入rIL-2对部分种瘤小鼠也有一定的抑瘤作用。用NO合成阻断剂(N-单甲基-L-精氨酸,NMA)能几乎完全阻断rIL-2的抑瘤作用。结果表明,雾化吸入rlL-2加BCG处理是治疗小鼠乳腺癌肺转移的一种有效方法,其机制主要是通过诱导活化肺泡巨噬细胞(Mφ)产生NO发挥抑瘤作用。

关键词：诱导小鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮肿瘤实验性肺转移

H_(22)小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性

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浙江中医药大学学报 2010年第2期34卷 169-171页

作者：吕祥李柏凌昌全第二军医大学附属长海医院上海200433

目的:探讨H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性。方法:昆明种小鼠尾静脉注射不同数量(1×107、7.5×106、5×106、2.5×106、1×106)H22细胞制作实验性肺转移模型,肉眼及镜下观察肺内肿瘤的有无、大小、转移程度及分布情况,血... 详细信息

目的:探讨H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性。方法:昆明种小鼠尾静脉注射不同数量(1×107、7.5×106、5×106、2.5×106、1×106)H22细胞制作实验性肺转移模型,肉眼及镜下观察肺内肿瘤的有无、大小、转移程度及分布情况,血清ICAM-1、IL-2蛋白的表达情况。结果:接种1×107细胞浓度组小鼠肺转移率、恶化程度及血清中ICAM-1蛋白表达的量均高于其他接种组(P转移。结论:小鼠实验性肺转移的发生率、转移程度及血清中ICAM-1、IL-2蛋白的表达量与细胞接种数变化密切相关。

关键词：肝癌 ICAM-1 IL-2 实验性肺转移

抗明胶酶单链抗体和力达霉素融合蛋白抗纤维肉瘤HT-1080增殖和转移的实验研究

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中国药学杂志 2013年第11期48卷 872-878页

作者：钟根深郭晓芳张胜华甄永苏新乡医学院第一附属医院河南新乡453003 新乡医学院基础医学院河南新乡453003 中国医学科学院-北京协和医学院医药生物技术研究室北京100050

目的观察抗明胶酶dFv-LDP以及其强化融合蛋白dFv-LDP-AE对人纤维肉瘤HT-1080的生长抑制作用。方法采用蛋白质印迹法分析不同细胞系中明胶酶表达情况,四甲基偶氮唑蓝法分析融合蛋白dFv-LDP以及强化融合蛋白dFv-LDP-AE的对HT-1080的生长... 详细信息

目的观察抗明胶酶dFv-LDP以及其强化融合蛋白dFv-LDP-AE对人纤维肉瘤HT-1080的生长抑制作用。方法采用蛋白质印迹法分析不同细胞系中明胶酶表达情况,四甲基偶氮唑蓝法分析融合蛋白dFv-LDP以及强化融合蛋白dFv-LDP-AE的对HT-1080的生长抑制作用;酶联免疫吸附法以及免疫荧光分析融合蛋白dFv-LDP和HT-1080的结合能力;流式细胞术分析两者单独或者联合对HT-1080的周期阻滞;评价融合蛋白dFv-LDP和dFv-LDP-AE单独和联合体内抗HT-1080Luc肺转移的活性。结果 HT-1080的明胶酶表达丰度较之其他类型肿瘤明显,酶联免疫吸附法和免疫荧光分析表明融合蛋白dFv-LDP与HT-1080细胞有着良好的亲和力;四甲基偶氮唑蓝法结果显示dFv-LDP-AE对HT-1080体外增殖有着强烈的杀伤作用;FACS表明融合蛋白dFv-LDP和dFv-LDP-AE的联合对细胞周期的阻滞没有明显的增效作用;体内实验性肺转移实验结果表明,融合蛋白dFv-LDP(10 ***-1)组肺部转移灶数目为对照组的55.8%(P转移灶数目分别为对照组的41.4%(与dFv-LDP 10 ***-1组相比,P转移灶数目为对照组的20.3%(与dFv-LDP-AE 0.4 ***-1组相比,P转移的效果。结论融合蛋白dFv-LDP联合强化融合蛋白dFv-LDP-AE对裸鼠移植HT-1080实验性肺转移的抑制效果具有增效作用。

