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TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应在强直性脊柱炎IL-2RαmRNA检测的应用价值

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检验医学教育 2005年第1期12卷 36-40页

作者：骆方军吕建新温州医学院检验医学院浙江温州325035

目的:利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)mRNA的表达水平,并进行疾病的活动性相关分析。方法:用 Primer Express v2.0软件,根据GenBank提供的序列,... 详细信息

目的:利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)mRNA的表达水平,并进行疾病的活动性相关分析。方法:用 Primer Express v2.0软件,根据GenBank提供的序列,在人IL-2Rα mRNA的第2和第3外显子之间设计一对引物和一条TaqMan探针。提取总RNA,加入已优化的一步法FQ-RT-PCR反应体系,扩增产物经凝胶电泳后切胶回收,并与pUCm-T载体连接。制备好的重组质粒转化感受态细胞进行克隆。经测序分析确定为特异性片段后,用T7RNA聚合酶转录为cRNA,作为FQ-RT-PCR系列浓度标准品。评价FQ-RT-PCR检测 IL-2Rα mRNA的特异性、线性、精密度和探针稳定性等。定量测定HLA-B27阳性活动组与阴性非活动组强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞IL-2Rα mRNA基因的表达水平,结合血浆可溶性白细胞介素-2受体 (sIL-2R)浓度,探讨与炎症活动的相互关系。结果:成功构建了cRNA标准品。该方法的线性范围为7～107 cells/ml,其批内CV8.4%,批间CV9.6%;扩增产物克隆的双向测序结果经BLAST比较、分析,证实为IL- 2Rα mRNA特异性片段。对各30例HLA-B27阳性与阴性的强直性脊柱炎的测定表明:与正常人对照组结果比较,HLA-B27阳性组与HLA-B27阴性组IL-2Rα mRNA和sIL-2R都有明显增加(P<0.01)。IL-2Rα mRNA对炎症活动评价的灵敏度为96.7%。结论:FQ-RT-PCR具有灵敏、特异、结果重复性好等优点;IL- 2Rα mRNA与sIL-2R比较更能反映强直性脊柱炎患者的免疫状态,可能为免疫药物的疗效评价和药物筛选提供基因表达水平上的信息。

关键词：实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 IL-2Rα 强直性脊柱炎 TaqMan mRNA检测应用价值可溶性白细胞介素-2受体外周血单个核细胞 sIL-2R Express PCR反应体系特异性片段 RNA聚合酶 mRNA基因基因表达水平扩增产物 cRNA

TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应在强直性脊柱炎IL-2Rá mRNA检测的应用价值

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TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应在强直性脊柱炎IL-2Rá mR...

不同核酸检测试剂盒检测环境样本禽流感病毒H5亚型的效果比较

浙江省生物化学与分子生物学学术交流会

作者：骆方军吕建新温州医学院检验医学院

目的利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞白细胞介素-2受体a(IL-2Ra)mRNA的表达水平,并进行痰病的活动性相关分析．方法根据GenBank提供的序列设计一对引物和一条TaqMan探针... 详细信息

目的利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞白细胞介素-2受体a(IL-2Ra)mRNA的表达水平,并进行痰病的活动性相关分析．方法根据GenBank提供的序列设计一对引物和一条TaqMan探针．提取外周血单个桉细胞(PBMC)总RNA,加入FQ-RT-PCR反应体系,产物切胶回收与pUCm-T载体连接,用T7RNA聚合酶转成cRNA,制备系列浓度参照物。评价其特异性、线性、精密度和探针稳定性。定量HLA-B27阳性组与阴性组AS患者PBMC的IL-2Ra mRNA基因表达并探讨与血浆可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R) 的相互关系．结果成功构建了IL-2Ra mRNA的cRNA参照物．线性范围7-107 cells/ml,批内CV 8．4％,批间CV 9．6％。对各30例HLA-B27阳性与阴性As的IL-2Ra mRNA测定表明:与正常人对照组结果比较,阳性组与阴性组IL-2Ra mRNA和sIL-2R有明显增加(P<0:01)．IL-2Ra mRNA对炎症活动评价的灵敏度为96．7％．结论 FQ-RT-PCR．具有灵敏、特异、结果重复性好等优点;IL-2Ra mRNA 比sIL-2R更能反映强直性脊柱炎患者的炎症活动程度,能为免疫药物的疗效评价和药物筛选提供基因表达水平上的信息．

