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氨苄西林和安普霉素对禽源沙门菌的体外联合效果和耐药突变选择窗的研究

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中国抗生素杂志 2022年第7期47卷 740-744,I0003页

作者：张靖菊徐飞刘静陈晨张向阳李秀波国家饲料药物基准试验室中国农业科学院饲料研究所北京100081

目的探讨氨苄西林(ampicillin,AMP)和安普霉素(apramycin,APR)联合是否能增强对禽源沙门菌的抗菌效果,以及能否缩小甚至关闭AMP对沙门菌的耐药突变选择窗(mutant selection window,MSW)。方法以ATCC 25922为质控菌,对22株禽源沙门菌用... 详细信息

目的探讨氨苄西林(ampicillin,AMP)和安普霉素(apramycin,APR)联合是否能增强对禽源沙门菌的抗菌效果,以及能否缩小甚至关闭AMP对沙门菌的耐药突变选择窗(mutant selection window,MSW)。方法以ATCC 25922为质控菌,对22株禽源沙门菌用棋盘稀释法进行AMP和APR的联合药敏试验,并以部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)评价联合效果,挑选其中2株菌用试管法进行杀菌动力学试验并绘制时间-杀菌曲线;挑选6株菌进行不同加药顺序的联合药敏试验;对其中10株用琼脂稀释法进行AMP单药和联合用药的防耐药突变浓度(Mutation Preventive Concentration,MPC)测定,以选择指数(selection index,SI)和MSW范围来评价防突变效果。结果22株菌的联合药敏试验中相加效应占56.52%,协同效应占43.48%;杀菌动力学试验的2株菌在第4小时的联合用药组菌落对数值较最有效的单药组分别减少了3.10和1.94 lgCFU/mL;不同加药顺序试验的配对t检验结果为P>0.05,无显著性差异;MPC的测定试验中,SI值≥1的菌株的MSW范围明显缩小甚至关闭。结论AMP和APR对禽源沙门菌的体外联合效果较好,且能有效缩小AMP对沙门菌的耐药突变选择窗,不同加药顺序对联合用药效果无影响。

关键词：氨苄西林安普霉素沙门菌耐药突变选择窗

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黄芩对安普霉素耐药大肠杆菌的耐药消除研究

中国畜牧兽医 2023年第3期50卷 1279-1286页

作者：田二杰谷振王子皓刘方正刘克森张雪飞周变华河南科技大学动物科技学院洛阳471023 杭州斯达特生物科技有限公司杭州310000 河南省巩义市畜牧中心巩义451200

【目的】探讨黄芩对安普霉素耐药大肠杆菌的耐药消除作用。【方法】制备黄芩醇提物,采用琼脂稀释法检测黄芩醇提物对耐药大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),通过耐药消除试验和影印法检测耐药消除率。进而采用微量肉汤稀释法和纸片扩散法检... 详细信息

【目的】探讨黄芩对安普霉素耐药大肠杆菌的耐药消除作用。【方法】制备黄芩醇提物,采用琼脂稀释法检测黄芩醇提物对耐药大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),通过耐药消除试验和影印法检测耐药消除率。进而采用微量肉汤稀释法和纸片扩散法检测消除前后大肠杆菌耐药性的变化,扫描电镜法观察细菌形态的变化,实时荧光定量PCR法检测耐药相关基因相对表达量的变化。【结果】黄芩醇提物对安普霉素耐药大肠杆菌的MIC为41.25 mg/mL,对耐药大肠杆菌的耐药消除率为11.7%~17.0%。黄芩醇提物处理后,大肠杆菌的MIC值由256μg/mL降至16~32μg/mL;扫描电镜观察发现,黄芩醇提物处理组细菌表面受损,菌体形态异常;实时荧光定量PCR检测结果显示,黄芩醇提物极显著提高了大肠杆菌中ompF、fimA、phnE和fhuF基因mRNA的相对表达量(P安普霉素耐药大肠杆菌的耐药消除作用。