关键词：力达霉素明胶酶纤维肉瘤实验性肺转移

海参硫酸软骨素抑制小鼠黑色素瘤肺转移作用的研究

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中国药理学通报 2011年第5期27卷 623-628页

作者：李辉王静凤张珣柳东薛长湖中国海洋大学食品科学与工程学院山东青岛266003

目的海参硫酸软骨素(sea cucumber chondroitin sul-fate,SC-CHS)由美国肉参中分离所得,研究其结构及对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞实验性肺转移模型的抑制作用。方法采用MTT法检测了SC-CHS对B16-F10细胞生长的影响;细胞黏附实验研究了SC-... 详细信息

目的海参硫酸软骨素(sea cucumber chondroitin sul-fate,SC-CHS)由美国肉参中分离所得,研究其结构及对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞实验性肺转移模型的抑制作用。方法采用MTT法检测了SC-CHS对B16-F10细胞生长的影响;细胞黏附实验研究了SC-CHS对B16-F10细胞黏附能力的影响;体内实验,预先腹腔给药5 d后,建立实验性肺转移模型,继续腹腔注射SC-CHS 20d后,检测小鼠肺转移灶形成,血清中唾液酸的含量、γ-谷氨酰转肽酶活力和肺组织中羟脯氨酸、氨基己糖、糖醛酸的含量。结果实验结果显示SC-CHS体外对B16-F10细胞的生长没有影响,但可以明显降低B16-F10细胞同基质和血管内皮细胞的黏附能力(P肺转移灶数量明显减少(P转移抑制率为62.66%,血清唾液酸含量和γ-谷氨酰转肽酶活力明显降低(P转移和生长,其机制可能与降低肿瘤细胞与基质的黏附能力和细胞的转移能力有关。

关键词：海参硫酸软骨素实验性肺转移黏附唾液酸透明质酸 γ-谷氨酰转肽酶糖醛酸

力达霉素抑制人纤维肉瘤肺转移的裸鼠活体成像观察

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药学学报 2011年第1期46卷 45-49页

作者：张胜华钟根深何红伟程昕甄永苏中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 新乡医学院第一附属医院神经病学研究所河南新乡453003 中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

观察力达霉素(LDM)、LDM与甲氨蝶呤(MTX)联合用药对人纤维肉瘤HT-1080LUC实验性肺转移的抑制作用。构建稳定表达荧光素酶的HT-1080细胞株并扩增培养,检测HT-1080LUC细胞的荧光素酶的表达。建立裸鼠人纤维肉瘤HT-1080LUC实验性肺转移模型... 详细信息

观察力达霉素(LDM)、LDM与甲氨蝶呤(MTX)联合用药对人纤维肉瘤HT-1080LUC实验性肺转移的抑制作用。构建稳定表达荧光素酶的HT-1080细胞株并扩增培养,检测HT-1080LUC细胞的荧光素酶的表达。建立裸鼠人纤维肉瘤HT-1080LUC实验性肺转移模型,并采用活体动物成像系统监测肿瘤的生长情况,观察LDM和MTX的体内抗肺转移瘤活性。结果表明,HT-1080LUC细胞荧光光子量与细胞数呈线性相关,最小可检测的细胞数量为100个/孔。活体成像结果显示,治疗组裸鼠的肺部荧光强度较对照组明显减弱。单独给予LDM 0.025 ***-1、LDM 0.05 ***-1或MTX 0.5 ***-1的肺转移抑制率分别为53.9%、75.9%和70.2%;LDM 0.025 ***-1与MTX 0.5 ***-1联合应用的肺转移抑制率为88.7%,两药相互作用指数CDI=0.82。研究表明,LDM对人纤维肉瘤肺转移有明显抑制作用,与MTX联合用药对肺转移瘤的疗效明显优于单独给药。

关键词：力达霉素甲氨蝶呤人纤维肉瘤HT-1080LUC细胞实验性肺转移肿瘤联合化疗

多西他赛对小鼠肺转移黑色素瘤抑制作用的研究

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标记免疫分析与临床 2015年第6期22卷 555-558页

作者：胡华武汉市161医院药械科湖北武汉430012

目的探讨多西他赛(多西紫杉醇)对小鼠B16-F10黑色素瘤肺转移的抑制作用。方法 MTT法检测多西他赛对小鼠B16-F10细胞生长能力的影响;细胞粘附性实验研究多西他赛对小鼠B16-F10细胞粘附能力的影响;体内实验采用C58BL/6小鼠尾静脉注射B16... 详细信息