关键词：实时荧光定量逆转录聚合酶链反应脊柱炎强直性白细胞介素-2受体á

来源： cnki会议评论

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热带医学杂志 2024年第2期24卷 181-184页

作者：林金思杨淑欢冯志锋师舞阳吴衍恒中山市疾病预防控制中心病原微生物与生物检验所广东中山528400

目的比较3种厂家检测禽流感病毒H5亚型的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)试剂对环境标本的检测效果。方法采用3个不同厂家的核酸检测试剂盒检测活禽市场环境样本中的H5亚型禽流感病毒,比较不同试剂检测结果检出率... 详细信息

目的比较3种厂家检测禽流感病毒H5亚型的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)试剂对环境标本的检测效果。方法采用3个不同厂家的核酸检测试剂盒检测活禽市场环境样本中的H5亚型禽流感病毒,比较不同试剂检测结果检出率的差异,使用TA克隆技术,将扩增产物连接到克隆载体上并测序分析,获得反应产物的序列。结果 3种检测试剂中,试剂盒C检测H5的检出率比A高(18.3%vs. 8.4%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.440,P=0.039)。对扩增产物片段序列进行分析发现,试剂A对标本核酸的H5扩增产物与KU042758.1序列的相似度最高,为100.00%,试剂C对标本核酸的H5扩增产物与CY091635.1序列的相似度最高,为97.92%,两者无明显的相似区域。结论试剂C比试剂A对该批临床样本中H5的检出率更高,检出率的差异可能与不同试剂靶序列不一致以及试剂引物与样本核酸的匹配度有关。

关键词：禽流感病毒 H5亚型实时荧光定量逆转录聚合酶链反应

苏州市一起聚集性人感染柯萨奇病毒A组4型基因特征

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中华疾病控制杂志 2023年第3期27卷 363-367页

作者：董泽丰徐智慧王笛吴学飞雅雪蓉夏瑜沈强苏州市疾病预防控制中心病原微生物检验科苏州215004

目的对苏州市一起人呼吸道感染不明病原的聚集性疫情病例咽拭子样本进行初步病原分子鉴定,为疫情处置提供技术支撑。方法采集该起疫情病例咽拭子标本,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time reverse transcription polymerase cha... 详细信息

目的对苏州市一起人呼吸道感染不明病原的聚集性疫情病例咽拭子样本进行初步病原分子鉴定,为疫情处置提供技术支撑。方法采集该起疫情病例咽拭子标本,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time reverse transcription polymerase chain reaction, Real-time RT-PCR)方法检测可引起聚集性呼吸道感染疫情的常见病原(甲/乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒、鼻病毒、偏肺病毒和腺病毒)核酸,同时采用FilmArray全自动医用PCR分析系统进行多病原筛查。对病例咽拭子标本进行高通量测序,并用特异性引物探针检测柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4, CV-A4)进行验证。结果该起疫情采样送检的18份咽拭子样本经Real-time RT-PCR方法检测,其中14份样本柯萨奇A4型病毒检测阳性。Real-time RT-PCR和高通量基因测序方法在病例咽拭子标本中均检出柯萨奇A4型病毒特异性基因片段。序列分析表明苏州该起疫情病毒株全基因组序列与NCBI数据库的MN964082病毒核酸一致性最高,为98.11%;VP1蛋白氨基酸序列与原型株AY421762一致性为98.03%,发现6个位点突变(T23V、A34T、S102A、A200T、I262V和Y285H)。结论 CV-A4可引起聚集性呼吸道感染疫情,对学龄儿童等免疫力较弱的人群应加强健康监测以便疫情早期处置。

关键词：实时荧光定量逆转录聚合酶链反应突变基因测序柯萨奇病毒A组4型

结直肠癌组织中锌指蛋白139(ZNF139)的表达及临床意义研究

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现代检验医学杂志 2022年第4期37卷 107-111,168页

作者：郑光明孙建华宋秋月恩施土家族苗族自治州中心医院湖北恩施445000

目的探究锌指蛋白139(zinc finger protein 139,ZNF139)在结直肠癌(colorectal cancer)组织中的表达及与临床病理参数及预后的关系。方法选取2012年5月~2014年6月就诊于恩施土家族苗族自治州中心医院行手术治疗的67例结直肠癌患者的临... 详细信息