关键词：黄芩大肠杆菌耐药消除安普霉素

安普霉素对猪源大肠杆菌野生型折点及其耐药机制研究

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安普霉素对猪源大肠杆菌野生型折点及其耐药机制研究

作者：李佳瑞东北农业大学

学位级别：硕士

抗菌药物敏感性判定标准(折点)是检测细菌对抗菌药物敏感性,确定其耐药水平及耐药率的重要技术标准,目前世界上较权威的制定折点的机构主要有美国临床实验室标准化研究所(CLSI)和欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(EUCAST),我们国家尚未建... 详细信息

抗菌药物敏感性判定标准(折点)是检测细菌对抗菌药物敏感性,确定其耐药水平及耐药率的重要技术标准,目前世界上较权威的制定折点的机构主要有美国临床实验室标准化研究所(CLSI)和欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(EUCAST),我们国家尚未建立制定折点的机构。安普霉素是畜禽专用抗菌药,在治疗和预防大肠杆菌所引发的疾病中发挥了重要作用,但目前国内外均未建立安普霉素对大肠杆菌的敏感性折点,缺乏判定的统一尺度。随着抗菌药物长时间不合理使用和滥用,大肠杆菌耐药情况愈发严重。针对以上问题,本研究参考CLSI建立折点的标准流程与方法,结合我国不同地区养殖情况,采集国内不同区域养猪场猪的肛门拭子,在分离、纯化、鉴定大肠杆菌和测定安普霉素对上述大肠杆菌最小抑菌浓度(MIC)的基础上建立安普霉素对猪源大肠杆菌的野生型折点(CO),并从钝化酶基因和外排泵基因两个方面探讨了大肠杆菌对安普霉素耐药性的影响,研究结果对安普霉素耐药大肠杆菌的监测以及细菌耐药性的防控具有重要的理论与实践意义。本研究采集了7个不同省市规模化养猪场的猪肛拭子,经分离、纯化、鉴定得到1230株猪源大肠杆菌。采用微量肉汤稀释法测定安普霉素对上述猪源大肠杆菌临床分离株的最小抑菌浓度(MIC),通过绘制安普霉素对菌株的MIC值分布直方图,运用统计学方法确定了猪源大肠杆菌对安普霉素的CO为32μg/mL。MIC和MIC分别为16μg/mL和64μg/mL。采用体外药效学试验方法测定安普霉素对部分猪源大肠杆菌临床分离株的最小杀菌浓度(MBC)和最小防突变浓度(MPC)。结果表明,安普霉素对猪源大肠杆菌为杀菌型抗菌药(MBC=1MIC),突变选择窗较宽。在测得的MIC(0.556 g/mL)范围内挑选出310株不同MIC值的猪源大肠杆菌临床分离株,采用PCR方法检测介导安普霉素耐药性的基因aac(3)-IV、npmA和apmA。结果只检测出aac(3)-IV钝化酶基因,且主要存在于MIC≥64μg/mL的耐药猪源大肠杆菌临床分离株中,表明aac(3)-IV钝化酶基因是介导大肠杆菌对安普霉素耐药的主要原因之一,同时也说明本研究中建立的野生型折点是可信的。随机挑选出25株对安普霉素耐药的猪源大肠杆菌临床分离株,对其耐药机制做进一步研究。首先采用药敏纸片法测定上述临床分离株对11种抗菌药物的耐药表型。采用微量肉汤稀释法和药敏纸片法分别检测上述菌株加入主动外排抑制剂碳酰氯间氯苯腙(CCCP)前后对安普霉素和其他抗菌药物的敏感性影响。结果显示CCCP和抗菌药物联合使用可有效降低猪源大肠杆菌对安普霉素、多西环素、新霉素等抗菌药物的耐药性。说明了主动外排系统可能是导致菌株对安普霉素耐药和多重耐药性的原因之一。分别采用PCR方法和实时荧光定量PCR方法检测上述判定为主动外排泵表达阳性的安普霉素耐药大肠杆菌临床分离株中AcrAB-TolC主动外排基因的携带率和相对表达量,分析猪源大肠杆菌主动外排基因acrA、acrB和aac(3)-IV钝化酶基因的相对表达量与猪源大肠杆菌临床分离株对安普霉素耐药程度的相关性。结果显示25株耐安普霉素的猪源大肠杆菌临床分离株中acrA、acrB和tolC 3种主动外排基因的携带率较高;部分对安普霉素耐药严重的猪源大肠杆菌临床分离株中acrA、acrB基因相对表达量较高,但其表达量的高低和猪源大肠杆菌临床分离株对安普霉素耐药程度无明显相关性;aac(3)-IV钝化酶基因的相对表达量与猪源大肠杆菌临床分离株对安普霉素耐药程度无明显相关性。采用实时荧光定量PCR方法检测上述多重耐药大肠杆菌临床分离株中主动外排基因acrA和acrB及其调控基因marA,soxS,robA的相对表达量,分析多重耐药菌株耐药数量与上述基因表达量的关系。结果表明acrA、acrB两种主动外排基因和marA,soxS两种调控基因的表达量与大肠杆菌的耐药数量呈正相关,robA基因的表达量与耐药数量无明显相关性。综上所述,我们初步确定了安普霉素对猪源大肠杆菌的CO,并对部分猪源大肠杆菌临床分离株的耐药机制进行了研究,从钝化酶基因和外排泵基因两个方面探讨了大肠杆菌对安普霉素耐药性的影响,研究结果对指导猪源大肠杆菌安普霉素耐药性监控及防治具有重要的理论与实践意义。