目的探讨多西他赛(多西紫杉醇)对小鼠B16-F10黑色素瘤肺转移的抑制作用。方法 MTT法检测多西他赛对小鼠B16-F10细胞生长能力的影响;细胞粘附性实验研究多西他赛对小鼠B16-F10细胞粘附能力的影响;体内实验采用C58BL/6小鼠尾静脉注射B16细胞建立实验性肺转移模型,观察腹腔注射多西他赛对小鼠肺组织肿瘤肺转移结节的影响。结果 20μg/m L多西他赛对小鼠B16-F10细胞的体外生长有一定的抑制作用,并且能够显著降低B16-F10细胞同基质的粘附能力(P肺转移癌小鼠经腹腔注射5μg/m L、10μg/m L、20μg/m L三个剂量的多西他赛对肿瘤的抑制率分别为42.70%、15.47%和5.45%,高剂量组(20μg/m L)显示对肺转移黑色素瘤有明显的抑制作用(P肺转移黑色素瘤,其机制可能与其对B16-F10细胞的粘附能力和生长能力的抑制作用有关。

关键词：多西他赛实验性肺转移黑色素瘤 MTT法细胞粘附性

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冬虫夏草对小鼠黑素瘤细胞肺转移的影响

国际中医中药杂志 2007年第2期29卷 127-127页

作者：王琳[日] 贺玉琢(摘)

以小鼠黑素瘤细胞肺转移模型，探讨了冬虫夏草热水提取物（HW）的抑制作用。材料及方法：①材料：培养的冬虫夏草（ Cordyceps sinensis ）菌丝体粉末以90-95℃热水提取3h，过滤、减压浓缩至约1／3量，再以90-95℃杀菌30min，-38℃冷冻... 详细信息

以小鼠黑素瘤细胞肺转移模型，探讨了冬虫夏草热水提取物（HW）的抑制作用。材料及方法：①材料：培养的冬虫夏草（ Cordyceps sinensis ）菌丝体粉末以90-95℃热水提取3h，过滤、减压浓缩至约1／3量，再以90-95℃杀菌30min，-38℃冷冻干燥得提取物。②实验动物：6周龄C57BL／6雌性小鼠，在恒温恒湿环境下预饲养1周后用于试验。③实验性肺转移抑制试验：将小鼠分成4组，其中3组连续28d口饲溶解于蒸馏水的HWE（分别为100、250、750mg／kg），对照组口饲蒸馏水。肿瘤细胞使用B16-F10黑素瘤细胞株。实验开始后第15日经小鼠尾静脉注射细胞悬液（1×10^5细胞，只），第29日解剖取肺，固定后计数肺表面转移结节数。④自发性肺转移抑制试验：肺高转移性B16-BL6黑素瘤细胞用PBS配制成1×10^7细胞／ml，每只小鼠足跖部皮下注射50μl（5×10^5细胞）。移植后第15日，将小鼠分成4组，其中3组分别连日口饲上述浓度的HWE，对照组口饲蒸馏水。给药后第8日，确认肿瘤生长直径约为1cm后，乙醚麻醉将小鼠右后肢从根部切断，切断部位消毒、缝合。其后2周内继续分别口饲HWE及蒸馏水。移植后5周试验结束，解剖取肺计数肺表面转移结节数。⑤在NK活性抑制状态下，冬虫夏草对实验性肺转移的影响：受试组预饲HWE250mg／kg2周（对照组口饲蒸馏水），抗体给予组（包括口饲蒸馏水的对照组与HWE组）在试验开始后第13日尾静脉注射抗asialo GM1抗体0．3ml。翌日4组均经尾静脉注射B16-F10黑素瘤细胞悬液（1×10^5细胞/只）。继续给药2周，第29日解剖取肺，固定过夜，计数肺表面转移结节数。⑥在巨噬细胞活性抑制状态下，冬虫夏草对实验性肺转移的影响：HWE组小鼠预饲250mg／kg2周，第13日小鼠尾静脉注射2．氯腺苷10μl（2-氯腺苷50μg/只，分组及检测方法同⑤）。

关键词：实验性肺转移鼠黑素瘤细胞冬虫夏草 B16-F10 尾静脉注射热水提取物雌性小鼠 C57BL/6