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手足口病病原体实时荧光rt—pcr反应体系的建立与临床应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第3期29卷 276-278页

作者：张永乐潘克女徐岱梁伟峰娄国强杭州市第六人民医院临床实验室 310014 杭州市第六人民医院中西医结合科 310014 杭州市第一人民医院检验科

目的建立一种快速、准确、特异性高的方法检测手足口病病原体。方法根据引起手足口病常见致病原肠道病毒71（EV71）、柯萨奇病毒A16（CA16）及肠道病毒（EV），设计相应的引物、探针对35例临床诊断的手足口病患儿及20例正常健康婴儿的... 详细信息

目的建立一种快速、准确、特异性高的方法检测手足口病病原体。方法根据引起手足口病常见致病原肠道病毒71（EV71）、柯萨奇病毒A16（CA16）及肠道病毒（EV），设计相应的引物、探针对35例临床诊断的手足口病患儿及20例正常健康婴儿的粪便进行EV、EV71、CA16三种病原体实时荧光rt-pcr检测，同时对55分标本进行EV71病毒培养分离。结果35例临床诊断手足口病患儿粪便中EV全部阳性，EV71阳性25例，CA16阳性8例，其中3例为EV71、CA16同时阳性，与临床诊断符合率为85．71％，20例健康体检婴儿粪便中EV病毒5例阳性，EV71、CA16均阴性。结论荧光rt-pcr对手足口病病原体检测准确性高、特异性强，具有快速、廉价等特点，适合于手足口病的早期诊断。

关键词：手足口病肠道病毒柯萨奇病毒A16 实时荧光rt—pcr

实时荧光rt—pcr（定量）法对不同手足口病样本病原体检出率比较

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检验医学与临床 2013年第A01期10卷 130-132页

作者：雷务年卓训妮广西壮族自治区钦州市钦北区疾病预防控制中心检验科广西壮族自治区钦州市疾病预防控制中心检验科 535000

目的了解和比较不同采集样本对手足口病病原体的检出率，优化样本采集方案和提高检出率，为预防和控制手足口病提供准确的实验室依据。方法采用实时荧光rtpcr（定量）法对钦州市2011年～2012年采集的不同样本进行检测，并对结果进行统... 详细信息

目的了解和比较不同采集样本对手足口病病原体的检出率，优化样本采集方案和提高检出率，为预防和控制手足口病提供准确的实验室依据。方法采用实时荧光rtpcr（定量）法对钦州市2011年～2012年采集的不同样本进行检测，并对结果进行统计分析。结果以疱疹液的检出率为98．46％64／65）最高，大便96．81％（91／94）、肛拭子94．74％（432／456）和咽拭子88．20％（142／161）检出率分列2、3、4位。而以脑脊液以8．00％（2／25）检出率最低。结论应采集患者疱疹液或大便（肛拭子），以提高手足口病的检出率。

关键词：实时荧光rt—pcr 手足口病检出率

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒实时荧光rt—pcr检测方法的建立

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国际病毒学杂志 2011年第4期18卷 111-115页

作者：吕燕宁王全意窦相峰王小梅庞星火北京市疾病预防控制中心传染病地方病控制所 100013

目的建立新型发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的TaqMan探针实时荧光rt—pcr检测方法并进行评估，为发热伴血小板减少综合征监测中新型布尼亚病毒感染的排查提供实验室检测依据。方法利用新型布尼亚病毒S片段基因的特异性序列设计引物... 详细信息

目的建立新型发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的TaqMan探针实时荧光rt—pcr检测方法并进行评估，为发热伴血小板减少综合征监测中新型布尼亚病毒感染的排查提供实验室检测依据。方法利用新型布尼亚病毒S片段基因的特异性序列设计引物和探针，探针5’端标记FAM，3’端标记TAMRA，优化反应体系与反应条件，并对不同浓度含有目的基因的质粒以及在发热伴血小板减少综合征监测中收集的32份样本和流行性出血热病毒阳性样本进行核酸检测，验证该方法的特异性、敏感性和重复性。结果该方法所检测的32份可疑病例的临床样本中，3份为阳性，与国家疾病预防控制中心下发的试剂以及商品化试剂盒的检测结果一致；流行性出血热病毒检测结果为阴性。对目的基因的检测灵敏度达4×102拷贝／ml；重复性实验中，变异系数为0．125％-0．28％。全部检测过程从样本的核酸提取至检测完成仅需2．5h左右。结论本文建立的TaqMan探针实时荧光***法是一种检测新型发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的特异、快速、敏感的方法。该方法的建立将有益于今后开展发热伴血小板减少综合征监测以及应急临床样本中新型布尼亚病毒感染的排查和快速检测。