关键词：安普霉素猪源大肠杆菌野生型折点耐药机制主动外排系统

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安普霉素生产废水毒性去除与产酸发酵预处理

哈尔滨工业大学学报 2006年第6期38卷 884-886,924页

作者：靳慧征李建政边喜龙朱葛夫刘莹哈尔滨工业大学市政环境工程学院黑龙江建筑职业技术学院哈尔滨150008

应用连续流搅拌槽式反应器（CSTR）对安普霉素废水进行产酸发酵和去毒处理，在进水COD质量浓度为5000-8000mg／L，HRT为8h的条件下，对安普霉素生产废水的COD去除率平均为21．53％，而HRT为12h时平均为17．62％．HRT为8h和12h对悬浮物... 详细信息

应用连续流搅拌槽式反应器（CSTR）对安普霉素废水进行产酸发酵和去毒处理，在进水COD质量浓度为5000-8000mg／L，HRT为8h的条件下，对安普霉素生产废水的COD去除率平均为21．53％，而HRT为12h时平均为17．62％．HRT为8h和12h对悬浮物（SS）的平均去除率分别为56．78％和53．05％；对氩氮的平均去除率分别为11．05％和6．39％．经产酸发酵处理过的安普霉亲生产废水，其毒性被去除，BOD5／COD（B／C）从处理前的0．35：分别提高到0．42以上，去除单位重量COD的甲烷产量达到164mL／g以上，可采用产甲烷相进行更进一步的有效处理．

关键词：有机废水安普霉素产酸发酵水力停留时间毒性可生化性

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安普霉素的研究进展

中国兽药杂志 2016年第7期50卷 66-69页

作者：戴青于丽娜张璐韩宁宁徐嫄赵晖中国兽医药品监察所北京100081

就安普霉素合成途径、抗菌活性、含量测定方法和临床应用等方面的研究进展进行了综述,以期为安普霉素的研究和开发提供参考。

关键词：安普霉素合成途径抗菌活性含量测定临床应用

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常温常压等离子体诱变选育安普霉素高产菌株

中国兽药杂志 2023年第4期57卷 34-39页

作者：张鄂王海波王洛菊李敏孟敏田伟波赵国毅李继安山东齐发药业有限公司济南250400 上海医药工业研究院有限公司上海200000

安普霉素作为一种广谱兽用抗生素,对多种革兰氏阴性菌、阳性菌和某些支原体具有较好的抗菌作用。本论文利用常温常压等离子体(ARTP)技术结合抗性筛选方法,对安普霉素产生菌黑暗链霉菌进行诱变选育,以期得到高产菌株。以AP-520为出发菌,... 详细信息

