检索结果-南通市图书馆

基于MMR缺陷的高频突变食源性沙门氏菌环丙沙星耐药机制

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食品科学 2021年第22期42卷 162-170页

作者：王银杨保伟盛焕精李怡澜施春雷史贤明肖英平杨华西北大学食品科学与工程学院陕西西安710069 上海交通大学农业与生物学院中美食品安全联合研究中心上海200240 西北农林科技大学食品科学与工程学院陕西杨凌712100 浙江省农业科学院农产品质量标准研究所浙江省植物有害生物防治省部共建国家重点实验室培育基地浙江杭州310021

目的:通过研究甲基导向错配修复系统(methyl-directed mismatch repair,MMR)主要调控基因缺陷对食源性沙门氏菌高频突变子突变频率和环丙沙星药敏性的影响,揭示其调控机制。方法:采用萘啶酮酸和利福平平板测定90株食源性沙门氏菌高频突... 详细信息

目的:通过研究甲基导向错配修复系统(methyl-directed mismatch repair,MMR)主要调控基因缺陷对食源性沙门氏菌高频突变子突变频率和环丙沙星药敏性的影响,揭示其调控机制。方法:采用萘啶酮酸和利福平平板测定90株食源性沙门氏菌高频突变子的突变频率;聚合酶链式反应结合DNA测序法检测耐药基因突变;琼脂稀释法测定环丙沙星对沙门氏菌高频突变子的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),确定MMR缺陷与沙门氏菌高频突变子突变频率、MIC及耐药基因间的关系;通过电转化法将野生mutS、mutH、mutL和uvrD基因分别转入高频突变子103D2,采用实时聚合酶链式反应法测定野生型基因转入前后103D2耐药相关基因表达差异,分析MMR基因缺陷对沙门氏菌高频突变子环丙沙星耐药性的影响及调控机制。结果:90株沙门氏菌高频突变子中共有89株对环丙沙星耐药,49株MutS编码基因发生突变(MutS-),且相较于MutS非突变株,在MutS突变株中GyrA(67.3%)及ParC(87.8%)蛋白突变检出率更高。103D2转入野生型mutS、mutH、mutL及uvrD基因质粒后,103D2:P-mutS突变频率显著下降,103D2:P-mutL和103D2:P-uvrD突变频率极显著下降。4株互补菌株中marA基因显著下调,marR、tolC(除103D2:P-uvrD外)基因上调,降低103D2对环丙沙星耐药性。结论:MMR缺陷可通过影响外排泵和膜编码基因marA、marR和tolC的表达改变对沙门氏菌高频突变子的耐药性及突变频率产生影响。

关键词：沙门氏菌高频突变子耐药基因实时聚合酶链式反应甲基导向错配修复系统

膜生物反应器中氨氧化菌群落结构的演替与分析

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天津大学学报 2009年第1期42卷 65-71页

作者：张斌孙宝盛刘慧娜黄翠芳季民天津大学环境科学与工程学院天津300072 军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津300050 天津市金厦规划建筑设计有限公司天津300074 国家环境保护部环境标准研究所北京100012

为了揭示膜生物反应器中氨氧化菌群落结构的演替过程,利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)、克隆测序和实时定量聚合酶链式反应(PCR)等分子生物学技术对膜生物反应器中氨氧化菌群落的演替进行了研究.DGGE结果表明,在实验过程中氨氧化菌群落结构... 详细信息

为了揭示膜生物反应器中氨氧化菌群落结构的演替过程,利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)、克隆测序和实时定量聚合酶链式反应(PCR)等分子生物学技术对膜生物反应器中氨氧化菌群落的演替进行了研究.DGGE结果表明,在实验过程中氨氧化菌群落结构的演替过程较为缓慢,有些种群一直保持着较为稳定的优势地位.测序结果表明,氨氧化菌群中的主要优势种群为Comamonas sp、Uncultured Nitrosomonas sp、Uncultured Nitrosospira sp和Uncultured β-Proteobacterium;并在实验后期鉴定出3株反硝化优势菌群.实时PCR结果表明,氨氧化菌在总细菌中所占比例尚不足0.01%,但其含量在经过驯化后显著增长,第80天时为接种污泥中含量的12.38倍,但其比氨氧化速度从初期的0.30×1015 g/(拷贝数.h)上升到11.73×1015 g/(拷贝数.h)后,逐渐降低到末期的0.068×1015 g/(拷贝数.h).而且,这一结果与反应器中对氨氮的去除效果相对应.