目的探究锌指蛋白139(zinc finger protein 139,ZNF139)在结直肠癌(colorectal cancer)组织中的表达及与临床病理参数及预后的关系。方法选取2012年5月~2014年6月就诊于恩施土家族苗族自治州中心医院行手术治疗的67例结直肠癌患者的临床病理资料及癌组织、癌旁组织和正常黏膜组织进行研究。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法染色检测ZNF139 mRNA及蛋白在结直肠癌组织中的表达情况,分析其与结直肠癌患者临床病理因素的关系;采用K-M生存曲线分析ZNF139表达对预后的影响;采用COX回归模型分析影响结直肠癌患者预后的风险因素。结果结直肠癌病灶组织中ZNF139 mRNA(0.651±0.130)表达水平明显高于癌旁组织(0.217±0.070)和正常组织(0.201±0.052),差异有统计学意义(t=24.060,24.947,均P=0.001)。结直肠癌组织中ZNF139蛋白阳性率(52.24%)明显高于癌旁组织(28.36%)和正常黏膜组织(19.40%),差异均有统计学意义(χ^(2)=7.941,15.711;P=0.005,0.000)。结直肠癌组织中ZNF139 mRNA及蛋白表达与肿瘤分化程度、浸润程度、TNM分期和有无淋巴结转移密切相关(t=4.447~10.964,χ^(2)=16.613~35.850,均P<0.01)。ZNF139阴性表达组患者5年总体生存率为75.0%,优于阳性组患者的51.4%(Log-rankχ^(2)=3.391,P=0.047)。ZNF139表达(HR:2.249,95%CI:1.359~3.712,P=0.003),临床TNM分期(HR:2.016,95%CI:1.230~3.327,P=0.006)和淋巴结转移(HR:2.125,95%CI:1.302~3.469,P=0.002)是影响结直肠癌患者总体预后的独立危险因素。结论ZNF139在结直肠癌组织中高(阳性)表达,与结直肠癌的分化、浸润、TNM分期和有无淋巴结转移密切相关,是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素之一,可作为临床诊断及评估预后的参考指标。

关键词：锌指蛋白139 结直肠癌实时荧光定量逆转录聚合酶链反应免疫组织化学染色

转录介导扩增技术检测慢性丙型肝炎患者血清中HCV RNA及与RT-PCR的比较

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中南大学学报（医学版） 2014年第7期39卷 664-672页

作者：吴大先刘菲刘洪波戴立忠谭德明中南大学湘雅医院感染病科病毒性肝炎湖南省重点实验室长沙410008 湖南圣湘生物科技有限公司长沙410205

目的:利用转录介导的扩增技术(transcription mediated amplification,TMA)扩增HCV RNA,并与实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)进行比较,探讨TMA系统的稳定性及其与RT-PCR的灵敏性差异和相关性,以及TMA临床应用的意义。方法:利用鼠白血病反转录酶(moloney murine leukemia virus,MMLV)、T7 RNA聚合酶及2条特异性引物等建立TMA扩增体系;通过HCV RNA的扩增曲线的相关性变化,评价不同储存温度对TMA扩增体系的稳定性和重复性的影响;通过扩增一组10倍梯度稀释的HCV RNA体外转录样本,评价TMA体系与RT-PCR的灵敏性差异。收集101份临床诊断为慢性丙型肝炎患者的血清,同时采用TMA试剂和RT-PCR试剂进行检测,比较两种方法的阳性检出率,并利用直线相关和回归探讨两种方法检测血清HCV RNA的相关性。结果:成功地建立了TMA扩增体系,该体系在室温下放置24 h,结果影响较大,但在4℃储存6 d,-20℃下储存6个月内扩增效果不受影响,稳定性良好。与湖南圣湘生物技术公司RT-PCR试剂检测结果的比较显示:31份血清标本TMA及RT-PCR均检测到阳性20例,阴性11例,检测一致率为100%。选取其中20例阳性标本进行定量分析,发现两种技术有很好的相关性(r=0.91,P0.05)。对其中29例PCR检测和TMA检测均有定量结果的血清进行分析,两种技术也有很好的相关性(r=0.96,P定量检测有很好的可比性。

关键词：转录介导的扩增技术丙型肝炎实时荧光定量逆转录聚合酶链反应丙型肝炎病毒核糖核酸

乳腺癌中同源异型盒基因(HOX)A5表达的研究

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中华病理学杂志 2005年第9期34卷 569-574页

作者：曾郁杨文涛张瑰红朱雄增复旦大学肿瘤医院病理科上海200032

目的研究乳腺癌组织中同源异型盒基因(HOX)A5mRNA和蛋白表达,并分析其与乳腺癌临床病理参数间的相关性,以探讨HOXA5基因在乳腺癌发生、发展及转移中的作用。方法运用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RealtimeRTPCR)技术检测60例... 详细信息