关键词：布尼亚病毒发热伴血小板减少综合征实时荧光rt—pcr

水泡性口炎病毒血清型特异LUX实时荧光rt-pcr检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2008年第4期39卷 522-528页

作者：陈茹刘中勇曾碧健曹永长陈俊伟赵吟林志雄毕英佐广东出入境检验检疫局广州510623 华南农业大学动物科学学院广州510642

采用LUX荧光核酸扩增技术原理,以水泡性口炎病毒(VSV)NJ、IND型NS基因为模板分别设计并合成单标记LUX荧光引物,建立血清型特异的VSV荧光rt-pcr检测方法。试验表明,两种型特异的LUX荧光rt-pcr能分别特异地鉴定VSV血清型,对口蹄疫、猪水... 详细信息

采用LUX荧光核酸扩增技术原理,以水泡性口炎病毒(VSV)NJ、IND型NS基因为模板分别设计并合成单标记LUX荧光引物,建立血清型特异的VSV荧光rt-pcr检测方法。试验表明,两种型特异的LUX荧光rt-pcr能分别特异地鉴定VSV血清型,对口蹄疫、猪水泡病等病毒以及对照细胞、健康动物组织RNA样品的检测结果均为阴性。对比检测试验表明,LUX荧光rt-pcr的检测敏感性比常规rt-pcr提高达10倍以上,对VSV细胞增殖病毒液的检测灵敏度可达1 TCID50。对人工感染豚鼠样品以及临床样品的检测试验证实,该LUX荧光rt-pcr可有效检测到人工感染动物组织以及进口牛临床样品中的水泡性口炎病毒,并能鉴定感染病毒血清型。所报道的检测方法,包括样品核酸提取、LUX荧光rt-pcr以及熔解曲线分析,可在3 h内完成。

关键词：水泡性口炎病毒实时荧光rt—pcr LUX荧光引物

实时荧光rt-pcr检测香蕉苞片花叶病毒方法的建立

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植物保护学报 2009年第5期36卷 417-420页

作者：闻伟刚谭钟张颖宁波出入境检验检疫局宁波315012

香蕉苞片花叶病毒(Banana bract mosaic virus,BBrMV)是我国对外检疫性有害生物。为防止该有害生物传入我国,根据BBrMV不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计特异性引物与TaqMan荧光探针,建立了BBrMV的实时荧光rt-PC... 详细信息

香蕉苞片花叶病毒(Banana bract mosaic virus,BBrMV)是我国对外检疫性有害生物。为防止该有害生物传入我国,根据BBrMV不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计特异性引物与TaqMan荧光探针,建立了BBrMV的实时荧光rt-pcr检测方法。结果表明,该方法检测BBrMV的2个不同来源毒株,均能够得到典型扩增曲线,Ct值分别为26.65和27.52;而马铃薯Y病毒、李属坏死环斑病毒以及桃丛簇花叶病毒等其它毒株则没有典型扩增曲线,也无Ct值。灵敏度比较发现,该方法比普通rt-pcr检测方法的灵敏度提高1000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对BBrMV的检测。

关键词：香蕉苞片花叶病毒 TaqMan探针实时荧光rt—pcr 检测

运用实时荧光rt-pcr技术检测柑橘碎叶病毒

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果树学报 2009年第5期26卷 748-751页

作者：刘科宏周常勇宋震周彦李中安唐科志西南大学柑橘研究所重庆400712

柑橘碎叶病是由橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)引起的一种重要的柑橘病害,为更快、更准确的检测CTLV,合成了一对特异性引物ASG-Pf和ASG-Pr,建立了运用SYBRGreenI荧光染料法检测CTLV的实时荧光rt-pcr体系,并对该体系的特异... 详细信息

柑橘碎叶病是由橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)引起的一种重要的柑橘病害,为更快、更准确的检测CTLV,合成了一对特异性引物ASG-Pf和ASG-Pr,建立了运用SYBRGreenI荧光染料法检测CTLV的实时荧光rt-pcr体系,并对该体系的特异性、灵敏性和适用性进行了测试。结果表明,该检测体系能特异的检出CTLV,对测试的衰退病毒、温州蜜柑萎缩病毒和鳞皮病毒都不能检出;灵敏度比常规pcr高100倍;适用性广,可检测出多种柑橘类植物中的CTLV。实时荧光rt-pcr检测整个过程完全闭管,无需pcr后处理,且SYBR GreenI荧光染料成本较低,适用于检测柑橘体内含量较低的CTLV病毒。

