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缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞中微RNA表达谱及细胞凋亡变化

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协和医学杂志 2022年第4期13卷 626-631页

作者：王含必窦帅杰刘思邈张婉玉刘美芝邓成艳中国医学科学院北京协和医院妇科内分泌与生殖中心国家妇产疾病临床研究中心北京100730 中国医学科学院北京协和医院疑难重症及罕见病国家重点实验室北京100730 北京致成生物医学科技有限公司北京100176

目的探究缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞(endometrial glandular epithelial cell,EEC)中微RNA(micro-RNA,miRNA)表达谱变化及其对凋亡的影响。方法取对数生长期EEC,接种至六孔板(1×10^(5)个细胞/孔)并随机分为缺氧组和对照组。缺氧组... 详细信息

目的探究缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞(endometrial glandular epithelial cell,EEC)中微RNA(micro-RNA,miRNA)表达谱变化及其对凋亡的影响。方法取对数生长期EEC,接种至六孔板(1×10^(5)个细胞/孔)并随机分为缺氧组和对照组。缺氧组、对照组分别置于缺氧环境(O_(2)∶N_(2)∶CO_(2)体积比为1∶94∶5)和正常氧环境(O_(2)∶CO_(2)体积比为95∶5)中培养。培养4 h后收集细胞,加入Trizol并提取总RNA。采用高通量测序法测定两组EEC中miRNA表达谱变化,采用实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测miR-7704、miR-7974基因表达水平,采用流式细胞术检测EEC凋亡情况,采用蛋白印迹法(Western blot)检测p53和凋亡相关蛋白表达变化。结果高通量测序对21种常见miRNA表达水平检测后发现,与对照组比较,缺氧组EEC中16种miRNA表达上调,5种miRNA表达下调;其中对照组表达丰度较高的miR-7704和miR-7974在缺氧组表达下降最为显著(P均细胞术检测结果显示,缺氧组早期凋亡率及晚期凋亡率均高于对照组(P均细胞淋巴瘤-2表达降低(P均<0.05)。结论缺氧环境可诱导EEC中miRNA表达谱改变,其中以miR-7974表达下调最为显著。p53可能是miR-7974的靶蛋白,缺氧诱发的EEC凋亡可能通过下调miR-7974水平而促进p53表达实现。

关键词：子宫内膜腺上皮细胞缺氧 miR-7704 miR-7974 凋亡

缺氧环境下HIF-1调控PAD4介导的H3cit促进子宫内膜腺上皮细胞凋亡

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河北医学 2023年第9期29卷 1432-1438页

作者：黄勇罗书廖源王开举海南医学院第二附属医院海南海口570311

目的:探究缺氧环境下HIF-1以及PAD4对子宫内膜腺上皮细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:常氧和缺氧环境培养宫内膜腺上皮细胞CM-H058,qRT-PCR和Western blot检测HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达,流式细胞术检测细胞凋亡水... 详细信息

目的:探究缺氧环境下HIF-1以及PAD4对子宫内膜腺上皮细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:常氧和缺氧环境培养宫内膜腺上皮细胞CM-H058,qRT-PCR和Western blot检测HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达,流式细胞术检测细胞凋亡水平。通过慢病毒转染法将sh-NC、sh-HIF-1、oe-NC、oe-PAD4转染至CM-H058,缺氧环境培养并分组为:sh-NC组、sh-HIF-1组、sh-HIF-1+oe-NC组和sh-HIF-1+oe-PAD4组,检测各组细胞HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达和细胞凋亡水平;检测PAD4、H3cit和H3K27ac在Caspase3、Caspase7 TSS富集水平。结果:与常氧组比较,缺氧组HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达升高(P细胞凋亡水平升高(P细胞凋亡水平降低(P细胞凋亡水平升高(P子宫内膜腺上皮细胞凋亡。

关键词：缺氧环境缺氧诱导因子1 精氨酸脱亚胺酶4 子宫内膜腺上皮细胞凋亡

缺氧环境下miR-7851-3p可能通过抑制Wnt8b表达调控子宫内膜腺上皮细胞增殖

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生殖医学杂志 2022年第9期31卷 1253-1258页