安普霉素作为一种广谱兽用抗生素,对多种革兰氏阴性菌、阳性菌和某些支原体具有较好的抗菌作用。本论文利用常温常压等离子体(ARTP)技术结合抗性筛选方法,对安普霉素产生菌黑暗链霉菌进行诱变选育,以期得到高产菌株。以AP-520为出发菌,进行ARTP诱变处理,ARTP最佳诱变时间是70 s,处理后的菌液在潮霉素平板上进行抗性筛选,单菌落经过48孔板大量筛选后再进行摇瓶初筛和复筛,共进行8轮筛选试验,得到一株高产菌株AP-6023,摇瓶效价达到11444 U·ml-1,较对照提高29%,经过10次传代培养后仍能保持产抗能力,30 L发酵罐效价为10920 U·ml-1,较对照提高23%。突变株AP-6023的获得,大大提高了安普霉素的生产水平,证实了ARTP诱变技术的有效性,试验方法为其它工业微生物的育种提供了解决思路。

关键词：安普霉素常温常压等离子体(ARTP) 抗性筛选高产菌株

安普霉素对猪源大肠杆菌野生型折点的确定及体外药效学研究

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安普霉素对猪源大肠杆菌野生型折点的确定及体外药效学研究

气液相等离子体诱变选育安普霉素高产菌株的研究

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：程平李佳瑞杨雨齐肖天石张秀英东北农业大学动物医学学院

[目的意义]:抗菌药物敏感性判定标准(折点)是检测细菌对抗菌药物敏感性,确定耐药水平及耐药率的重要技术标准,目前世界上较权威的制定折点的机构主要有美国临床实验室标准化研究所(CLSI)和欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(EUCAST),我们国... 详细信息

[目的意义]:抗菌药物敏感性判定标准(折点)是检测细菌对抗菌药物敏感性,确定耐药水平及耐药率的重要技术标准,目前世界上较权威的制定折点的机构主要有美国临床实验室标准化研究所(CLSI)和欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(EUCAST),我们国家尚未建立制定折点的机构。安普霉素是畜禽专用抗菌药,在治疗和预防大肠杆菌所引发的疾病中发挥了重要作用,但目前国内外均未建立安普霉素对大肠杆菌的敏感性折点,缺乏判定的统一尺度。本研究参考CLSI建立折点的标准流程与方法,建立安普霉素对猪源大肠杆菌的野生型折点(CO),并分析了了大肠杆菌对安普霉素耐药与钝化酶之间的相关性,从而为耐安普霉素大肠杆菌的监测与防控提供理论指导。[方法]本研究通过采集我国主要省市规模化养猪场的猪肛门拭子,经实验室培养、分离、纯化和鉴定,获得猪源大肠杆菌临床分离株;采用微量稀释法测定安普霉素对猪源大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),经统计分析,确定安普霉素对猪源大肠杆菌的CO;采用体外药效学试验方法研究安普霉素对猪源大肠杆菌的最小杀菌浓度(MBC)、最小防突变浓度(MPC)和突变选择窗(MSW)。在测得的MIC (0.5～256 g/mL)范围内挑选出310株不同MIC值的猪源大肠杆菌临床分离株,采用PCR方法检测介导安普霉素耐药性的基因aac(3)-Ⅳ、npmA和apmA。[结果与结论]:共分离得到1222株猪源大肠杆菌临床分离株;通过绘制安普霉素对菌株的MIC值分布直方图,运用统计学方法确定了猪源大肠杆菌对安普霉素的CO为32μg/mL。MIC和MIC分别为16μg/mL和64μg/mL。体外药效学试验表明,安普霉素对猪源大肠杆菌为杀菌型抗菌药(MBC=1～4MIC),突变选择窗较宽。在挑选出310株不同MIC值的猪源大肠杆菌临床分离株中,只检测出aac(3)-Ⅳ钝化酶基因,且主要存在于MIC≥64μg/mL的耐药菌株中,表明aac(3)-Ⅳ钝化酶基因是介导大肠杆菌对安普霉素耐药的主要原因之一。