关键词：膜生物反应器氨氧化菌变性梯度凝胶电泳克隆测序实时聚合酶链式反应

Real-time PCR法检测水产品中异鳞蛇鲭、棘鳞蛇鲭源性成分

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食品科学 2020年第24期41卷 273-280页

作者：信红梅姚琳陆键萍曲梦江艳华李风铃郭莹莹王联珠大连工业大学食品学院辽宁大连116034 农业农村部水产品质量安全检测与评价重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所山东青岛266071 中国海洋大学食品科学与工程学院山东青岛266000

目的:建立异鳞蛇鲭、棘鳞蛇鲭实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法。方法:对比异鳞蛇鲭、棘鳞蛇鲭、大西洋鳕等18种鳕鱼及易掺假品种的线粒体细胞色素C氧化酶I(cytochrome C oxidase subuni... 详细信息

目的:建立异鳞蛇鲭、棘鳞蛇鲭实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法。方法:对比异鳞蛇鲭、棘鳞蛇鲭、大西洋鳕等18种鳕鱼及易掺假品种的线粒体细胞色素C氧化酶I(cytochrome C oxidase subunit I,COI)基因,设计异鳞蛇鲭、棘鳞蛇鲭物种特异性引物/探针,建立两种鱼的real-time PCR检测方法,评估其特异性、绝对灵敏度和相对灵敏度;用该方法对50份市售标称“鳕鱼”制品进行检测,评估其实际使用效果。结果:两种检测方法特异性强,绝对灵敏度为0.002 ng/μL(异鳞蛇鲭)和0.0002 ng/μL(棘鳞蛇鲭),相对灵敏度均达0.01%,满足实际检测需求。在50份市售样品中检出1份含异鳞蛇鲭成分,1份含棘鳞蛇鲭成分,与测序比对结果一致。结论:本研究建立的异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性成分的检测方法特异性强、灵敏度高,为保护消费者权益和水产品掺杂使假的检测提供技术支持。

关键词：异鳞蛇鲭棘鳞蛇鲭油鱼实时聚合酶链式反应 COI基因

食品中Escherichia coli O157:H7微滴数字PCR绝对定量检测方法的建立

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食品科学 2020年第16期41卷 259-265页

作者：魏咏新马丹李丹徐蕾蕊魏海燕张西萌刘莉曾静北京海关技术中心北京100026

为建立食品中Escherichia coli O157:H7的微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速定量检测方法,针对E.coli O157:H7的特异性单拷贝基因hlyA设计引物探针,并进行特异性、灵敏度和重复性实验,同时... 详细信息

为建立食品中Escherichia coli O157:H7的微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速定量检测方法,针对E.coli O157:H7的特异性单拷贝基因hlyA设计引物探针,并进行特异性、灵敏度和重复性实验,同时通过人工污染三文鱼样品的检测,比较平板计数法、real-time PCR和ddPCR方法的测定值效果。结果表明,所建立的E.coli O157:H7 ddPCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。细菌纯培养液中定量限为105 CFU/mL,检出限为25 CFU/mL,人工污染三文鱼样品中检出限为110 CFU/g。对不同人工污染水平的三文鱼样品,ddPCR与平板计数的测定值结果无显著性差异(P>0.05),比real-time PCR方法的测定值结果更加稳定、准确。因此,本研究建立的ddPCR方法能够更加快速、准确、灵敏、特异地绝对定量检测食品中E.coli O157:H7。