作者：王含必窦帅杰刘思邈张婉玉刘美芝邓成艳中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇科内分泌与生殖中心疑难重症及罕见病国家重点实验室国家妇产疾病临床医学研究中心北京100730 北京致成生物医学科技有限公司北京100176

目的探究缺氧环境下影响子宫内膜腺上皮细胞增殖的潜在机制。方法分别在常氧和缺氧条件下(1%氧浓度)培养子宫内膜腺上皮细胞,提取RNA,高通量测序分析两种状态子宫内膜腺上皮细胞微小RNAs(microRNAs,miRNAs)的差异表达,并利用实时荧光定... 详细信息

目的探究缺氧环境下影响子宫内膜腺上皮细胞增殖的潜在机制。方法分别在常氧和缺氧条件下(1%氧浓度)培养子宫内膜腺上皮细胞,提取RNA,高通量测序分析两种状态子宫内膜腺上皮细胞微小RNAs(microRNAs,miRNAs)的差异表达,并利用实时荧光定量PCR(qPCR)对差异表达的miRNA进行验证;通过Targetscan网站分析差异显著的miRNAs与增殖相关的靶基因,采用Western blot检测Wnt8b蛋白的表达。细胞计数(CCK8)检测正常和缺氧条件下培养子宫内膜腺上皮细胞之间的细胞增殖的情况。结果miRNA高通量测序结果显示缺氧条件下miR-7851-3p、miR-125a-3p和miR-141-5p等16个miRNAs在子宫内膜腺上皮细胞中表达升高,qPCR检测结果显示缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞的miR-7851-3p的表达显著升高(P子宫内膜腺上皮细胞的Wnt8b蛋白表达降低。CCK8检测结果显示缺氧条件下子宫内膜腺上皮细胞增殖能力降低,尤其在培养36 h时差异显著(P子宫内膜腺上皮细胞在缺氧环境下miR-7851-3p表达上调,可能通过抑制Wnt8b蛋白的表达而抑制子宫内膜腺上皮细胞的增殖。

关键词：子宫内膜腺上皮细胞微小核糖核酸信号通路细胞增殖

血小板源性生长因子-BB及肝细胞生长因子对体外培养子宫内膜腺上皮细胞增殖及整合素αⅤβ3表达的影响

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中国实用妇科与产科杂志 2013年第6期29卷 454-458页

作者：张玮李静辉王秀霞中国医科大学附属盛京医院辅助生殖中心辽宁沈阳110004 沈阳市苏家屯中心医院妇产科辽宁沈阳110001

目的探讨血小板源性生长因子(PDGF)-BB及肝细胞生长因子(HGF)对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响及其最佳剂量,以及PDGF-BB及HGF对子宫内膜腺上皮细胞整合素αⅤβ3表达的影响。方法 2009年10月至2010年12月在中国医科大学附... 详细信息

目的探讨血小板源性生长因子(PDGF)-BB及肝细胞生长因子(HGF)对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响及其最佳剂量,以及PDGF-BB及HGF对子宫内膜腺上皮细胞整合素αⅤβ3表达的影响。方法 2009年10月至2010年12月在中国医科大学附属盛京医院分离人子宫内膜腺上皮细胞及基质细胞,分别在体外培养。用特异性抗体鉴定细胞纯度,用MTT法检测PDGF-BB及HGF对子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响,并用免疫组化方法检测子宫内膜腺上皮细胞整合素αⅤβ3的表达。结果分离的子宫内膜腺上皮细胞及基质细胞纯度高,特异性抗体鉴定细胞纯度分别为95%和97%。不同质量浓度的PDGF-BB及HGF作用后吸光度值均增加。PDGF-BB组吸光度值随着质量浓度的升高而升高,HGF组在质量浓度为20μg/L时为峰值。质量浓度为10μg/L的PDGF及20μg/L的HGF作用后子宫内膜腺上皮细胞整合素αⅤβ3的表达最强。结论 PDGF-BB及HGF均能促进体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞增殖,并能促进子宫内膜腺上皮细胞整合素αⅤβ3的表达。

关键词：血小板源性生长因子-BB 肝细胞生长因子子宫内膜腺上皮细胞细胞增殖整合素αⅤβ3

4种异黄酮改构化合物对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖活性的比较

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第三军医大学学报 2008年第16期30卷 1553-1556页