关键词：安普霉素大肠杆菌 MIC COWT 钝化酶

来源： cnki会议评论

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武汉工程大学学报 2023年第5期45卷 510-516页

作者：丁强向继武周明程波谭小芳闫雪沈洁宜昌三峡制药有限公司湖北宜昌443000 武汉工程大学环境生态与生物工程学院湖北武汉430205 宜昌人福药业有限责任公司湖北宜昌443000 中国科学院合肥物质科学研究院安徽合肥230000

以宜昌三峡制药有限公司保藏的黑暗链霉菌(Streptomyces tenebrarius)菌株A-0为出发菌种,采用改进后的气液相等离子体诱变法,选育安普霉素稳定高产突变菌株。诱变后挑取单孢子获得生长平板后,采用24孔板快速筛选法初筛后摇瓶复筛,高效... 详细信息

以宜昌三峡制药有限公司保藏的黑暗链霉菌(Streptomyces tenebrarius)菌株A-0为出发菌种,采用改进后的气液相等离子体诱变法,选育安普霉素稳定高产突变菌株。诱变后挑取单孢子获得生长平板后,采用24孔板快速筛选法初筛后摇瓶复筛,高效液相色谱法进行安普霉素含量检测及成品质量分析,同时结合杯碟法(枯草芽孢杆菌(bacillus subtitles)为指示菌)进行生物效价测定。结果显示:气液相等离子体诱变对安普霉素菌株突变效果较显著,处理75 s后,致死率为78.6%时正突变率达28.9%。孔板初筛得到5株效价增幅5%~30%的突变株,复筛后获得1株安普霉素稳定突变株A-4,其发酵水平达到0.375 mg/mL,生物效价达到3420 U/mL,较出发菌株生物效价提高了32.6%。经5代传代,发酵水平变化低于5%。结果表明:诱变用的活性离子导致细胞DNA损伤和破坏,在其自我修复的过程中形成了不完全修复的突变,最终获得了稳定遗传的突变菌株。

关键词：安普霉素黑暗链霉菌气液相等离子体诱变筛选

安普霉素及其联合用药对3种细菌体内抗生素后效应的研究

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中国畜牧兽医 2010年第7期37卷 186-188页

作者：王新崔一喆黄宝明倪宏波夏成邵红韩铁锁黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆1633119

采用菌落计数法和中性粒细胞减少小鼠股部感染模型,分别测定了安普霉素及其与阿莫西林、氨苄西林联用对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌的体内抗生素后效应(post antibiotic effect,PAE)。试验结果表明,安普霉素在体内对3种细菌均... 详细信息

采用菌落计数法和中性粒细胞减少小鼠股部感染模型,分别测定了安普霉素及其与阿莫西林、氨苄西林联用对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌的体内抗生素后效应(post antibiotic effect,PAE)。试验结果表明,安普霉素在体内对3种细菌均有较长的体内PAE,且随药物浓度的升高其PAE也相应的延长,呈明显的剂量依赖性。安普霉素与阿莫西林或氨苄西林联用对3种细菌的体内PAE呈现协同作用。

关键词：安普霉素抗生素后效应金黄色葡萄球菌沙门氏菌大肠杆菌