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福建农林大学学报（自然科学版） 2018年第2期47卷 212-216页

作者：陈如敬章秋月陈秋勇修金生吴学敏严山周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013 南平市星星畜牧有限公司福建南平363000 福建农林大学动物科学学院福建福州350002

根据GenBank中登录的猪轮状病毒(PoRV)VP6基因序列特征,设计特异性的引物和探针,条件优化后,建立检测PoRV TaqMan实时荧光定量rt-pcr方法.结果表明:建立的Taq Man实时荧光定量rt-pcr方法敏感性高,最低可检测192拷贝·μL^(-1);特异性强... 详细信息

根据GenBank中登录的猪轮状病毒(PoRV)VP6基因序列特征,设计特异性的引物和探针,条件优化后,建立检测PoRV TaqMan实时荧光定量rt-pcr方法.结果表明:建立的Taq Man实时荧光定量rt-pcr方法敏感性高,最低可检测192拷贝·μL^(-1);特异性强,对猪常见病原(如猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒等)检测均为阴性;重复性好,扩增相关系数为0.999,其组内和组间变异系数分别为0.25%~1.26%和0.31%~1.49%.对临床收集的79份猪腹泻病料进行常规rt-pcr检测,检测出阳性样品4份,阳性率为5.06%(4/79);对这79份病料进行TaqMan实时荧光定量rt-pcr方法检测,检测出阳性样品6份,阳性率为7.59%(6/79);同时,4份经rt-pcr检测为阳性的样品经TaqMan实时荧光定量rt-pcr方法检测均为阳性,符合率达100%.本研究建立的方法为PoRV早期感染诊断提供检测手段.

关键词：猪轮状病毒 TaqMan 实时荧光定量rt-pcr方法

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鸽微RNA病毒实时荧光定量rt-pcr检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 860-866页

作者：张靖鹏陈翠腾林琳付环茹李兆龙江斌黄瑜万春和福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省禽病防治重点实验室/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

旨在建立鸽微RNA病毒(pigeon megrivirus,PiMeV)实时荧光定量rt-pcr检测方法。本研究根据GenBank中PiMeVs序列特征设计特异性检测引物,从信鸽粪便中检测到PiMeV阳性(命名为PiMeV-CHN001株),并对其3 C基因进行核苷酸同源性比较和遗传进... 详细信息

旨在建立鸽微RNA病毒(pigeon megrivirus,PiMeV)实时荧光定量rt-pcr检测方法。本研究根据GenBank中PiMeVs序列特征设计特异性检测引物,从信鸽粪便中检测到PiMeV阳性(命名为PiMeV-CHN001株),并对其3 C基因进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,明确其基因特征后,设计特异性实时荧光定量rt-pcr检测(rt-qpcr)引物组,建立检测PiMeV的rt-qpcr方法。结果显示:PiMeV-CHN001株3 C基因全长为591 bp,编码197个氨基酸,和其他2株野鸽源PiMeV(MeV-B1株和MeV-B2株)核苷酸相似性分别为89.5%和92.0%。建立的检测PiMeV的rt-qpcr方法的标准曲线Y轴截距为37.93,斜率为-3.335,相关系数为1.00,扩增效率为99.4%。特异性强,仅PiMeV出现特异性扩增信号和特异性峰值[Tm值为(81.69±0.22)℃],对鸽源禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)、鸽源禽I型副黏病毒(pigeon paramyxovirus type I,PPMV-1)、鸽输血传播病毒(pigeon torque teno virus,PTTV)、鸽腺病毒(pigeon adenovirus,PiAd)及鸽圆环病毒(pigeon circovirus,PiCV)检测均未见特异性扩增信号;敏感性优,最低检测限为54.0拷贝·μL^(-1);重复性好,批内和批间变异系数均低于1.5%。用建立的检测方法对42份信鸽粪便样品进行检测,发现2份阳性样品(阳性率为4.76%)。本研究首次证实我国大陆地区信鸽中存在PiMeV,丰富了PiMeV宿主谱信息;建立的rt-qpcr方法为后续开展PiMeV流行病学研究提供支撑。

关键词：信鸽鸽微RNA病毒 3 C基因序列分析实时荧光定量rt-pcr方法

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鼠呼肠孤病毒3型荧光定量rt-pcr检测方法的建立

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湖南畜牧兽医 2020年第2期 37-40页

作者：禹思宇周智君谭建锡胡忆文唐连飞长沙海关技术中心湖南长沙410004 中南大学实验动物学部湖南长沙410008

根据呼肠孤病毒3型(Reo3)M1基因序列保守区设计一对特异性引物,作者建立了一种快速、敏感、特异的实时荧光定量rt-pcr检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了评价试验。试验结果显示,标准品浓度在1.0×10^2~1.0×10^10copy/... 详细信息

根据呼肠孤病毒3型(Reo3)M1基因序列保守区设计一对特异性引物,作者建立了一种快速、敏感、特异的实时荧光定量rt-pcr检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了评价试验。试验结果显示,标准品浓度在1.0×10^2~1.0×10^10copy/μL之间时,其浓度的对数值与荧光定量R T-pcr实验中的Ct值之间有良好的线性相关性(相关系数R^2=0.9990),且该标准品检出限为1.0×10^2个copy/μL。特异性方面,该方法除对Reo3有扩增反应外,对其它相关病毒均无扩增反应,引物具有良好的特异性。同时,该方法实验间的变异系数为0.54%~1.04%之间,均小于2%,表明该方法扩增稳定性高、重复性强。以上研究结果表明,此研究检测方法建立的Reo3荧光R T-pcr检测方法特异、敏感、稳定,可用于实验动物中Reo3的监测以及流行病学研究。

关键词：呼肠孤病毒3型实时荧光定量rt-pcr方法 M1基因

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肺癌和癌旁正常组织中Gab2蛋白及其mRNA的表达

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环境与健康杂志 2010年第12期27卷 1080-1082页

作者：许秀丽陈照立金敏赵国范李君文天津医科大学基础医学院天津300070 军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津300050

目的检测肺癌和癌旁正常组织中Gab2蛋白及其mRNA的表达情况,探讨Gab2与肺癌发生发展的关系。方法采用PV-9003免疫组织化学法检测75例肺癌组织和25例癌旁正常组织中Gab2蛋白表达水平,实时荧光定量rt-pcr方法检测15对肺癌组织和相对应的... 详细信息

目的检测肺癌和癌旁正常组织中Gab2蛋白及其mRNA的表达情况,探讨Gab2与肺癌发生发展的关系。方法采用PV-9003免疫组织化学法检测75例肺癌组织和25例癌旁正常组织中Gab2蛋白表达水平,实时荧光定量rt-pcr方法检测15对肺癌组织和相对应的癌旁正常肺组织中Gab2基因mRNA表达状况。结果 Gab2蛋白在30例鳞癌、30例腺癌和15例其他类型癌中的阳性表达率分别为66.67%,46.67%和80%,高于癌旁正常肺组织(P<0.01);15例肺癌组织中Gab2 mRNA表达高于相对应的癌旁正常肺组织(P<0.05)。结论 Gab2在肺癌的发生发展中可能起重要作用,其表达增强可能诱导了肺癌的发生。

关键词： Gab2 肺癌免疫组织化学实时荧光定量rt-pcr方法

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