作者：陈诚常青张丽龙艾国平第三军医大学西南医院妇产科第三军医大学预防医学院防原医学教研室全军复合研究所烧伤创伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的观察4种异黄酮改构化合物(F8、F11、ZF3和ZF7)对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。方法采用胶原酶消化+二次筛网过滤法原代培养人子宫内膜腺上皮细胞。MTT法检测并比较4种化合物对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。结果成... 详细信息

目的观察4种异黄酮改构化合物(F8、F11、ZF3和ZF7)对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。方法采用胶原酶消化+二次筛网过滤法原代培养人子宫内膜腺上皮细胞。MTT法检测并比较4种化合物对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。结果成功培养原代人离体子宫内膜腺上皮细胞并稳定传代。4种异黄酮化合物作用于人子宫内膜腺上皮细胞24h后,低剂量(25μmol/L)F8显著促进细胞增殖(P细胞增殖(P细胞增殖(P细胞增殖(P细胞增殖外(P>0.05),各化合物在不同剂量下均抑制细胞增殖效应(P子宫内膜腺上皮增殖。F11抑制细胞增殖活性最强。

关键词：异黄酮改构化合物子宫内膜腺上皮细胞细胞增殖

miR-182靶向调控AQP5基因介导Wnt信号通路对子宫内膜异位症小鼠子宫内膜腺上皮细胞增殖、侵袭的调控机制

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中华内分泌外科杂志 2021年第3期15卷 254-258页

作者：刘永浩徐一玲山东省临沂市中医医院北城医院生殖医学科临沂276023 华中科技大学同济医学院附属梨园医院妇产科武汉430070

目的阐明miR-182靶向调控水通道蛋白5(aquaporin5,AQP5)基因介导Wnt信号通路对子宫内膜异位症(endometrrosis,EMs)小鼠子宫内膜腺上皮细胞增殖、侵袭的影响。方法构建EMs小鼠模型。取小鼠子宫内膜腺上皮组织并检测组织中miR-182、AQP5... 详细信息

目的阐明miR-182靶向调控水通道蛋白5(aquaporin5,AQP5)基因介导Wnt信号通路对子宫内膜异位症(endometrrosis,EMs)小鼠子宫内膜腺上皮细胞增殖、侵袭的影响。方法构建EMs小鼠模型。取小鼠子宫内膜腺上皮组织并检测组织中miR-182、AQP5的表达。酶联免疫吸附法检测正常和EMs模型小鼠炎性因子表达。随后分离小鼠子宫内膜腺上皮细胞。qRT-PCR和Western blot检测细胞中miR-182、AQP5、Wnt通路相关因子(Wnt-1、β-catenin)的表达。MTT、Transwell分别检测细胞的增殖活力和侵袭能力。结果与Normal组小鼠相比,EMs组小鼠子宫内膜腺上皮组织中miR-182表达降低,AQP5及Wnt-1、β-catenin表达升高(均P细胞实验中,过表达miR-182或沉默AQP5能抑制Wnt通路相关因子(Wnt-1、β-catenin)的表达。同时,细胞的增殖活力降低,侵袭能力下降(均P细胞转染sh-AQP5的影响能被miR-182 inhibitor抵消。结论上调miR-182能靶向抑制AQP5的表达,通过抑制Wnt信号通路的激活进而减少EMs小鼠子宫内膜腺上皮细胞的增殖、侵袭。

关键词： miR-182 AQP5 Wnt信号通路子宫内膜腺上皮细胞

水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离·培养和生物学特性研究

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安徽农业科学 2009年第18期37卷 8512-8514,8517页

作者：庄新杰段亚苹黄怡宁淑芳张明广西大学动物繁殖研究所广西亚热带生物资源保护利用重点实验室广西南宁530005

[目的]建立一种高效的水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞分离培养方法,为胚胎着床和子宫内膜相关疾病的分子生物学机制研究奠定基础。[方法]采用酶消化、刮取、系列过滤和差速贴壁相结合的方法分离水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,用... 详细信息