关键词： Escherichia coli O157:H7 微滴数字聚合酶链式反应实时聚合酶链式反应定量限检出限

实时PCR检测食品中荧光假单胞菌方法的建立

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食品科学 2020年第24期41卷 304-309页

作者：闵可张政周雨蕾侯温甫王宏勋周敏武汉轻工大学食品科学与工程学院湖北武汉430023

针对荧光假单胞菌分子检测靶点gyrB基因设计引物和探针,制备标准质粒,绘制标准曲线,建立荧光假单胞菌实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测体系。特异性评价表明该体系能够特异性检测荧光假单胞... 详细信息

针对荧光假单胞菌分子检测靶点gyrB基因设计引物和探针,制备标准质粒,绘制标准曲线,建立荧光假单胞菌实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测体系。特异性评价表明该体系能够特异性检测荧光假单胞菌,其他细菌均无检出。灵敏性检测结果表明纯DNA水平灵敏度可达14.3 fg/μL,纯培养物水平上检测灵敏度为3.0×10^2 CFU/mL。抗干扰性实验结果表明当加入低浓度背景干扰菌时,对上述体系检测灵敏度没有影响。人工污染样品检测表明适当增菌可检测到荧光假单胞菌,说明TaqMan探针real-time PCR法特异性强、灵敏度高、抗干扰性能力强。

关键词：荧光假单胞菌实时聚合酶链式反应 gyrB基因

实时PCR检验在高危型人乳头瘤病毒诊断中的价值分析

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实用妇科内分泌电子杂志 2022年第5期9卷 103-106页

作者：应菲菲盐城妇幼保健院检验科江苏盐城224001

目的研究高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)应用实时聚合酶链式反应(PCR)检验诊断的临床价值。方法选取73例高危型人乳头瘤病毒患者,分别进行实时PCR检验、第2代杂交式捕获法检验,对比两种检验不同程度宫颈病变检出率、人乳头瘤病毒(HPV)阳性... 详细信息

目的研究高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)应用实时聚合酶链式反应(PCR)检验诊断的临床价值。方法选取73例高危型人乳头瘤病毒患者,分别进行实时PCR检验、第2代杂交式捕获法检验,对比两种检验不同程度宫颈病变检出率、人乳头瘤病毒(HPV)阳性检出率及诊断效能。结果73例患者中不同程度宫颈上皮内瘤变35例,鳞状上皮病变和慢性宫颈炎32例。实时PCR检验鳞状上皮病变和慢性宫颈炎检出率高于第2代杂交式捕获法检验,差异有统计学意义(P0.05)。实时PCR检验HPV阳性检出率为75.34%,明显高于第2代杂交式捕获法检验的58.90%,差异有统计学意义(P实时PCR检验诊断准确率、特异性均高于第2代杂交式捕获法检验,差异有统计学意义(P0.05)。结论高危型人乳头瘤病毒患者应用实时PCR检验诊断价值较高,其特异性和敏感性较高,在临床患者病情诊断中具有重要作用,值得临床推广。

关键词：高危型人乳头瘤病毒实时聚合酶链式反应第2代杂交式捕获法诊断价值

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实时PCR仪中温度控制系统的研制

中国生物医学工程学报 2012年第1期31卷 151-155页

作者：张新磊冯继宏孔晶晶袁玉强北京工业大学生命科学与生物工程学院生物医学工程中心北京100124

研发一套基于DSP式的实时PCR仪温度控制系统。以DSP芯片TMS320F2812为核心,利用DSP产生的PWM波作为控制信号,经功率放大后,驱动半导体加热制冷片。采用惠斯通电桥作为温度传感电路,输出电压经DSP内部的ADC模块后转换成数字量;同时采用常... 详细信息

研发一套基于DSP式的实时PCR仪温度控制系统。以DSP芯片TMS320F2812为核心,利用DSP产生的PWM波作为控制信号,经功率放大后,驱动半导体加热制冷片。采用惠斯通电桥作为温度传感电路,输出电压经DSP内部的ADC模块后转换成数字量;同时采用常规PID算法实现温度的闭环控制,并采用串行通信接口与上位机进行实时通信。实验结果表明,整体温度控制系统的温度变化速率为3℃/s,温度数据可通过串行通信接口以9 600 b/s的比特率传输至上位机,并绘制温度曲线。