目的研究乳腺癌组织中同源异型盒基因(HOX)A5mRNA和蛋白表达,并分析其与乳腺癌临床病理参数间的相关性,以探讨HOXA5基因在乳腺癌发生、发展及转移中的作用。方法运用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RealtimeRTPCR)技术检测60例乳腺癌(其中54例浸润性导管癌)和24例乳腺良性病变中HOXA5mRNA表达,免疫组织化学SP法检测HOXA5蛋白表达。统计学方法分析HOXA5基因表达与乳腺癌临床病理参数间的关系。结果(1)乳腺癌中HOXA5mRNA相对表达量为0.73～193.07,均值为20.85;乳腺良性病变中相对表达量为5.42～81.91,均值为30.94。乳腺癌HOXA5mRNA表达明显低于良性乳腺病变(P0.05)。结论HOXA5基因表达异常可能与乳腺癌有关。HOXA5基因表达抑制可能与乳腺癌淋巴结转移有关。

关键词：乳腺肿瘤逆转录聚合酶链反应免疫组织化学基因,homeobox A5 同源异型盒基因乳腺癌组织表达的研究实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 mRNA表达

微RNA-194在宫颈癌中的表达及临床意义

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安徽医药 2023年第9期27卷 1857-1860页

作者：崔桂荣张金华刘亚宁李焱邯郸市第一医院血液内科河北邯郸056002

目的探讨微RNA(miRNA)-194在宫颈癌组织中的表达情况及其临床意义。方法回顾性选取2013年5月至2016年1月于邯郸市第一医院行手术治疗的136例宫颈癌病人为研究对象,采用分层抽样选取58例宫颈癌病人的癌组织及相应癌旁正常组织,其余78例... 详细信息

目的探讨微RNA(miRNA)-194在宫颈癌组织中的表达情况及其临床意义。方法回顾性选取2013年5月至2016年1月于邯郸市第一医院行手术治疗的136例宫颈癌病人为研究对象,采用分层抽样选取58例宫颈癌病人的癌组织及相应癌旁正常组织,其余78例病人仅选取癌组织,获取136例宫颈癌组织标本及58例癌旁正常组织标本。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测宫颈癌组织和癌旁组织中miRNA-194表达水平,分析miRNA-194表达与宫颈癌病人临床病理特征及预后的关系。结果qRT-PCR结果表明136例宫颈癌病人癌组织miRNA-194的表达量(1.140±0.655)明显低于癌旁组织(4.502±1.168)(P<0.001)。miRNA-194表达水平与宫颈癌病人的国际妇产科联盟(FIGO)分期(P=0.001)和肿瘤长径(P=0.033)相关。miRNA-194低表达的宫颈癌病人的生存期显著低于miRNA-194高表达病人[HR 95%CI=2.17(1.21,3.90),log-rank P=0.012]。Cox回归分析结果表明miRNA-194表达是影响宫颈癌病人预后的独立因素。结论miRNA-194在宫颈癌的发生发展中有一定作用,其在宫颈癌病人癌组织中更低,miRNA-194有可能成为宫颈癌诊断和预后的指标。

关键词：子宫肿瘤子宫颈微RNA-194 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应预后

肝癌患者血清中lncRNA HOTAIR表达与临床病理特征的相关性及诊断价值

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实用癌症杂志 2023年第5期38卷 737-740页

作者：郭冬萌吴玉卓河南省南阳市中心医院 473000

目的分析血清长链非编码RNA HOX转录反义RNA(IncRNA HOTAIR)在肝癌患者中的表达与临床诊断意义。方法选取100例肝癌患者为研究对象,并将其纳入肝癌组,另选取同期收治的80例肝硬化患者纳入肝硬化组,同时选取同期行体检的75例健康体检者... 详细信息

目的分析血清长链非编码RNA HOX转录反义RNA(IncRNA HOTAIR)在肝癌患者中的表达与临床诊断意义。方法选取100例肝癌患者为研究对象,并将其纳入肝癌组,另选取同期收治的80例肝硬化患者纳入肝硬化组,同时选取同期行体检的75例健康体检者纳入对照组。采集3组5 ml静脉血,以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测对比3组血清IncRNA HOTAIR相对表达量。同时,收集肝癌患者的年龄、性别等一般资料,分析血清IncRNA HOTAIR与其临床病理特征的关系;另外绘制受试者工作曲线(ROC),分析血清IncRNA HOTAIR在肝癌中的诊断效能。结果肝癌组的IncRNA HOTAIR相对表达量[(2.53±0.58)]高于肝硬化组[(0.81±0.25)]与对照组[(0.20±0.05)],差异有统计学意义(P0.05)。ROC结果显示:血清IncRNA HOTAIR诊断肝癌的AUC为0.901(95%CI:0.852~0.949),具有较高的诊断价值。结论肝癌患者血清内IncRNA HOTAIR呈高表达,其表达水平与患者TNM分期、血管侵犯、肝外转移相关,可能参与肝癌的发生、发展,在肝癌中具有较高的临床诊断意义。

关键词：肝癌实时荧光定量逆转录聚合酶链反应相对表达量