[目的]建立一种高效的水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞分离培养方法,为胚胎着床和子宫内膜相关疾病的分子生物学机制研究奠定基础。[方法]采用酶消化、刮取、系列过滤和差速贴壁相结合的方法分离水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,用免疫细胞化学法和台盼兰染色法检测分离细胞的纯度和活率。[结果]成功分离培养出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞;免疫荧光染色和细胞计数表明上皮细胞和基质细胞的纯度均达90%以上;台盼兰染色结果显示,上皮细胞的活率为91%,基质细胞的活率为78%。[结论]采用酶消化、刮取、过滤和差速贴壁相结合的方法可分离出高纯度的水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。

关键词：水牛子宫内膜腺上皮细胞基质细胞免疫细胞化学

植物雌激素两种单体对子宫内膜腺上皮细胞作用的比较

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中国实用妇科与产科杂志 2004年第8期20卷 475-476页

作者：薛晓鸥魏丽惠牛建昭王继峰北京大学人民医院妇产科 100044 北京中医药大学 100013

目的　探讨植物雌激素两种单体在浓度 5～ 80 μmol/L对人子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。方法　2 0 0 3年 8～ 12月应用胶原酶阶梯消化法 ,原代培养人子宫内膜腺上皮细胞 ,用MTT方法观察植物雌激素的主要成分金雀黄素和大豆甙元对细... 详细信息

目的　探讨植物雌激素两种单体在浓度 5～ 80 μmol/L对人子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。方法　2 0 0 3年 8～ 12月应用胶原酶阶梯消化法 ,原代培养人子宫内膜腺上皮细胞 ,用MTT方法观察植物雌激素的主要成分金雀黄素和大豆甙元对细胞体外增殖的影响。结果　低浓度的大豆甙元能促进子宫内膜腺上皮细胞轻度生长 ,随浓度的增加其作用明显 ,但当浓度达到 4 0 μmol/L ,抑制细胞生长 ;不同浓度的金雀黄素均抑制子宫内膜腺上皮细胞的增殖。结论　植物雌激素两种单体对人子宫内膜腺上皮细胞的作用是明显不同的 ,提示在应用植物雌激素时要考虑不同成分的差别。

关键词：植物雌激素子宫内膜腺上皮细胞细胞增殖金雀黄素大豆甙元异黄酮

稳定沉默水通道蛋白基因5（AQP5）对异位子宫内膜腺上皮细胞增殖及迁移的影响

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稳定沉默水通道蛋白基因5（AQP5）对异位子宫内膜腺上皮细胞增殖...

作者：辛廖冰浙江大学

学位级别：硕士

目的：探讨水通道蛋白5(Aquaporin5, AQP5)基因对异位子宫内膜腺上皮细胞(Endometrial glandular epithelial cells, EM)增殖及迁移的影响。方法：构建可靶向沉默AQP5基因的质粒,在293T细胞中包装形成病毒颗粒后,感染原代培养的异位... 详细信息

目的：探讨水通道蛋白5(Aquaporin5, AQP5)基因对异位子宫内膜腺上皮细胞(Endometrial glandular epithelial cells, EM)增殖及迁移的影响。方法：构建可靶向沉默AQP5基因的质粒,在293T细胞中包装形成病毒颗粒后,感染原代培养的异位子宫内膜腺上皮细胞。荧光定量RT-PCR及蛋白质印迹法检测异位子宫内膜腺上皮细胞中AQP5mRNA和蛋白表达,MTT法测定细胞增殖;Transwell技术检测细胞的体外迁移能力;蛋白质印迹法检测AKT活化情况。并构建裸鼠腹腔内子宫内膜异位症模型,考察阴性对照组和AQP沉默组子宫内膜腺上皮细胞在裸鼠腹腔内瘤体生长情况及腹膜转移情况。结果：与阴性对照组比,AQP5沉默组细胞的增殖和迁移能力降低(均P子宫内膜腺上皮细胞的增殖及迁移能力,并可能通过AKT信号通路发挥生物学效应;AQP5基因稳定沉默后降低了子宫内膜异位症模型裸鼠的子宫内膜异位病灶生长及腹膜转移能力。

关键词：子官内膜异位症子宫内膜腺上皮细胞 AQP5 细胞增殖细胞迁移