关键词：实时聚合酶链式反应温度控制数字信号处理器常规PID算法

荧光定量聚合酶链反应联合拷贝数变异测序技术在产前诊断中的应用研究

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国际生殖健康／计划生育杂志 2020年第6期39卷 450-455页

作者：李琴魏兆莲乔金平陈薇方慧琴袁静安徽医科大学第一附属医院产前诊断中心合肥230022 安徽医科大学第一附属医院生殖中心合肥230022 安徽医科大学第一附属医院医学实验中心合肥230022

目的:回顾性分析采用荧光定量聚合酶链反应(QF-PCR)联合全基因组拷贝数变异测序(CNV-Seq)技术对270例胎儿常见染色体非整倍体进行快速产前诊断并检测>100 kb的全基因组拷贝数变异的检测结果。方法:对270例早中孕期因产前血清学筛查异常... 详细信息

目的:回顾性分析采用荧光定量聚合酶链反应(QF-PCR)联合全基因组拷贝数变异测序(CNV-Seq)技术对270例胎儿常见染色体非整倍体进行快速产前诊断并检测>100 kb的全基因组拷贝数变异的检测结果。方法:对270例早中孕期因产前血清学筛查异常或母亲血胎儿游离DNA(无创DNA)行产前筛查结果提示高风险孕妇人群进行产前诊断的羊水样本,通过短串联重复序列(STR)位点比对后行13、18、21、X、Y染色体非整倍体的快速诊断并联合高通量DNA测序法CNV-Seq技术对染色体全基因组拷贝数变异进行检测;同时与染色体核型结果进行比较和分析。结果:QF-PCR结果中胎儿5种常见染色体(13、18、21、X、Y染色体)非整倍体共计19例,阳性率7.03%(19/270),其中21三体12例,18三体3例,XXY综合征2例,XYY综合征2例。染色体核型提示非整倍体结果与此一致。二者染色体非整倍体检出率和准确性一致。染色体核型结果中尚有11例染色体多态性。CNV-Seq异常总数43例,阳性率15.9%(43/270);其中19例为染色体非整倍体,24例微缺失微重复(明确致病CNV-Seq 9例,致病性未知CNV-Seq 5例,良性可能CNV-Seq 10例)。QF-PCR联合CNV-Seq技术检测周期平均1~2周左右,而染色体核型检测周期5周左右且有1例培养失败(后重新羊膜腔穿刺采集羊水标本)。结论:QF-PCR联合CNV-Seq技术在临床上可快速准确筛查产前高风险孕妇人群,有利于二级预防实施和减少出生缺陷,提高优生优育。

关键词：实时聚合酶链式反应序列分析,DNA DNA拷贝数变异串联重复序列产前诊断

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基于DSP的实时PCR仪温度控制系统研制

传感器与微系统 2014年第5期33卷 95-98页

作者：何浩冯继宏李开祥北京工业大学生命科学与生物工程学院北京100124

为小型实时聚合酶链式反应(PCR)仪研制一种基于数字信号处理器(DSP)芯片TMS320F2812的温度控制系统。由DSP产生的脉冲宽度调制(PWM)波经功率放大电路驱动半导体加热制冷片以Pt100作为温度传感器构建一种消除非线性误差的电桥传感电路,... 详细信息

为小型实时聚合酶链式反应(PCR)仪研制一种基于数字信号处理器(DSP)芯片TMS320F2812的温度控制系统。由DSP产生的脉冲宽度调制(PWM)波经功率放大电路驱动半导体加热制冷片以Pt100作为温度传感器构建一种消除非线性误差的电桥传感电路,将温度信号转换为电压信号,电压信号送入DSP的A/D转换模块,同时进行位置式PID算法,然后调节PWM波的占空比,使整个系统对温度信号达到闭环控制。实验结果表明:系统的升降温速率能达到4℃/s,精度为0.2℃。

关键词：实时聚合酶链式反应数字信号处理器温度控制