关键词：柑橘碎叶病毒(CTLV) 实时荧光rt—pcr 检测

百合无症病毒实时荧光rt-pcr检测方法的建立

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浙江农业学报 2014年第1期26卷 127-130页

作者：余澍琼陈先锋张吉红于翠张慧丽闻伟刚宁波出入境检验检疫局浙江宁波315012 上海出入境检验检疫局上海200331

百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)是侵染百合科植物的主要病毒之一。根据该病毒不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计特异性引物与荧光探针,建立了LSV的实时荧光rtpcr检测方法。利用该方法检测LSV的2个阳... 详细信息

百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)是侵染百合科植物的主要病毒之一。根据该病毒不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计特异性引物与荧光探针,建立了LSV的实时荧光rtpcr检测方法。利用该方法检测LSV的2个阳性样品,均能够得到典型扩增曲线,而在百合斑驳病毒、烟草环斑病毒、番茄环斑病毒等其他病毒阳性样品中没有典型的扩增曲线,表明了该方法的特异性。与普通rtpcr法相比,此方法灵敏度提高10倍。应用该方法,2012年6月至今,宁波出入境检验检疫局从荷兰进境的67批百合种球样品中检出53批百合无症病毒阳性,检出率为93%。

关键词：百合无症病毒实时荧光rt—pcr 百合科

实时荧光rt-pcr方法检测黄瓜绿斑驳花叶病毒

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植物检疫 2009年第4期23卷 29-31页

作者：邓丛良黄峰吕玉峰张凯郭育林赵焕生北京出入境检验检疫局植物检疫中心北京100026 厦门出入境检验检疫局北京金纳信生物科技有限公司

根据黄瓜绿斑驳花叶病毒不同分离物外壳蛋白基因(CP)的保守序列,设计合成引物和TaqMan荧光探针,建立了黄瓜绿斑驳花叶病毒的实时荧光rt-pcr(Real time rt-pcr)检测方法。该方法利用TaqMan探针水解产生的荧光信号实时监测目标基因的扩增... 详细信息

根据黄瓜绿斑驳花叶病毒不同分离物外壳蛋白基因(CP)的保守序列,设计合成引物和TaqMan荧光探针,建立了黄瓜绿斑驳花叶病毒的实时荧光rt-pcr(Real time rt-pcr)检测方法。该方法利用TaqMan探针水解产生的荧光信号实时监测目标基因的扩增,实现pcr扩增与检测同步进行。结果表明,实时荧光rt-pcr方法检测灵敏度比普通rt-pcr高约10倍,并且具有快速、简便、准确的优点,适合于CGMMV的快速、高效检测。

关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒实时荧光rt—pcr 检测

实时荧光rt-pcr检测新型布尼亚病毒核酸方法的研究与应用

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中国卫生检验杂志 2014年第5期24卷 682-684页

作者：虞吉寅王忠发任宜毛和英岱山县疾病预防控制中心浙江岱山316200

目的研究实时荧光定量反转录-聚合酶链(Real-timert-pcr)检测新型布尼亚病毒的方法,用于新布尼亚病毒的核酸检测,为发热伴血小板减少综合征(SFTS)的早期诊断提供科学依据。方法以新布尼亚病毒L基因为靶基因设计引物以及TaqMan探针,建立R... 详细信息

目的研究实时荧光定量反转录-聚合酶链(Real-timert-pcr)检测新型布尼亚病毒的方法,用于新布尼亚病毒的核酸检测,为发热伴血小板减少综合征(SFTS)的早期诊断提供科学依据。方法以新布尼亚病毒L基因为靶基因设计引物以及TaqMan探针,建立Real-timert-pcr方法,并对岱山县72份临床疑似病人血清、血浆、30份正常人群血清进行了检测鉴定,并验证了方法的特异性、敏感性和重复性。结果建立的Real-time rt-pcr具有良好的特异性和敏感性,CVrt-pcr方法具有较高的特异性、敏感性和重复性,可用于新布尼亚病毒核酸的快速检测、在发热伴血小板减少综合征的早期诊断上具有重要意义。

关键词：实时荧光rt—pcr 新型布尼亚病毒核酸检测